Контрольная работа по "Микробиологии"

Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту

1. Депарафинированные срезы доводят до воды.
2. Окрашивают 20 мин в 1 % растворе парарозанилина или основного фуксина в 1 % уксусной кислоте (раствор красителя нагревают до кипения, охлаждают и фильтруют).
3. Промывают в 3 сменах дистиллированной воды.
4. Окрашивают 5 мин в 1 % кристаллического фиолетового в дистиллированной воде.
5. Быстро ополаскивают в 1 % растворе хлорида натрия.
6. Обрабатывают 30 с в смеси: 1 часть йода + 2 части йодида калия + 100 частей дистиллированной воды.
7. Промокают фильтровальной бумагой.
8. Дифференцируют, нанося на срез смесь равных объемов анилина и ксилола (1 — 2 мл); растворы сливают до тех пор, пока облачка красителя не перестанут отходить от среза.
9. Проводят через 3 смены ксилола.
10. Заключают в бальзам или любую смолу, растворенную в ксилоле.

Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.

Окраска бактерий по по Цилю-Нильсену

Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.

Методика окраски:

1. На фиксированный мазок  накладывают белую фильтровальную  бумагу и наливают карболовый  фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в в пламени до появления паров.	Карболовый фуксин-основная краска; прогревание-протрава.
2. Препарат промывают  водой, бумагу сбрасывают.
3. Препарат обесцвечивают  в 5% растворе серной кислоты.	Серная кислота-обесцвечивающий фактор.
4. Промывают водой
5. Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут	Синька Леффлера — дополнительная краска
6. Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией	Кислотоустойчивые бактерии и споры рубиново- красного цвета, а остальная микрофлора — синего цвета

Окраска по по Ауески

Метод окраски спор бактерий, заключающийся в обработке препарата горячим 0,5% раствором соляной кислоты с последующей фиксацией и окраской по способу Циля — Нельсена; споры окрашиваются в рубиново-красный цвет, вегетативные формы — в синий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3.Характеристика возбудителя сибирской язвы

Сибирская язва -это это острое инфекционное заболевание животных и человека, вызываемое бациллой сибирской язвы (Bacillus anthracis). Возбудитель С. я. образует споры, которые способны годами сохраняться в почве и выдерживать кипячение до 1 часа.

У животных сибирская язва характеризуется септицемией, серозно-геморрагической инфильтрацией подкожной и субсерозной соединительной ткани. Известна с глубокой древности. Часто её эпизоотии вызывали гибель огромной массы скота. В России в 1901 — 1914 годах заболело свыше 660 тысяч животных (без северных оленей), из которых 84% пало.

С. я. регистрируется на всех континентах, особенно распространена в Восточной Африке и Западной Азии. В 1972 году была зарегистрирована в 99 странах. К С. я. более восприимчивы овцы, козы, крупный рогатый скот, буйволы, лошади, ослы, олени, верблюды, менее восприимчивы свиньи; болеют также дикие копытные животные. В естественных условиях заражаются грызуны. Плотоядные звери и птицы, заразившиеся сибирской язвой при поедании трупов павших животных, способны длительное время выделять споры возбудителя с калом. Источник возбудителя инфекции — больное животное.

Как фактор передачи возбудителя сибирской язвы особенно опасен труп павшего животного, служащий источником заражения окружающей среды, главным образом почвы. Высокая устойчивость спор возбудителя во внешней среде ведёт к тому, что зараженные участки почвы десятки лет опасны для травоядных. Выносу спор из глубины почвы могут способствовать разливы рек, распашка и земляные работы в местах захоронения трупов животных. Основной путь заражения животных — с кормом и водой, чаще на пастбище. Возможно проникновение возбудителя через повреждённую кожу, слизистую оболочку рта, конъюнктиву. Заражение животных жалящими насекомыми чаще наблюдается в лесистых местностях.

Различают кожную, или карбункулёзную, и кишечную формы сибирской язвы.

Карбункулёзная форма С. я. (чаще регистрируется у лошадей, крупного рогатого скота) характеризуется появлением в месте внедрения возбудителя или вторично на голове, груди, плечах, вымени, а также на слизистых оболочках горячих, плотных и болезненных отёков. В дальнейшем на этих местах образуются язвы с неровными краями.

