Векторы на основе фага лямда

Векторы на основе фага лямбда: преимущества

Векторы, сконструированные  на основе хромосомы бактериофага лямбда, серий Charon ,лямбдаgt11 и EMBL обладают существенными преимуществами перед плазмидными векторами .

Во-первых, векторы  на основе ДНК фага лямбда обладают значительно большей емкостью, в  них можно клонировать фрагменты  ДНК длиной от 5 до 25 т.п.о.

Во-вторых, фаговые  частицы, содержащие упакованную ДНК, способны проходить литический цикл развития внутри бактериальных клеток и, следовательно, образовывать стерильные пятна (бляшки) на газоне бактерий. Такие  бляшки содержат в концентрированном  виде как сами фаговые частицы  с упакованными в них рекомбинантными  молекулами ДНК, так и все продукты метаболизма зараженных бактериальных  клеток, включая белки и ферменты, которые появляются в результате экспрессии клонированных бактериальных  генов. Каждая бляшка возникает вследствие развития индивидуальной фаговой частицы, содержащей рекомбинантную ДНК только одного типа, а, следовательно, все фаговые  частицы одной бляшки (около 10¹⁰) представляют собой клон идентичных фаговых частиц. Все это позволяет легко обнаруживать в фаговых бляшках искомые ферментативные активности или последовательности нуклеотидов и идентифицировать клонированные последовательности ДНК.

К моменту появления методологии  генетической инженерии колифаг Я по сравнению с другими вирусами бактерий был наиболее полно изучен генетически и молекулярно-биологиче- ски. Это и обусловило то, что наряду с плазмид- ными векторами уже в 1974 г. появилась серия клонирующих векторов на основе фага Я.

В зрелых вирионах фага Я  ДНК находится в виде двухцепочечной линейной молекулы размером 48 502 пн. На концах молекулы ДНК имеются взаимокомплементарные GC-обога щенные одноцепочечные концы длиной 12 нуклеотидов (обозначаются как cosR и cosL). Сразу после попадания в клетку фаговая ДНК цикли-зуется по этим концам и функционирует в клетке в кольцевой форме. Район ковалентно зашитых casR и cosh называется cos-caumoM. Фаг Я является умеренным фагом, т. е. в зависимости от условий может развиваться в клетке либо по литическому, либо по лизогенному пути.

При литическом развитии происходит лизис клеток и образуются инфекционные фаговые частицы, при лизогенном молекула ДНК фага Я интегрируется  в бактериальную хромосому

преимущественно в одно место  между генами gal и bio и находится  в так называемом состоянии профага. Штамм, лизогенный по какому- либо умеренному фагу, обозначается следующим образом: за обычным наименованием бактериального штамма в круглых скобках указывается лизогенизирующий фаг, например, Е. coli С600(Яс1857).