Микробиологическая диагностика брюшного тифа

ГОУ ВПО

«СУРГУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

« Ханты-Мансийского автономного округа – Югры »

Медицинский институт

Кафедра инфекционных, кожных и венерических заболеваний

 

 

 

 

 

 

 

Реферат

По микробиологии

Тема: «Микробиологическая диагностика брюшного тифа»

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Выполнил: студент

МИ, группы 501-31Б

Дильмухаметов Артем Вильевич

Проверил: кандитат медицинских наук,

доцент

Прокопьев Михаил Николаевич

 

 

 

 

 

Сургут, 2015 г

Брюшной тиф и паратифы – острые инфекционные заболевания, сопровождающиеся бактериемией, поражением лимфоидной ткани кишечника, лихорадкой и общей интоксикацией.

Основной механизм передачи – фекально-оральный; наиболее часто возбудитель передается через молоко, молочные и мясные продукты. Микробы проникают в его лимфатический аппарат – пейеровы бляшки и солитарные фолликулы, в которых усиленно размножаются. Из лимфатических узлов бактерии проникают в кровь – наступает бактериемия. Постепенно повышается температура, появляется слабость, недомогание. С выделением эндотоксина нарастает интоксикация. Током крови микробы разносятся во все органы и ткани. В основном накапливаются в клетках ретикулоэндотелиальной системы: в печени, селезенке, костном мозге. Попадая из печени в желчный пузырь, сальмонеллы тифа находят там благоприятные условия для своего развития и вместе с желчью поступают вновь в кишечник, откуда выделяются с испражнениями. Часть их вновь внедряется в уже сенсибилизированные возбудителем лимфатические узлы тонкого кишечника, вследствие чего в них развиваются некротические изменения, приводящие иногда к изъявлению стенки и прободению кишечника.

Печень и селезенка увеличиваются . Живот вздут, выражены симптомы энтерита. Осложнения: перфорация тонкой кишки и кишечное кровотечение. Сальмонеллы тифа находят в испражнениях, моче, крови.

Морфологические и культуральные свойства

Короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, длиной 1-3,5 мкм, диаметром 0,5-0,8 мкм; спор и капсул не образуют, обладают активной подвижностью (перитрихи). Температурный оптимум составляет 35-37 °С, оптимум pH – 7,2-7,4. Рост сальмонелл подавляют или ограничивают высокие концентрации хлорида натрия и сахара.

На питательных средах сальмонеллы образуют типичные для большинства энтеробактерий мелкие прозрачные S-колонии, также формируют шероховатые и сухие R-колонии.

На агаре Эндо S-колонии – розоватые и прозрачные; Плоскирева – бесцветные, более плотные, мутноватые; на висмут-сульфитном агаре – чёрно-коричневые, с металлическим блеском, окружены черным «гало», среда под колониями окрашивается в чёрный цвет.

 

 

 

 

 

 

Биохимические свойства

Вид

Ферментация

Утилизация цитрата

Образование индола

Гидролиз мочевины

Подвижность

РМК

ФП

ФА

NO3

глюк

лакт

маннит

сахароза

S. typhi

+

-

+

-

-

-

-

+

+

-

-

+

 

 

Возбудители брюшного тифа и паратифов дают положительную реакцию с MR, не образуют индола, выделяют сероводород, не разжижают желатин, восстанавливают нитраты в нитриты, не образуют ацетоина. S. typhi не растет на голодном агаре с цитратом. Основные биохимические различия между возбудителями брюшного тифа и паратифов заключаются в том, что S. typhi ферментирует глюкозу и некоторые другие углеводы с образованием только кислоты, a S. paratyphi А и S. paratyphi В - с образованием и кислоты, и газа.

S. typhi по способности ферментировать ксилозу и арабинозу подразделяют на четыре биохимических типа: I, II, III, IV.

Методы выявления

Бактериологический метод:

Материал для исследования:

• при жизни – кал, сыворотка крови;

Микроскопия:

• методы окраски: простой метод, по Граму;
• микрокартина: палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно;
• грамотрицательные;
• спор не образуют;
• капсулу не образуют;
• подвижны (за исключением S.pullorum).