При кишечной форме С. я. отмечаются нарушения функции желудочно-кишечного тракта — тимпания у коров, колики у лошадей, выделение кровянистых масс из прямой кишки. Течение болезни молниеносное, острое, подострое и хроническое. В первом случае животное погибает в течение нескольких часов с явлениями судорог и одышки. Из носа и рта выделяется кровянистая пена, из прямой кишки — кровь тёмного цвета. При остром течении повышается температура тела, животные чрезвычайно угнетены (иногда крайне возбуждены), слизистые оболочки синюшны. Нарушается деятельность желудочно-кишечного тракта, беременные животные абортируют. Посмертно наблюдается выделение крови из естественных отверстий. Подостро и хронически С. я. протекает чаще у свиней, в виде ангины или фарингита, поражения подчелюстных или брыжеечных лимфатических узлов. Переболевшие животные приобретают длительный и стойкий иммунитет. Диагноз ставят на основании клинических и эпизоотологических данных, окончательно подтверждают его лабораторными исследованиями патологического материала. При подозрении на С. я. категорически запрещается вскрывать трупы павших животных.

 

Возбудитель — Bacillis anthracis — крупная (3—10x1 —1,5 мкм) неподвижная грамположительная спорообразующая аэробная палочка. В организме восприимчивых животных и человека, а также при росте на богатых белком искусственных питательных средах образует капсулу, что характерно для вирулентных штаммов. Споры образуются при условиях, неблагоприятных для жизнедеятельности вегетативной формы возбудителя; обязательны доступ атмосферного кислорода и температура среды в пределах 15—42 С. В невскрытых трупах споры не образуются. Спорообразование обеспечивает сохранение Вас. anthracis как вида. 
В мазках из патологического материала бациллы антракса обычно расположены одиночно или попарно, реже — короткими цепочками; в мазках из культур часто обнаруживают длинные цепочки. В окрашенных мазках концы палочек в цепочках выглядят обрубленными и даже вогнутыми, а вид самих цепочек напоминает бамбуковую трость. 
Вас. anthracis хорошо растет на обычньгх питательных средах. При росте на МПА образует типичные колонии R-формы — плоские, тускло-серые, шероховатые, с бахромчатыми (локонообразными) краями. В МПБ на дне пробирки образуется обильный рыхлый осадок, напоминающий кусочек ваты. При посеве уколом в столбик мясо-пептонного желатина возникает рост в виде елочки, обращенной вершиной вниз. При росте на МПА с пенициллином микробные клетки приобретают форму шаров, соединенных в цепочки (феномен «жемчужного ожерелья»). Бациллы антракса лизируются специфическими бактериофагами, обладают сложной антигенной структурой (выделены оболочечный, соматический и капсульный антигены). В организме восприимчивых животных и человека они продуцируют специфический, экзотоксин, включающий иммуногенный (протективный) антиген, воспалительный и летальный факторы.

 

