Отчет по практике вирусологии

     В хозяйстве  регулярно проводятся диагностические  исследования на лейкоз КРС.

Взятие  и подготовка материала для диагностического исследования на лейкоз. Для гематологического исследования кровь берут из яремной вены в пробирки с антикоагулянтом – 10%-ным раствором динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, трилон В) из расчета 0,02 мл раствора на 1 мл крови. Не разрешается брать кровь от животных за 15 дней до отела и 15 дней после него. Для серологического исследования кровь берут от животных в возрасте 6 месяцев и старше. В лабораторию в термосе со льдом направляют 5-6 мл сыворотки. Для гистологического исследования кусочки пораженных органов (селезенки, лимфоузлов, грудной кости, печени, почек, легких, сердца и правого ушка сердечной мышцы, стенки сычуга, матки и скелетных мышц) посылают в свежем виде в термосе со льдом или в 10%-ном растворе формалина.

Стерилизация  лабораторной посуды.

     Стерилизация – обеспложивание; уничтожение в каком-либо материале патогенных и непатогенных микроорганизмов в вегетативной и споровой формах.

     Подготовка посуды для стерилизации. Лабораторная посуда должна быть чисто вымытой и простерилизованной. Для мытья используют растворы мыла или химические моющие средства. Новую посуду предварительно кипятят в 1-2%-м растворе соляной кислоты, во избежание последующего выщелачивания стекла. Вымытую в проточной воде посуду ополаскивают дистиллированной водой и высушивают.

     Бактериологические  пробирки. Конические, матровые колбы  закрывают ватно-марлевыми пробками, состоящими из плотно скрученных  валиков ваты, покрытых слоем  марли. Для бактериологических пробирок также разработаны металлические пробки в виде наружных колпачков. Следует учитывать, что стерилизация ватных пробок при высокой температуре приводит к выделению из ваты веществ, ингибирующих рост некоторых чувствительных бактерий, например бруцелл.

     При монтаже  пипеток в верхний конец вставляют  ватный тампон. У пипеток Пастера  должен быть запаян капилляр. Каждую мерную пипетку заворачивают  длинной полоской бумаги шириной  4-5 см, начиная с носика, винтообразно  по всей длине. Пипетки Пастера заворачивают в бумагу по 10-20 штук, пробирки – по 15-20 штук. Все виды пипеток лучше хранить до и после стерилизации в специальных металлических пеналах. Пробки на колбах дополнительно покрывают колпачками из бумаги.

     Чистые  чашки Петри в собранном виде перед стерилизацией заворачивают в бумагу по 3-4 штуки. После стерилизации бумага предохраняет стерильную посуду от загрязнения микрофлорой.

     Посуду  перед стерилизацией размещают  в сушильном шкафу не слишком  плотно, чтобы обеспечить циркуляцию  воздуха, и следят, чтобы температура не превышала 180˚С, так как при более высокой температуре бумага и вата будут обугливаться. После окончания стерилизации сушильный шкаф не открывают до тех пор. Пока температура в нем не снизится до 70-80˚С, поскольку резкий перепад температур может привести к разрушению стекла.

     Если посуда  предназначена для стерилизации  в ней питательных сред автоклавированием  под давлением не менее 1 атм,  то ее предварительно не стерилизуют.  При стерилизации сред текучим  паром или в автоклаве под давлением не более 0,5 атм необходимо использовать стерильную посуду.

Стерилизация  сухим нагретым воздухом. Метод применяют для стерилизации чистой стеклянной посуды. Для этого используют печь Пастера – специальный сушильный шкаф с двойными стенками. Снаружи он облицован теплонепроницаемым материалом. В верхней его части находится термометр. Между теплонепроницаемой обшивкой и внутренним металлическим корпусом на дне помещен автоматический электронагревательный элемент. При включении сушильного шкафа в электросеть воздух внутри него нагревается. По достижении заданной температуры отмечают время начала стерилизации. Режим стерилизации: при температуре 155-160˚С – экспозиция 2 ч, при 165-170˚С – 1-1,5 ч, при 180˚С – 1 ч. По истечении времени стерилизации нагревание прекращают.

Автоклавирование. Это стерилизация паром под давлением в сочетании с высокой температурой в специальном аппарате – автоклаве. При встрече насыщенного пара с более холодным объектом пар конденсируется, превращаясь в воду, в результате чего выделяется большое количество тепла. Кроме того, уменьшается объем пара, что способствует его проникновению во внутренние части стерилизуемого материала. Обязательное условие – поступление действительно насыщенного пара, чтобы его соприкосновение с холодным предметом вело к немедленной конденсации и нагреванию. Промышленность выпускает вертикальные и горизонтальные автоклавы.

     Вертикальный  автоклав – это двустенный  металлический котел цилиндрической  формы, закрываемый герметично  крышкой. Между стенками через специальный кран с воронкой заливают воду до определенного уровня. Внутренняя стенка котла в верхней части снабжена отверстиями, в нижней – краном, через который при нагревании воды пар вытесняет воздух из котла. Сверху на автоклав надевают металлический защитный каркас, причем между ним и самим автоклавом должно быть свободное пространство. Автоклав нагревают включением в электросеть.

     Автоклав  загружают стерилизуемым материалом, закрывают крышку и кран, через  который заливали воду, нижний кран временно отваляют открытым. Нагреваемая вода между стенками автоклава кипит, образующийся пар поднимается вверх и через верхние отверстия внутренней стенки проходит внутрь котла, толчками вытесняя воздух через нижний открытый кран. Когда воздух весь вытеснен, и пар начинает выходить ровной струей, нижний кран закрывают. В результате давление пара внутри автоклава повышается. Началом стерилизации считают момент, когда давление достигает заданной величины (по показателям манометра). Нагрев регулируют на протяжении всей стерилизации, поддерживая давление пара на одном уровне. При чрезмерном повышении давления внутри автоклава предусмотрен предохранительный клапан, через который избыток пара автоматически выходит наружу.

     При повышении  давления пара соответственно повышается и температура в автоклаве.

     Манометр  показывает давление пара без  учета окружающего атмосферного  давления (760 мм рт. ст.). По истечении  времени стерилизации автоклав  отключают. После остывания при  нулевом показании манометра открывают кран для спуска пара.

     Горизонтальный  автоклав отличается от вертикального  конструкцией, но принцип действия  у него такой же.

Образцы бланков, заполняемых при отправке патологического  материала в лабораторию.

Список использованной литературы.

1. Кравченко А. Т. «Принципы организации и режим работы вирусологических и риккетсиозных лабораторий».

2. Т. С. Костенко и др. «Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии». Москва, «Колос», 2001 г.