Бабезиоз (пироплазмоз) собак: новые данные по старой проблеме

До сегодняшнего дня нет ясности в клинических последствиях носительства и хронического течения бабезиоза. Имеются данные как о тяжелом прогнозе для животных с таким течением бабезиоза, так и о полном выздоровлении. Имеются сообщения о том, что у большинства собак после незначительных клинических проявлений заболевания развивается преиммунное состояние, которое может закончиться иммуннообусловленными осложнениями или развитием клинического заболевания в более позднее время. Вместе с тем хроническая инвазия может вообще не иметь никаких последствий для собак, а в неблагополучных районах — даже приводить к устойчивости животных к пироплазмозу [2].

Имидокарба дипропионат и диминазин ацетурат являются широко используемыми антипироплазменными препаратами. Но в течение многих лет использовались и другие препараты с различным терапевтическим эффектом, например, такие как квинурониума сульфат, трипан синий, пентамидин, фенамидин, парваквон. В разных странах регистрационные комитеты ограничили применение многих из этих препаратов, так как некоторые (особенно диамидин – производное диминазина) ассоциированы с высокой токсичностью и многими побочными эффектами. В лучшем случае эти препараты приводили к улучшению клинических признаков и редко — к элиминации возбудителя из организма собаки [2].

Хорошие результаты получены при лечении бабезиоза, вызванного «мелкими» пироплазмами, особенно B. gibsoni, при применении клиндамицина в дозе 25 мг/кг каждые 12 часов. Данный препарат уменьшал паразитемию, при этом улучшались морфологические показатели крови в экспериментальном исследовании с заражением собак. Но препарат не удалял бабезий (пироплазм) из организма, и паразитемия наблюдалась еще на 108 день после обработки [14, 15].

Сообщается об экспериментальном заражении и последующей терапии 4 собак. Исследователи добились излечения собак, зараженных B. gibsoni, по следующему протоколу: диминазин в комбинации с клиндамицином и метронидазолом (15 мг/кг каждые 12 часов) и доксициклином (5 мг/кг каждые 12 часов) [14]. Успешным оказалась терапия этих собак также по следующему протоколу: азитромицин (10 мг/кг каждые 12 часов) и atovaquone (13.3 мг/кг каждые 8 часов) в течение 10 дней.

Эффективность лечения определялась по нормализации клинических признаков и отсутствию ДНК B. gibsoni в периферической крови, определяемой методом ПЦР. Десятидневный курс лечения заболевания, вызванного B. gibsoni, сопровождался клинической эффективностью и отсутствием побочных эффектов. Вместе с тем цена на atovaquone ограничивает применение этого препарата, особенно там, где он больше всего нужен, — в азиатских странах. Более дешевые формы atovaquone с proguanil вызывают тяжелые побочные эффекты со стороны ЖКТ у собак (доступность данных препаратов в РФ ограничена).

К сожалению, эта комбинация препаратов также не приводит к выздоровлению у некоторых собак, при этом быстро возникает устойчивость к atovaquone, вызванная мутацией гена b-цитохрома [14, 15].

Профилактировать бабезиоз (пироплазмоз), как и любое другое векторное заболевание, проще всего, не допуская нападения клещей на собак, но достичь этого практически невозможно, особенно в эндемичных районах, несмотря на широкое применение репеллентных спреев и ошейников [16].

Несколько препаратов были исследованы с целью их профилактического применения против бабезий, и ни один не дал надежных результатов. В Европе наиболее часто применяется однократная доза имидокарба (имидокарба дипропионат) в дозе 6 мг/кг, которая защищает собак от B. canis до 8 недель, его действие усиливается при одновременном применении доксициклина в дозе 5 мг/кг в день, особенно против высокопатогенных B. canis. [16].

Все данные по распространению различных видов бабезий получены из зарубежной литературы и касаются распространения бабезиоза за пределами Российской Федерации. Данные по распространению различных видов бабезий в России в доступной отечественной литературе мы не нашли.

Все данные по распространению различных видов бабезий получены из зарубежной литературы и касаются распространения бабезиоза за пределами Российской Федерации. Данные по распространению различных видов бабезий в России в доступной отечественной литературе мы не нашли, что и определило цель нашего исследования.

Цель исследования – установить наличие носительства бабезиоза у собак на территории Ростовской области, выяснить векторы передачи бабезиоза и виды бабезий, паразитирующих на собаках в данном регионе.

Материал и методы исследования. Исследования были проведены на 100 собаках, поступивших в клиники Ростовской области  в период с начала октября по конец ноября (2010 года).