Устойчивость. Вегетативные формы микроба малоустойчивы. В невскрытом разлагающемся трупе они лизируются уже через 7 сут, при 60 С погибают через 15 мин, при 100 С — мгновенно, под действием прямых лучей солнца — через несколько часов. Бациллы быстро погибают и при воздействии общепринятыми дезсредствами. Но при минус 10 С они сохраняют жизнеспособность до 24 дней, в замороженном мясе при минус 15 С — до 15 дней. Споры, напротив, чрезвычайно устойчивы. Они не погибают в разлагающемся трупном материале, годами сохраняются в воде, десятками лет — в почве. Засолка и сушка мяса и кож только способствуют сохранению спор. Сухой жар при 120—140 С убивает их лишь через 2—4 ч, автоклавирование при 120 С — через 5—10 мин, кипячение — через 15—30 мин. 10 %-ный раствор гидроокиси натрия, 4 %-ный раствор формальдегида убивают споры лишь после 2-часового воздействия. Более эффективны хлорсодержащие препараты. 
Эпизоотологические данные. Наиболее чувствительны к возбудителю сибирской язвы крупный и мелкий рогатый скот, лошади и другие однокопытные, верблюды, олени, дикие травоядные всех видов. Значительно менее чувствительны свиньи. Плотоядные, в том числе собаки и кошки, малочувствительны и болеют лишь при очень массовом заражении. Молодняк болеет чаще, чем взрослые животные. 
Источники возбудителя — больные животные, выделяющие бацилл с фекалиями, мочой, слюной. Особенно много микробов в кровянистой жидкости, вытекающей из естественных отверстий агонизирующих животных. Самый опасный фактор передачи возбудителя — труп погибшего животного. Все его органы и ткани содержат огромное количество бацилл. Вскрытие таких трупов недопустимо. Доступ атмосферного кислорода, происходящий даже при нарушениях кожного покрова, обусловливает образование спор возбудителя болезни и массовое обсеменение ими почвы и других объектов внешней среды. Не менее опасен убой больных животных. С мясом, шкурами, шерстью, костями павших или прирезанных животных споры могут переноситься на очень большие расстояния. 
Определенную роль в рассеивании возбудителя антракса играют дикие и домашние плотоядные и хищные птицы. Поедая и растаскивая части неубранных трупов, они обычно не заболевают, но продолжительное время выделяют споры с фекалиями. Известны случаи выделения возбудителя сибирской язвы от клинически здоровых грызунов, но эпизоотологическая значимость этих фактов пока неясна. 
С выделениями больных животных, с кровью при их убое, а главное — в случаях захоронения трупов споры возбудителя антракса попадают в почву. Наиболее благоприятны для возбудителя богатые гумусом почвы с нейтральной рН. В верхних слоях таких почв при благоприятных условиях температуры и влажности даже возможна вегетация спор с последующим размножением и новой споруляцией вегетативных форм. Соответственно почву признают не только фактором передачи, но и резервуаром возбудителя сибирской язвы. 
С длительным сохранением спор в почве связана стационарность сибирской язвы. Обсемененные спорами в прошлом участки почвы могут быть в самых разных зонах страны, и очень многие из них неизвестны, не учтены. В результате водной и ветровой эрозии, при разливах рек, селях, при проведении земляных работ на таких участках споры выносятся на поверхность почвы, переносятся в другие места, обусловливая опасность заражения животных. 
Возбудитель болезни попадает в организм животного с кормом или с водой, обычно при выпасе на инфицированных участках пастбищ. Заражению способствуют наличие повреждений слизистых оболочек ротовой полости и глотки, гастриты, гастроэнтериты. Резистентность животных снижается при голодании, авитаминозах, перегревании, простудах. Нельзя исключать возможность аэрогенного заражения овец при вдыхании пыли, содержащей споры возбудителя. При обилии кровососущих насекомых возможен трансмиссивный путь заражения; Известно, что слепни могут воспринять возбудителя сибирской язвы не только от больных животных или трупов, но и из инфицированных водоемов, почвы. 
Пути заражения определяют сезонность сибирской язвы. Обычно случаи болезни возникают в теплое время года, особенно при выпасе животных на пастбищах со скудным и сухим травостоем. Однако и при стойловом содержании скота возможны единичные вспышки сибирской язвы, связанные с использованием контаминированных спорами кормов (мясо-костная мука, сено или солома, заготовленные на инфицированных участках). 
Патогенез. Проникшие в организм животного споры возбудителя вегетируют. Агрессины и экзотоксин нейтрализуют местные средства защиты, и бациллы размножаются, проникают в лимфатическую систему, заносятся в лимфоузлы, а затем в кровь, где захватываются фагоцитами и разносятся по всему организму, наиболее интенсивно наводняя селезенку. Важнейшее патогенетическое значение имеют экзотоксин и капсульное вещество бацилл. Наличие капсул предотвращает фагоцитоз, а токсин разрушает клетки, фиксировавшие бацилл. Освободившиеся бациллы вновь попадают в кровь. Развивается септицемия с сильнейшей интоксикацией. Прогрессирует гипоксия, нарушается кислотно-щелочное равновесие, кровь теряет способность свертываться. В случае заражения ослабленного животного высоковирулентным штаммом возбудителя септицемия может развиваться сразу, и смерть наступает уже через несколько часов. 
Карбункулы, возникающие при заражении животного через поврежденную кожу или вторично, представляют собой очаги серозно-геморрагического воспаления в местах локализации бацилл. Они размножаются в этих очагах и продуцируют экзотоксин, вызывая явления интоксикации. Затем бациллы проникают в регионарные лимфоузлы, вызывая геморрагический лимфаденит, а из лимфоузлов — в кровь. Таким образом, и в этих случаях может развиваться септицемия. 
Течение и симптомы. Особенности течения и проявления болезни зависят от степени устойчивости животного, пути его заражения, дозы и вирулентности возбудителя. Обычная продолжительность инкубационного периода 1—3 дня. 
Различают две основные формы болезни — септическую и карбункулезную. С учетом преимущественной локализации патологических изменений выделяют также кожную, кишечную, легочную и ангинозную формы сибирской язвы. Такое деление условно, но оно облегчает описание болезни. В принципе же септицемия может возникнуть и при первичной карбункулезной форме сибирской язвы. С другой стороны, карбункулы как вторичное явление нередко развиваются при септической форме болезни. Другие локальные патологические изменения встречаются в разных сочетаниях и тоже или развиваются на фоне септицемии, или обусловливают ее возникновение. 
Обычно болезнь протекает молниеносно и остро, реже — подостро. Молниеносное течение сибирской язвы преобладает у овец и коз, несколько реже регистрируется у крупного рогатого скота и лошадей. Животные погибают внезапно, признаки болезни трудно заметить. Заболевшая овца, например, начинает тяжело дышать, дрожит, падает в судорогах и через несколько минут погибает. Из носовых отверстий и рта выделяется кровянистая пена. У лошадей и крупного рогатого скота отмечают некоторую возбужденность, быстро сменяющуюся угнетением, одышку, синюшность слизистых оболочек. Температура тела повышается до 41—42 °С. Через несколько минут, реже через несколько часов, животное погибает, обычно также в судорогах. 
