Грипп птиц

Утята заболевают гриппом  в возрасте 7-45 дней, наиболее часто  в 10-25 дней, особенно после поздних  выводов в июле-сентябре. Инкубационный  период 2-5 дней. Острое течение гриппа утят сопровождается ринитом. Если поражается роговица, утята могут ослепнуть. Продолжительность острой формы болезни 5-10 дней. Смертность 30-60%. При подостром и хроническом течении отмечаются риниты, синуситы, отеки подкожной клетчатки, а также конъюнктивиты. Продолжительность болезни от 10 дней до двух месяцев. Смертность 5%, при наличии сопутствующих факторов значительно выше. Через 2-3 месяца после выздоровления возможны рецидивы болезни. Гриппу утят характерны судороги, параличи шеи, крыльев, ко¬нечностей. Встречается диарея с выделением жидких фекалий зеленоватого цвета. Перебо¬левшие птицы отстают в развитии и неудовлетворительно откармливаются.

У взрослых уток обычно отмечается субклиническое вирусоносительство.

Индейки, зараженные высокопатогенным штаммом вируса гриппа, могут переболеть сверхострой бессимптомной формой, со смертностью птиц 70-100%. При острой форме отмечается снижение или прекращение яйцекладки, угнетение, бронхиальные хрипы, глухой болезненный кашель, синуситы, отек подкожной клетчатки головы, диарея. Смертность до 80-90%. При подостром и хроническом течении указанные признаки и смертность птиц менее выражены, но продуктивность индеек значительно снижена. Встречается субклиническое течение гриппа индеек.

У фазанов, цесарок, перепелов  грипп также может протекать  с признаками нарушения функции дыхательной и пищеварительной систем. Грипп страусов. При заражении молодняка страусов вирусом гриппа H7N1, смертность достигает 60%. Болезнь проявляется симптомами, называемыми южно-африканскими фермерами как "болезнь зеленой мочи". Страусы старше 14-месячного возраста, переболевают ГП относительно легко, при максимальной смертности

10%, при этом гибель  птиц обычно провоцируется сопутствующими факторами, в виде нарушения условий содержания, стрессов и осложнений вторичной бактериальной микрофлорой (например Е. coli).

Большинство видов экзотических птиц, содержащихся в зоопарках, при заражении вирусом гриппа переболевает с признаками катарального воспаления верхних дыхательных путей. Чаще грипп встречается у молодняка первых 30 дней жизни, но возможен и у более взрослых птиц. При возникновении болезни в зоопарке грипп поражает до 90% водоплавающих птиц.

У людей, в основном работников птицефабрик и птицеперерабатывающей промышленности, заразившимся вирусом гриппа от больных птиц отмечаются кратковременные конъюнктивиты, риниты, возможен бронхит, иногда пневмония, особенно при осложнении вторичной микрофлорой. Но, в последние годы, у людей при заражении модифицированным вирусом гриппа птиц H5N1 на ранних стадиях болезни развивается первичная вирусная пневмония, осложняющаяся респираторным дистресс-синдромом. Пантропизм вируса и развивающийся в процессе инфекции токсикоз обуславливает поражение печени, почек, развитие лейко- и лимфопении, нарушение функции иммунной системы, частыми стали случаи поражения головного мозга.

Патологоанатомические изменения [2,3,20]

При классической чуме птиц они во многом сходны с изменениями, наблюдаемыми при болезни Ньюкасла. При вскрытии отмечают общесептические изменения и тяжелые сосудистые расстройства в виде многочисленных точечных и пятнистых кровоизлияний и обильного скопления в подкожной клетчатке и полостях тела серозной жидкости. Кроме того, регистрируют дистрофические изменения в паренхиматозных органах и воспаление слизистых оболочек респираторных органов пищеварительного тракта и мозга (энцефалит).

При наружном осмотре трупа обращает на себя внимание хорошая или средняя упитанность птицы, и лишь при более затяжном течении болезни упитанность бывает ниже средней. В полостях рта и носа большое количество тягучей слизи, слизистая оболочка этих полостей набухшая, покрасневшая, иногда пронизана кровоизлияниями. Привлекают внимание студенистые инфильтраты подкожной клетчатки в области головы, шеи, груди и конечностей и наличие в сердечной сорочке и грудобрюшной полости жидкости, иногда содержащей хлопья фибрина. Выявляют множественные точечные или пятнистые кровоизлияния главным образом на серозных покровах (пери- и эпикарде, серозном покрове грудобрюшной полости, кишечнике, железистого и мускульного отделов желудка).

В желудочно-кишечном тракте кровоизлияния в виде пояска преимущественно в железистом отделе желудка и на границе с мускульным отделом. В слизистой оболочке пищевода и кишечника кровоизлияния встречаются редко. В полости рта, пищевода, железистого отдела желудка и начальной части кишечника находят острое катарально-геморрагическое воспаление.

Печень дряблая, серо-глинистого цвета. Селезенка по величине нормальная или  несколько увеличена. Почки полнокровны, темно-красного цвета. Легкие кровенаполнены и отечны.