Все собаки были клинически здоровы, и у них не ставился диагноз бабезиоз (пироплазмоз) за весь предшествующий весенне-летний период. У животных отбиралась и стабилизировалась EDTA кровь. Исследования на бабезиоз (пироплазмоз) проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

Анализ нуклеотидных полноразмерных геномов и участков различных генов бабезий, взятых из базы данных GenBank (NCBI) последовательностей, проводили с применением пакета прикладных программ «BioEdit 6.0». Исходя из нуклеотидного состава геномов бабезий разных видов,  нами были выбраны участки 18S рРНК-гена, наиболее консервативные среди известных изолятов. На консервативные участки были рассчитаны родоспецифические праймеры BabspF (5’-GTTGCTTCTTAGAGGGACTTTGG-3’) и BabspR (5’-GCTCTAAGCCCTGAGGAAGTTTAAG-3’), фланкирующие участок в 282 пары нуклеотидов (п.н.).

Для идентификации вида бабезий исследовалась кровь от собак на присутствие  видоспецифичных участков гена 18S рРНК. Исходя из диагностической ценности эксперимента для обнаружения кДНК конкретных видов бабезий, был выбран «стандартный» вариант ПЦР. С этой целью были сконструированы праймеры BrosF (5’-CTCACCAGGTCCAGACAAACG-3’) и BrosR (5’-GTAGGATTGACAGATTGATAGCTC-3’) к B. rossi, BcanF (5’-GATTCTTTGGGTGGTGGTGCATG-3’) и BcanR (5’-CGTTCTTAGTTGGTGGAGTGAT-3’) к B. canis и BvogF (5’-TGTCTGGTTAATTCCGTTAAC-3’) и BvogR (5’-GAACGAGACCTTAACCTGCTAACT-3’) к B. vogeli. Рассчитанные видоспецифичные праймеры для выявления кДНК имели высокую температуру отжига 62-64°С, это позволило объединить два этапа реакции (отжиг и элонгацию) в один. В результате удалось значительно снизить время постановки реакции, что не повлияло на её специфичность и чувствительность. Постановку ПЦР проводили в реакционной смеси стандартного состава с использованием 10 пкМ каждого праймера,  5 мкл раствора кДНК с добавлением 3 мM MgCl2.

Результаты исследования.

Нами были собраны клещи с территории Ростовской области с идентификацией их вида, результаты исследования занесены в таблицу 2.

Из таблицы видно, что наиболее ожидаемым видом бабезий, распространенным на территории Ростовской области, будет Babesia canis.

Таблица 2

Видовой состав иксодофауны Ростовской области

Виды иксодид

Количество особей

Виды бабезий, передаваемые клещами

Общее

Самцы

Самки

абс.

%

абс.

абс.

Dermacentor marginatus

3854

70,8

1348

2506

Babesia canis

Dermacentor pictus

1125

20,7

294

831

Babesia canis

Hyalomma scupense

86

1,6

44

42

Theileria sp.

Hyalomma detritum

75

1,4

31

44

нет данных

Rhipicephalus sanguineus

248

4,6

114

134

Babesia vogeli

Ixodes ricinus

53

0,9

28

25

Babesia canis

Из 100 собак, у которых была отобрана кровь на носительство бабезиоза, у 12 был получен положительный результаты в реакции ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией (рис. 12). Таким образом, носительство бабезиоза в Ростовской области составило 12%. Наибольшее распространение бабезиоз (пироплазмоз) получил среди таких пород как немецкая овчарка, метисы и таксы, но, учитывая незначительное количество собак, возможно, эта тенденция отображает только высокую распространенность данных пород в Ростовской области. Чтобы точнее ответить на этот вопрос, потребуются дополнительные исследования.

Таблица 3

Распространение носительства бабезиоза по породам собак

Порода собаки 

Номер исследования

Количество

животных

Процент, %

Немецкая овчарка

1, 56

2

16,7

Метис

7, 28

2

16,7

Такса

15,39

2

16,7

Ротвейлер

10

1

8,3

Курцхаар

29

1

8,3

Русский спаниель

35

1

8,3

Лабрадор

44

1

8,3

Питбультерьер

95

1

8,3

Не указано

33

1

8,3

Нами были проведены дальнейшие исследования материала, положительного на наличие родовых генов к бабезиям. Все 12 положительных материалов были дополнительно исследованы в реакции ПЦР для определения вида возбудителя.  Из 12 исследованных положительных материалов  клинически здоровых животных положительный тест на B. canis оказался у 9 животных, номера исследования – 1, 7, 15, 28,29, 33, 35, 44, 56. Что составило 9 % от числа всех исследованных животных и 75% — от числа всех носителей. В 4 случаях тест оказался положительным на B. vogeli, номера исследования – 1, 15, 33, 35, что составило 4 % от числа всех исследованных животных и 33,3 % — от числа всех носителей. На B. rossi все пробы оказались отрицательными. При этом, как видно из рис. 7 и цифровых значений исследования, все животные, зараженные B. vogeli, были заражены и B. canis. Таким образом, в Ростовской области широко распространена микст-инвазия B. vogeli и B. canis.

Вместе с тем пробы 10, 39, 95 оказались отрицательными на B. vogeli, B. canis и  B. rossi, что указывает, что в Ростовской области распространены не только эти бабезии  (пироплазмы), но и другие виды. Мы планируем продолжить исследование и в ближайшее время представить материал о распространении всех видов бабезий на территории Ростовской области.