 

 

 

 

Культивирование:

• посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др, накопительные;
• особенности выделения возбудителя:
• факультативные анаэробы;
• оптимальная температура 37oС.

Культуральные свойства: 
Все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки, близкие к эшерихиям;

• на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка,
• на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии,
• на среде Эндо – бесцветные или розоватые колонии, на среде Левина – светло-фиолетовые колонии. 
  После выделения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий устанавливают их родовую принадлежность, затем дифференцируют до вида и сероварианта. С этой целью изучают их биохимические свойства и антигенное строение путем постановки пластинчатой реакции агглютинации (серологическая дифференциация).

Биохимические свойства:

• обладают высокой сахаролитической активностью; для установления родовой принадлежности проводят посевы на короткий «цветной ряд» (среды Гисса) при этом сальмонеллы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, не расщепляют лактозу и сахарозу;
• дальнейшее изучение для установления видовой принадлежности проводят путем посевов на длинный «цветной ряд», в состав которого входят углеводы, и другие тесты;
• сальмонеллы не разжижают желатин, образуют сероводород, не образуют индол;
• дают положительную реакцию с метиловым красным: среда окрашивается в розово-красный цвет, отрицательную реакцию Фогеса-Проскауэра – желтое окрашивание среды.
• Биопроба:  
  в необходимых случаях заражают подкожно белых мышей.

 

 

 

Серологический метод:

• используют РА с сывороткой крови (кровью) при диагностике паратифозного аборта кобыл, поллуроза у кур;
• используют РА для дифференциации выделенной культуры сальмонелл с целью определения их вида и сероварианта;
• у сальмонелл различают соматический термостабильный антиген и жгутиковый термолабильный антиген;
• культуру сальмонелл предварительно проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками в РА на стекле. На основе общего для нескольких видов сальмонелл антигена они подразделяются на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. При положительном результате с групповой сывороткой испытания той же культуры, выросшей на скошенном МПА с отдельными монорецепторными сыворотками, входящими в смесь поливалентной сыворотки. Затем эти же культуры испытывают с монорецепторными сыворотками, 1-й и 2-й фазы, обозначенными цифрами и малыми буквами – РИФ.

 

ГОУ ВПО

«СУРГУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

« Ханты-Мансийского автономного округа – Югры »

Медицинский институт

Кафедра инфекционных, кожных и венерических заболеваний

 

 

 

 

 

 

 

Реферат

По микробиологии

Тема: «Микробиологическая диагностика хламидиоза»

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Выполнил: студент

МИ, группы 501-31Б

Дильмухаметов Артем Вильевич

Проверил: кандитат медицинских наук,

доцент

Прокопьев Михаил Николаевич

 

 

 

 

 

Сургут, 2015 г

Хламидия - микроорганизм настолько своеобразный, что был отнесен к отдельному семейству в классификации бактерий. Хламидия представляет собой грамотрицательную бактерию с уникальным жизненным циклом. Этот микроорганизм занимает как бы промежуточное положение между бактериями и вирусами и сочетает в себе их основные характеристики. Хламидия имеет обе нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК), соответствующую грамотрицательным бактериям клеточную стенку, способна к бинарному делению в процессе размножения и чувствительна к антибиотикам. Однако хламидии не могут самостоятельно функционировать вне клеток-хозяев, так как не имеют собственной АТФ и энергетически зависимы от других клеток. Еще одно свойство сближает хламидии с вирусами: на искусственных питательных средах хламидии расти не могут, им необходима живая клеточная культура. Кроме того, одна из форм существования хламидии напоминает спору, которая метаболически неактивна, нечувствительна к действию антибиотиков, не способна к размножению.

