Анализ опухолеспецифических форм белка В23/нуклеофозмина

 
 

    Нуклеофозмин – как потенциальный онкомаркер 

    Оценка  пролиферативной активности лимфоидных клеток при лимфопролиферативных заболеваниях является одним из важных показателей в диагностике варианта заболевания и определения степени злокачественности процесса. Этот показатель используется для прогнозирования скорости опухолевого роста и выбора адекватной терапии.

    Для оценкипролиферативной активности клеточной популяции применяют различные методы:

1) селективное  окрашивание клеток солями серебра  с целью выявления и учёта  аргентофильных ядрышкообразующих районов хромосом;

2) включение  в ДНК аналогов тимидина, например, ³Н-тимидина или бромдезоксиуридина;

3) проточную  цитометрию с подсчётом содержания ДНК, окрашенной флюоресцентным красителем;

4) иммуноцитохимический метод с использованием моноклональных антител (МКА) к антигенам, ассоциированным с клеточной пролиферацией [6].

    При сравнении вышеперечисленных методов было показано, что иммуноцитохимический метод с применением МКА является наиболее предпочтительным, так как позволяет выявлять пролиферацию клеток на более ранних стадиях клеточного цикла, чем остальные, которые также уступают ему в чувствительности и воспроизводимости.

    В мире получен ряд МКА к ядерным  антигенам, ассоциированным с клеточной  пролиферацией, часть из которых  локализуется в особом компартменте  клеточного ядра – ядрышках. Наибольшее признание и клиническое применение получили МКА к белку Ki-67, появляющемуся в поздней G₁-стадии и маркирующему S, G₂ и M фазы клеточного цикла, но отсутствующему в G₀ и раннем G₁ периодах. За последние два десятилетия в результате получения и применения МКА был открыт ряд новых белков, имеющих ядрышковую локализацию, которые можно рассматривать в качестве возможных маркеров клеточной пролиферации. К ним, в частности, можно отнести и основной ядрышкой белок В23/нуклеофозмин, участвующий в сборке прерибосомных частиц [7], исследование структуры и свойств которого являлось темой моей дипломной работы.

    Поскольку белок В23 является обязательным компонентом  ядрышек, он присутсвует в норме в минимальных количествах во всех донорских лимфоцитах, достигая видимого уровня экспрессии менее чем у 10% обследованных доноров. Проведённые исследования показали, что при искусственно вызванной с помощью фитогемаглютинина (ФГА) пролиферации лимфоцитов повышение экспрессии белка В23 наступает раньше (уже через 6-14 часов от начала стимуляции), чем появление Ki-67 (наблюдаемое только через 24 часа). Это позволяет выявлять начало усиления пролиферативной активности клеток на более ранних стадиях, чем при использовании МКА к Ki-67. В последующие часы экспрессия обоих маркеров возрастает параллельно.

    Таким образом, было впервые выявлено, что  ядрышковый белок В23 может явиться ранним маркером активации лимфоцитов к пролиферации, экспрессия которого возрастает в последующие фазы клеточного цикла.

Метод количественного определения белка  В23 может явиться более информативным  в определении начальных этапов активации клеток к пролиферации, когда ещё отсутствуют общепризнанные маркеры активации и пролиферации (т.е. в раннем и среднем G₁-периодах).

    Диагностическая ценность выявленного повышения количества В23 на иммуноблотах возрастает в случае отрицательных результатов окрашивания антителами к В23 и Ki-67 в иммунофлюоресцентном и иммунопероксидазном методах, позволяя обнаружить самую начальную фазу активации клеток к пролиферации, благодаря чему становится возможным раннее прогнозирование начинающегося прогрессирования заболевания и как следствие – своевременная коррекция лечения, направленного на сдерживание опухолевого роста.

    Поэтому исследование белка В23, функционирующего в реальных клетках, как в опухолевых так и нормальных, представляет большой интерес. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Список  литературы 

1. Фатех-Могхадам А., Стиебер П. Рациональное использование опухолевых маркеров. М: Roche – Diagnostics 1993.

2. Касаткин Ю. Н. β-2микроглобулин. Клинический справочник. М: 1984.

3. Алексеева М.Л., Фанченко Н.Д., Новиков Е.А. Опухолевые маркеры в гинекологии. Акуш. и гин., 1995, 5, 14-16.

4. Birken S. Chemistry of human choriogonadotropin. Ann. Endocrinol., 1984, 45, 297-305.

5. Armbruster D. Prostate-specific antigen – biochemistry, analytical methods and clinical application. Clin. Chem., 1993, 39, 181-195.

6. Dergunova N.N., Bulycheva T.I., Artemenko E.G. A major nucleolar protein B23 as a marker of proliferation activity of human peripheral limphocytes. Immunology Letters, 2002, 83, 67-72.

7. Булычева Т.И., Артеменко Е.Г., Дергунова Н.Н. Анализ пролиферативной активности клеток с помощью новых моноклональных антител к ядрышковому белку В23/нуклеофозмину. Цитология, 2000, 3, 944-954.

 

Приложение. Расчет ХПК используемых соединений

 

 РАСЧЕТ  ХПК ПО ДАННЫМ ЭЛЕМЕНТНОГО  АНАЛИЗА.

 
 
 
 
 

РАСЧЕТ  ХПК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В РАБОТЕ РАСТВОРОВ  И СМЕСЕЙ