  

Выводы. Таки образом, на сегодняшний день бабезиоз (пироплазмоз) собак остается важной клинической проблемой, несмотря на серьезные достижения последних лет в понимании патогенеза этого заболевания. Остаются нерешенными проблемы передачи инфекции и ее патофизиологический механизм, много нерешенных вопросов в диагностике заболевания и терапии этой инвазии, открытыми остаются вопросы профилактики данного заболевания.

В настоящее время  выделены неклассифицированные возбудители заболевания, не до конца выявлен ареал распространения, который, по всей видимости, будет продолжать расширяться из-за международного движения собак и расширения ареала клещей.

Носительство бабезиоза у собак в Ростовской области в конце периода передачи инвазии составляет 12 %, при этом инцидентность  носительства B. canis составляет 9 % от числа всех исследованных животных, или 75% — от числа носителей, микст-инвазия  B. canis и B. vogeli составила 4 % от числа всех исследованных животных, или 33,3 % — от числа всех носителей, в 25 % случаев идентифицировать вид бабезии  (пироплазмы) не удалось.

Необходимо напомнить, что, по данным зарубежных авторов, носительство может приводить к аутоиммунным анемиям, поражениям почек и развитию фатальной почечной недостаточности. Поставить диагноз методом световой микроскопии таким животным невозможно, и при обычном исследовании в ветеринарной клинике такие диагнозы проходят как криптогенные, а гибель животных связывают с другими причинами.

Литература

Peter J Irwin, Canine babesiosis: from molecular taxonomy to control /4th International Canine Vector-Borne Disease Symposium Seville, Spain. 26–28 March 2009.

Kjemtrup AM,Wainwright K, Miller M, Penzhorn BL, Carreno RA: Babesia conradae, sp. nov., a small canine Babesia identified in California. Vet Parasitol 2006, 138:103-111.

Zahler M, Rinder H, Schein E, Gothe R: Detection of a new pathogenic  Babesia microti-like species in dogs. Vet Parasitol 2000, 89:241-248.

Camacho AT, Pallas E, Gestal JJ, Guitiàn FJ, Olmeda AS, Goethert HK, Telford SR: Infection of dogs in north-west Spain with a Babesia microti-like agent. Vet Rec 2001, 149:552-555.

Criado-Fornelio A, Martinez-Marcos A, Buling-Saraña A, Barba-Carretero JC: Molecular studies on  Babesia, Theileria  and Hepatozoon in southern Europe Part I: Epizootiological aspects. Vet Parasitol 2003, 113:189-201

Matjila PT, Leisewitz AL, Ooshuizen MC, Jongejan F, Penzhorn B: Detection of a Theileria species in dogs in South Africa. Vet Parasitol 2008, 157:34-40.

Yamasaki M, Inokuma H, Sugimoto C, Shaw S, Aktas M, Yabsley MJ, Yamato O, Maede Y: Comparison and phylogenetic analysis of the heat shock protein 70 gene of  Babesia  parasites from dogs. Vet Parasitol 2007, 145:217-227

Birkenheuer AJ,Correa MT, Levy MG, Breitschwerdt EB:Geographic distribution of babesiosis among dogs in the United States and association with dog bites: 150 cases (2000-2003). J Am Vet Med Assoc 2005, 227:942-947.

Jefferies R, Ryan UM, Jardine J, Broughton DK, Robertson ID, Irwin PJ: Blood, bull terriers and babesiosis: further evidence for direct transmission of Babesia gibsoni in dogs. Aust Vet  J 2007, 85:459-463.

57. Lobetti RG, Jacobsen LS: Renal involvement in dogs with babesiosis. J Sth Afr Vet Assoc 2001, 72: 23-28.

de Scally MP, Lobetti RG, Reyers F, Humphris D: Are urea and creatinine values reliable indicators of azotaemia in canine babesiosis? J Sth Afr Vet Assoc 2004, 75:121-124.

Schoeman JP, Rees P, Herrtage ME: Endocrine predictors of mortality in canine babesiosis caused by Babesia canis rossi. Vet Parasitol 2007, 148:75-82.

Wulansari R,Wijaya A,Ano H, Horii Y, Nasu T,Yamane S, Makimura S: Clindamycin in the treatment of Babesia gibsoni infections in dogs. J Am Anim Hosp Assoc 2003, 39:558-562.

Suzuki K,Wakabyashi H,Takahashi M, Fukushima K,Yabuki A, Endo Y: A possible treatment strategy and clinical factors to estimate the treatment response in Babesia gibsoni infection. J Vet Med Sci 2007, 69:563-568.

Vercammen F, de Deken R, Maes L: Prophylactic treatment of experimental canine babesiosis (Babesia canis) with doxycycline. Vet Parasitol 1996, 66:251-255.

доктор биологических наук, профессор Карташов С.Н.,

кандидат ветеринарных наук Ключников А.Г.