Морфологические и культуральные свойства

Хламидии – мелкие грамотрицательные кокковидные грамотрицательные микроорганизмы размером 0,25 – 1 мкм. Содержат два типа нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), рибосомы, мурамовую кислоту, размножаются бинарным делением и чувствительны к некоторым антибиотикам.

Хламидии не растут на искусственных питательных средах, их культивируют в желточном мешке куриных эмбрионов и тканевых культурах.

Хламидии являются строгими внутриклеточными паразитами и размножаются в основном в цитоплазме клеток человека, а вне клеток хозяина «впадают в спячку».

Жизненный цикл хламидий включает образование двух основных форм:

• Элементарное тельце – мелкая сферическая внеклеточная структура с трехслойной клеточной стенкой. Метаболически малоактивно и адаптировано к внеклеточному выживанию. Инфекционные единицы – заражают клетки. По романовскому-Гимзе окрашиваются в пурпурный цвет.
• Ретикулярное тельце – репродукционная внутриклеточная форма. Представлена более крупным образованием имеющим сетчатую структуру с тонкой клеточной стенкой. Развивается в течение 5-6 часов из элементарного тельца, проникшего в цитоплазму и претерпевшего структурные изменения. Окрашивается по Романовскому-Гимзе в синий цвет.

 

 

 

 

 

Биохимические свойства

Способны самостоятельно синтезировать нуклеиновые кислоты, некоторые белки и липиды. Являются энергетически зависимыми от хозяина эндопаразитами. Chlamydia trachomatis обладает гликоген — синтетазной системой (гликоген содержится и выявляется при определенных методах окраски во включениях), синтезирует предшественники фолиевой кислоты и соответственно биохимической активности чувствителен к сульфаниламидам.

 

Методы диагностики 

Хламидии не растут на питательных средах самого сложного состава (это сближает их по свойствам с риккетсиями и особенно — с вирусами), для их культивирования могут быть использованы лабораторные животные и куриные эмбрионы (биопроба) и особенно чувствительные линии клеток животных — чаще клетки McCoy (чаще с обработкой цитостатиками для повышения чувствительности), которые считались “золотым стандартом” диагностики.

Главными трудностями при выявлении хламидии оказываются их малые размеры, а также неспособность расти на искусственных питательных средах. Поскольку хламидии обитают внутри клеток цилиндрического эпителия, исследуют соскоб эпителия, а не выделения из мочеиспускательного канала, как при гонорее.

Для культивирования хламидии приходится использовать живые культуры клеток, что значительно усложняет диагностическую процедуру. Обычно берут культуру фибробластов, обработанную антиметаболитами, облегчающими развитие хламидий, поскольку деление самих клеток приостанавливается. Диагностика занимает около недели, что весьма неудобно в клинических условиях. Однако этот метод остается одним из самых надежных, с ним сравнивают диагностическую ценность других методов выявления хламидий.

Обычные методы окраски гистологическими красителями (по Романовскому-Гимзе) оказываются недостаточно чувствительными, поскольку из-за малых размеров возбудителя можно выявить только хлами-дийные включения. Таким методом можно обнаружить хламидии лишь у 15-20% больных.

В настоящее время для обнаружения хламидий применяют иммуно-флюоресцентный, иммуноферментный, серологический методы, выделение возбудителя в культуре клеток и методы ДНК-диагностики (полимеразная и лигазная цепная реакция, ДНК-зонды). Для массовых скрининговых обследований предпочтительно использовать иммунофер-ментный метод. Современные серологические методики, спообные обнаружить не только IgG, но и IgA и IgM, особенно важны для выявления хламидий у детей, при инфекции в труднодоступных для взятия соскоба местах, при осложненном урогенитальном хламидиозе и болезни Рейтера.

Определение антител (IgG, IgA, IgM) к хламидиям в крови. Эти антитела вырабатываются организмом в ответ на инфицирование. Антитела к хламидиям выявляются при взаимодействии со специальными препаратами, содержащими хламидийные антигены, образующие с антителами прочный комплекс, который можно обнаружить разными способами.