При остром течении болезни у крупного рогатого скота и лошадей повышается температура тела, возникает одышка, отмечается мышечная дрожь. Животные отказываются от корма, у рогатого скота прекращается жвачка, у коров — лактация. У лошадей нередки приступы колик, у крупного рогатого скота может быть пневмония. Иногда отмечают запор или, напротив, кровавый понос. Кровь обнаруживают и в моче. Животные быстро слабеют, усиливается одышка, слизистые оболочки становятся цианотичными, нередко — с точечными кровоизлияниями. Могут возникать отеки в области глотки и гортани, шеи, подгрудка, живота. Животные обычно погибают на 2—3-й день болезни. В период агонии из носовых отверстий и рта выделяется кровянистая пенистая жидкость. 
При подостром (до 6—8 дней) течении болезни отмечают те же симптомы, которые нарастают несколько медленнее и временами ослабевают, что создает иллюзию выздоровления. Однако вскоре состояние животного вновь ухудшается, и наступает смерть. 
Главный признак хронического (2—3 мес) течения сибирской язвы — прогрессирующее истощение. Подозрение на сибирскую язву в таких случаях возникает после убоя животного: при осмотре туши обнаруживают студенисто-кровянистые инфильтраты под нижней челюстью и поражения подчелюстных и заглоточных лимфоузлов. 
Абортивная форма болезни проявляется незначительным подъемом температуры тела и обычно заканчивается выздоровлением. 
При карбункулезной форме сибирской язвы в разных частях тела животного, но чаще в области головы, груди, плеч и живота, появляются отечные припухлости — плотные, горячие и болезненные. Вскоре они становятся безболезненными, холодными, тестоватыми. В центре припухлости может начаться омертвение и изъязвление тканей. Карбункулы появляются в местах внедрения возбудителя или возникают как вторичные признаки при остром или подостром течении болезни. Иногда геморрагические инфильтраты в слизистой оболочке обнаруживают при осмотре ротовой полости больных животных. 
При кишечной форме сибирской язвы на фоне явлений септицемии отмечают (чаще у лошадей) приступы колик, запор, а затем — кровавый понос. Легочная форма болезни характеризуется признаками прогрессирующей геморрагической пневмонии и острого отека легких. 
Ангинозная форма сибирской язвы преобладает у свиней. Для нее типичны продолжительное течение, незначительное повышение температуры, признаки ангины и фарингита. Отмечают отечность шеи, одышку и затрудненность глотания, кашель. Больная свинья хрипит, давится при приеме корма, видимые слизистые оболочки цианотичны. При сильном отеке глотки и гортани животное может погибнуть от удушья. Но в большинстве случаев симптомы ангины и фарингита слабо выражены, и подозрение на сибирскую язву возникает лишь при послеубойном осмотре свиных туш. Патологоанатомические изменения. При подозрении на сибирскую язву вскрывать трупы нельзя. Но могут быть случаи, когда такое подозрение при жизни животного не возникает. Знание наиболее характерных патологоанатомических изменений позволяет заподозрить болезнь, прекратить вскрытие и принять меры, предупреждающие инфицирование объектов внешней среды. 
Трупы животных, павших от сибирской язвы, быстро разлагаются и поэтому обычно вздуты, окоченение в большинстве случаев не наступает или слабо выражено. Из естественных отверстий часто выделяется кровянистая жидкость, а иногда — кровь. В разных местах, но чаще в области подчелюстного пространства, шеи, подгрудка, живота, могут быть тестоватые припухлости. Кровь темная, несвернувшаяся (дегтеподобная). Сосуды подкожной клетчатки переполнены кровью, снятая шкура с внутренней стороны темно-красная. Подкожная клетчатка с кровоизлияниями, местами со студенисто-геморрагическими инфильтратами. Такие же инфильтраты могут быть под реберной и легочной плеврой. Серозные покровы усеяны кровоизлияниями. В грудной и брюшной полостях можно обнаружить серозно-геморрагический экссудат. Все паренхиматозные органы полнокровны. 
Селезенка обычно сильно увеличена, с размягченной пульпой; соскоб с поверхности разреза — обильный, дегтеподобный. Но в некоторых случаях изменения селезенки слабо выражены. Печень — дряблая, почки — с многочисленными кровоизлияниями. Сердце заполнено темной несвернувшейся кровью, на эндокарде — кровоизлияния. Легкие отечны, с множеством подплевральных кровоизлияний. Бронхи и трахея заполнены кровянистой пеной. Слизистая оболочка тонких кишок обычно набухшая, усеянная кровоизлияниями. При кишечной форме болезни в ней местами обнаруживают студенисто-геморрагические инфильтраты. 
При вскрытии трупов свиней обнаруживают патологические изменения миндалин, подчелюстных, заглоточных и шейных лимфоузлов — геморрагический лимфаденит. В области глотки и гортани видны студенисто-геморрагические инфильтраты. 
Очень важно учитывать, что в случаях гибели животных при молниеносном течении болезни могут отсутствовать характерные для сибирской язвы патологические изменения. 
Диагноз. Обязателен учет эпизоотологических данных, клинической картины болезни и результатов осмотра трупов. Внезапная гибель животных при пастбищном содержании на ранее неблагополучной территории или после проведения земляных работ, сильного ливня или паводка дает все основания заподозрить сибирскую язву. Необходимо учитывать также остроту и тяжесть болезни, ее септицемический характер, наличие карбункулов, а у свиней — признаков ангины. Важны и такие данные, как быстрое разложение трупов, отсутствие их окоченения, наличие кровянистых истечений. Подозрение на сибирскую язву, возникшее с учетом всех этих данных, является законным основанием для экстренного проведения мероприятий по профилактике заражения людей и животных, однако диагноз должен быть подтвержден лабораторными исследованиями. 
В лабораторию направляют ухо, отрезанное со стороны, на которой лежит труп животного, или мазок крови из надреза уха. Ухо туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между перевязками. Место отреза на трупе прижигают. От трупов свиней направляют участки отечной ткани, заглоточные, подчелюстные и другие патологически измененные лимфоузлы. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа (кроме трупов свиней), на исследование направляют часть селезенки. Взятый патологический материал помещают в чистые пробирки или банки, а высушенные мазки — в чашки Петри, которые обертывают плотной бумагой. Мазки не фиксируют. Посуду с патологическим материалом упаковывают во влагонепроницаемую тару, опечатывают и отправляют в лабораторию с нарочным. 
В лаборатории прежде всего проводят микроскопическое исследование присланного материала, в том числе микроскопию с применением люминесцирующих сывороток. По результатам микроскопического исследования немедленно дают предварительный ответ. Для выдачи окончательного заключения делают посевы патологического материала на питательные среды, заражают лабораторных животных, при необходимости ставят реакцию преципитации, идентифицируют выделенные культуры. Загнивший патологический материал исследуют только в реакции преципитации.