При гистологическом исследовании характерны изменения в центральной нервной системе. В воспалительной реакции ткани мозга преобладают дистрофически-некротические изменения в виде множественных очажков некроза при сравнительно слабой пролиферации клеток глии и стенок сосудов.

Ветеринарно-санитарная экспертиза [5]

Предубойная диагностика. Протекает болезнь остро, подостро и хронически. Вначале у птиц отмечают анорексию, взъерошенное оперение, потерю яйценоскости. Куры стоят с опущенной головой и закрытыми глазами. Видимые слизистые оболочки гиперемированы и отечны, нередко из слегка приоткрытого клюва выделяются тягучие слизистые истечения, носовые отверстия заклеены воспалительным экссудатом. У отдельных кур отмечают отечность сережек. Гребень и бородки темно-фиолетового цвета. Дыхание хриплое и учащенное, температура тела поднимается до 44°С. Наряду с респираторным симптомокомплексом возникает диарея (помет жидкий, окрашен в коричнево-зеленый цвет), а также атаксия, неврозы, судороги, манежные движения.

Послеубойная  диагностика. Область гортани отечная, гребень и сережки красно-синеватого цвета. В носовой полости и в клюве содержится кровянистая слизь. Легкие отечные, покрасневшие. На эпикарде находят точечные кровоизлияния. В серозных полостях фибринозный экссудат. На брюшине и плевре обнаруживают фибринозные нити и пленки. На серозных оболочках и в жировой ткани точечные или пятнистые кровоизлияния. В печени, селезенке, почках находят иногда кровоизлияния. На слизистой оболочке желудка и кишечника точечные или полосчатые кровоизлияния, местами фибринозные нити или рыхлые пленки. Стенки яйцеводов утолщены, гиперемированы и содержат сероватый налет или экссудат. Тушки чаще всего истощены, гидремичны, иногда пропитаны желтовато-кровянистым инфильтратом.

Ветеринарно-санитарная оценка. Больная гриппом птица к убою на мясо не допускается. При подтверждении диагноза при послеубойном осмотре все продукты убоя уничтожают.

Перо и пух от больной, подозрительной по заболеванию и подозреваемой в заражении чумой птицы сжигают.

Места содержания, убоя и переработки больных чумой птиц обезвреживают 2-3%-ным раствором горячей щелочи.

Локализация и выделение вируса

Вирус пантропен и  может быть обнаружен во многих органах и тканях больной птицы. Он выделяется с выдыхаемым воздухом и фекалиями, вирусоносительство в течение 2 мес.

Гемагглютинирующая активность. Все вирусы гриппа агглютинируют  эритроциты кур, морских свинок, кроликов, лошадей и других животных.

Культивирование вируса. Вирусы гриппа хорошо размножаются в куриных эмбрионах при заражении в аллантоисную или амниотическую полости и вызывают их гибель через 26-36 ч. Одни штаммы вируса гриппа птиц после адаптации размножаются в культуре клеток фибробластов куриных эмбрионов, почек обезьян, другие – в диплоидных культурах клеток человека, в миелобластах цыплят, в первичных культурах клеток лёгких эмбриона человека. Большинство штаммов вируса дают бляшки в первичной культуре клеток фибробластов. [3]

Лабораторная диагностика

Лабораторная диагностика  включает выделения вируса и его идентификацию, а также выявление специфических антител в сыворотке крови больной или переболевшей птицы. Для этой цели биопромышленность выпускает 2 диагностических набора: набор специфических антигенов и сывороток к ним для диагностики гриппа птиц 13 серотипов и диагностический набор для идентификации вируса Ньюкаслской болезни и гриппа птиц. В качестве вируссодержащего материала используют селезёнку, головной мозг, синусы, трахею, лёгкие, воздухоносные мешки, кишечник от больной птицы из свежих трупов. Материал в лабораторию доставляют в замороженном виде в термосе со льдом.

Испытуемой суспензией заражают:

- 9-10-дневные куриные  эмбрионы в аллантоисную или  амниотическую полость и инкубируют  в течение 72 ч. Эктраэмбриональную  жидкость каждого эмбриона проверяют нагемагглютинирующую активность в капельной реакции гемагглютинации с 1%-ной взвесью эритроцитов кур. При отсутствии положительного результата проводят ещё 3-5 слепых пассажей;

- культуру фибробластов  куриных эмбрионов, цитопатическое действие проявляется через 24-48 ч;

- цыплят 2-3-месячного  возраста любым методом, которые погибают через 36-72 ч в зависимости от дозы и вирулентности возбудителя.[19]

После выделения вируса проводят серологическую идентификацию  вируса, определяя специфические антигенные особенности штамма в РГЗА, РН в эмбрионах кур, ИФА, РТНА (реакция торможения нейраминидазной активности), реакция радиального гемолиза в РДП (определяется сходство гемагглютинина и нейраминидазы), в ПЦР – для определения генома вируса, выявления вирусной нуклеиновой кислоты в пробах патологического материала и в аллантоисной жидкости зараженных куриных эмбрионов, а так же для дифференциации антигенных подтипов вируса. Биопроба проводиться внутривенным заражением цыплят аллантоисной жидкостью эмбрионов кур, инфецырованных изолятом вируса гриппа птиц. Если из 10 цыплят в течение 10 дней гибнет 6 голов, то выделенный вирус – высокопатогенный. [1]