Дифференциальный диагноз. Некоторое сходство клинической картины и патологоанатомических изменений делает необходимым исключение эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота, брадзота и энтеротоксемии овец, а также газовых отеков, пастереллеза, пироплазмидозов, лейкоза, отравлений, колик, тимпании, солнечного и теплового удара. 
Лечение. Учитывая остроту течения сибирской язвы, к лечению изолированных заболевших животных приступают немедленно. Применяют гипериммунную противосибиреязвенную сыворотку 
или специфический гамма-глобулин в лечебных дозах. Их вводят подкожно (по 25—30 мл в одно место), а в тяжелых случаях — внутривенно. Перед введением сыворотку подогревают на водяной бане до 37—38 °С. В целях профилактики анафилаксии рекомендуется чужеродную сыворотку вначале инъецировать под кожу в дозе 0,5—1 мл, а затем, через 15—30 мин, ввести остальное количество. Если через 5—6 ч температура тела больного животного не снизится, сыворотку вводят повторно. Лечебная эффективность гамма-глобулина значительно выше, чем эффективность сыворотки.

 
Применение гипериммунной сыворотки или гамма-глобулина комбинируют с внутримышечными инъекциями антибиотиков. Наиболее эффективны сочетания пенициллина или бициллина с антибиотиками тетрациклинового ряда. Курс антибиотикотерапии — 3—4 дня. 

 

 

Иммунитет. У переболевших сибирской язвой животных развивается стойкий и продолжительный иммунитет. Первостепенная роль в иммуногенезе принадлежит протективному антигену — одному из компонентов экзотоксина, продуцируемого возбудителем болезни. Для создания активного искусственного иммунитета в настоящее время широко используют живую споровую лиофилизированную вакцину из штамма 55 и аналогичную жидкую вакцину. Иммунитет формируется через 10 дней после прививки и сохраняется не менее 12 мес. Используют и живые вакцины СТИ — жидкую и сухую. Для создания пассивного иммунитета, продолжающегося до 14 дней, применяют гипериммунную противосибиреязвенную сыворотку.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4.Методы бактериологического исследования патматериала на дерматомикозы.

Бактериологическое исследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекционных болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, которые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептических условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию,  в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, основные клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения. Цель исследования включает 3 основных метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патологического или другого исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологических, культурально-биохимических, антигенных и патогенных свойств бактерий.  Начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение).

 Микологическое исследование – комплекс методов, применяемых для обнаружения и идентификации грибов в исследуемом материале. 
 
Микологическое исследование при диагностике микозов включает микроскопию патологического материала для обнаружения возбудителя в органах и тканях больного животного, выделение чистой культуры и ее идентификацию. В неясных случаях проверяют патогенность выделенных культур биологической пробой. Дополнительно используют серологический, аллергический, люминесцентный методы диагностики. Гистологическое исследование применяют для диагностики глубоких микозов, возбудитель которых не культивируется на питательных средах (риноспоридиоз). 
 
Отбор патологического материала при дерматомикозах производят с периферии свежих, пораженных очагов (корочки, волосы); при эпизоотическом лимфангите, споротрихозе, актиномикозе, актинобациллезе материал извлекают из не вскрывшихся абсцессов, а также исследуют гранулематозные очаги после предварительной дезинфекции их; при висцеральных микозах исследуют гной, мочу, органы и ткани, соскобы со слизистых оболочек. Патологический материал помещают в стерильные чашки Петри (при дерматофитозах можно в чистые стерильные пакеты). Для лучшего выявления элементов грибов из патологического материала готовят препараты на предметном стекле в капле 10-20%-ного раствора едкого натра с последующим добавлением 50%-ного водного раствора глицерина. Микроскопируют неокрашенные препараты (реже окрашенные по Граму, лактофуксином, хлопчатобумажной синью, Романовскому-Гимзе) при малом увеличении, затем при х40. Лучшие результаты исследования дает фазово-контрастная микроскопия. 
 
Первичную культуру возбудителей получают посевом патологического материала на агар Сабуро, сусло-агар, кровяной агар и др.(10-12 пробирок). При загрязнении посторонней микрофлорой можно применить предпосевную обработку патологического материала (700 этиловым спиртом или 2-4%-ным раствором формалина 3-6 мин.) или добавить антибиотики в питательную среду. Оптимальный рН питательной среды для патогенных грибов составляет 6,0-7,2, температура культивирования 26-300 С, для отдельных представителей 370 С. Посевы выдерживают до 30 суток, так как первичные культуры чаще развиваются медленно (напр. Tr. verrucosum). Идентификацию культур проводят по культурально-морфологическим признакам, ферментативной активности на специальных средах. При микроскопии культур (непосредственно в чашках или препаратах) выявляют мицеальные тяжи, склероции, плодовые тела, строение и характер ветвления спорангиеносцев, конидиеносцев, форму спорангиев, расположение конидий (цепочками или одиночно), отношение к окраске. Патогенность культур проверяют заражением белых мышей, морских свинок, кроликов через скарифицированную кожу, подкожно, интраперитониально, внутривенно, ингаляционным методом. Серологические реакции (агглютинации, преципитации, РСК и др.), аллергические внутрикожные пробы применяют в комплексе с другими методами при диагностике преимущественно кандидамикоза, гистоплазмоза, эпизоотического лимфангита. Люминесцентным методом выявляют у животных микроспорию.