Разработана тест-система  на основе непрямого варианта ИФА (Н–ИФА) для выявления антител к вирусу гриппа птиц при исследовании проб сыворотки крови кур в одном разведении. Был использован антиген вируса гриппа птиц подтипа H5N1. Титр антител определялся по S/P отношению, измеренному в рабочем разведении исследуемых проб (1:100; 1:200 и 1:400). Для объективной оценки иммунного ответа был установлен позитивно-негативный порог и оптимальные значения оптической плотности контрольных сывороток. Специфичность и чувствительность метода сравнивалась с коммерческими наборами для выявления антител к вирусу гриппа птиц в Н–ИФА («Synbiotics», Франция), РТГА и РДП (ФГУ «ВНИИЗЖ»). Относительная чувствительность отечественной тест-системы на основе Н–ИФА составила 100%, относительная специфичность – 74%. Точность результатов, полученных в Н–ИФА и РТГА – 93%; РДП – 92%; Н–ИФА («Synbiotics») – 90%. Применение разработанной тест-системы при оценке поствакцинального иммунитета у 2-месячных цыплят, иммунизированных инактивированной эмульгированной вакциной против вируса гриппа птиц подтипа Н5, показало, что уже на 13-й день после вакцинации средний титр антител был положительным и составил 1:1818, к 28-му дню – 1:5354, а через 6 месяцев – 1:2659. Результаты, полученные в РТГА, коррелировали с Н–ИФА и составили: 4,8 lоg2 – 7,9 и lоg2 – 5,1 lоg2 соответственно. Делается вывод, что тест-система на основе Н–ИФА с использованием культурального антигена вируса гриппа птиц подтипа H5N1 обладает высокой чувствительностью и специфичностью и рекомендована при проведении мониторинговых исследований больших количеств образцов малого объема в лабораториях с самым простым оснащением. [11]

Диагноз и дифференциальный диагноз

Необходимо учитывать  эпизоотологические особенности, респираторные  признаки болезни и патологоанатомические  изменения, на которых основывается предварительная диагностика. Для постановки окончательного диагноза необходим комплекс лабораторных вирусологических исследований.

В лабораторию направляют патологический материал (легкие, печень, головной мозг и др.) от павших в острую стадию болезни птиц. Трупный материал должен быть свежим, допускается его замораживание до -60 °С с целью консервации вируса или сохранение в 50%-ном растворе глицерина. Для серологических исследований от кур берут парные сыворотки крови в различные периоды развития болезни. [3]

Для выделения вируса применяют методы заражения куриных эмбрионов, для идентификации выделенного вируса — РГА, РТГА и РСК. Биологическую пробу ставят на цыплятах 60...120-дневного возраста.

В целях ретроспективной  диагностики используют РТГА, РДП, ИФА  и ПЦР, для которых биологическая промышленность России выпускает соответствующие диагностические наборы. Антитела появляются у зараженных птиц с 4...10-ГО дня, двукратное исследование показывает нарастание антител. Для выявления антител к вирусу гриппа птиц наиболее эффективным в настоящее время считается набор для иммуноферментного анализа (производства АПП «Авивак»). [17]

Генерализованную септицемическую  форму гриппа необходимо дифференцировать от болезни Ньюкасла, респираторную  форму — от инфекционного бронхита, микоплазмоза, ларинготрахеита и других респираторных заболеваний птиц.

Ньюкаслская болезнь (НБ) и грипп птиц (ГП) – вирусные болезни, часто приносящие большой экономический  ущерб птицеводству во всем мире. Оба  вируса связаны с распространением от диких к домашним птицам, часто вызывают схожие признаки болезни, которые необходимо дифференцировать. Строгий надзор за дикими и домашними птицами играет важную роль в ранней диагностике болезни и принятии соответствующих мер борьбы. Для успешной дифференциальной диагностики необходим детальный анализ вирусных штаммов. Использован экспрессный и недорогой подход для одновременного определения вирусов НБ и ГП с помощью олигонуклеотидного микрочипа. Патотипы вируса НБ и подтипы гемагглютининов Н5 и Н7 вируса ГП были определены одновременно. Разные зонды, специфичные одному и тому же гену, были использованы, чтобы охватить разнообразные штаммы вируса и обеспечить всестороннее подтверждение генотипа, что гарантирует высокую специфичность и чувствительность. Проведено тестирование 24 изолятов вирусов и 24 различных комбинаций вирусов. Все вирусы были идентифицированы и типированы. Показано, что определение и типирование нескольких вирусов можно одновременно проводить с помощью олигонуклеотидного микрочипа. Метод позволяет быстро дифференцировать вирусы НБ и ГП, поражающих как диких, так и домашних птиц. [15]