Лабораторная диагностика беременности у разных видов животных

Совпадение результатов  гистологических исследований с  фактическими опоросами отмечается в 92-100% случаях. Материал для гистологического исследования берут посредством биопсиии или соскоба из передней части влагалища.

3.Диагностика беременности у кобыл

Шейка матки длинная от 4-8 см, лиаметр 3-5 см. Влагалищная часть шейки матки несколько выступает в полость влагалища на 2-2,5 см, имеет форму втулки, с яркой исчерченностью. Тело матки длинное от 8-15 см, диаметр 12 см, длинна рогов 14-30 см, ширина 3-7 см. Вынашивание плода в теле матки. Слизистая оболочка складчатая, рога матки имеют Г- образную форму или в виде рогов козла. Длинна яйцевода 25-30 см левый яйцевод длиннее правого, заканчиваются воронкой яйцевода. Воронка имеет особое строение – выстлана ворсинчатым эпителием. Яичники бобовидной формы от 2-10 см. Овуляция в овуляционной ямке. 

Метод влагалищных мазков. Этот метод применим только для определения жеребости кобыл. Перед взятием слизи из влагалища необходимо наружные органы кобылы обмыть теплой водой с мылом. Затем, введя зеркало-расширитель во влагалище, берут слизь из глубины верхнего свода влагалища посредством длинной острой ложечки с предварительно затупленными краями или стерильным ватным тампоном. По получении слизи делают мазок на предметном стекле из слизи. Для производства мазка можно воспользоваться покровным стеклом. Мазок высушивают, фиксируют метиловым спиртом в течение 5 минут, окрашивают по Гимза (2 капли на 1 мл дистиллированной воды) в продолжение 25–30 минут и тщательно просушивают.

При микроскопическом исследовании мазка слизи от жеребой кобылы обнаруживаются клетки мерцательного эпителия, слизевые шары и редко – лейкоциты. У нежеребых кобыл во влагалищной слизи наблюдают нейтрофильные  лейкоциты, клетки плоского эпителия и одиночно встречающиеся клетки мерцательного эпителия.

В качестве дополнительных показаний для постановки диагноза на жеребость обращают внимание на клинические признаки, наблюдаемы при  макроскопическом исследовании полости  влагалища.

Слизистая оболочка влагалища  с 3-недельной жеребости животного  покрывается густой, очень вязкой и мутной слизью, которая затрудняет введение и выведение влагалищного зеркала. С этого срока жеребости слизистая оболочка влагалища становится анемичной, сухой и без блеска. Отверстие шейки матки плотно закрыто слизью, образующей как бы пробку, вследствие этого влагалищная часть шейки матки выглядит тусклой. К 4–5 неделям жеребости влагалищная часть шейки матки отклоняется обычно вправо или влево.

Гормональный метод. На основании изучения физиологии передней доли гипофиза и яичника разработана реакция на беременность, основанная на  очень раннем появлении в крови жеребых кобыл гормона пролана и в моче беременных кобыл, коров и свиней – гормона фолликулина.

Для исследования на пролан у животного берут из яремной  вены около 25-50 мл крови, из нее отстаивают сыворотку, которую инъецируют без всякой обработки под кожу мышам. Инъекция в количестве по 0,1–0,4 мл исследуемой жидкости производится в течение 3 дней по 2 раза в день инфантильным (неполовозрелым) мышам-самкам. Вес такой мыши составляет 6–8 г (3–4 возраст).

Для исследования на фолликулин у животного берут мочу посредством катетера или путем выжидания естественного мочеотделения. Моча перед инъекцией мышам подвергается обработке эфиром для снижения ее токсичности. Для этого  моча отстаивается. Образовавшийся сверху прозрачный слой сливается в количестве до 10 мл, подливается уксусная кислота для создания слабокислой реакции и прибавляется эфир в равном объеме. После этого моча встряхивается в течение 5 минут. Затем содержимому пробирки дают отстояться в течение 10 минут; эфир сливают, а мочу оставляют в открытом сосуде на несколько часов для полного удаления остатков эфира. Тогда мочу разбавляют в 3 раза дистиллированной водой и в таком виде впрыскивают под кожу мышам в шесть приемов в течение 3 дней. Для выявления фолликулина моча вводится кастрированным мышам-самкам или инфантильным.

Для уточнения диагноза моча или кровь от каждого исследуемого на беременность животного вводится 3–4 мышам. При наличии в исследуемой жидкости половых гормонов течка у мышей появляется через 72–100 часов после начала инъекции. Для обнаружения течки, начиная с утра 3-го дня, от мышей посредством тампона берут два раза в день выделения из влагалища. Из полученной слизи делают на предметном стекле в капле воды мазок, который рассматривают под микроскопом.

При наличии течки  у мышей в мазке обнаруживаются только сплошные массы клеток ороговевшего безъядерного эпителия. В период покоя в мазке обнаруживаются лейкоциты и ядерные эпителиальные клетки.

Реакцию течки можно подтвердить вскрытием подопытных мышей, при котором обнаруживают увеличение и гиперемию матки. При реакции на пролан необходимо для дополнительной проверки вскрыть одну из подопытных мышей и в случае положительного результата находят увеличение яичников, присутствие в них зрелых фолликулов, красных кровяных точек на месте вскрывшихся граафовых пузырьков и даже желтых тел. Кроме того, хорошо заметны гипертрофия и гиперемия половых органов.

Минимальное количество гипофизарного или фолликулярного гормона, способное вызвать реакцию течки у самок-мышей, называют мышиной единицей.

У лошадей с 30-го дня  жеребости можно попытаться использовать метод, основанный на обнаруживании  в крови гормона пролана. Между 3а-м и 42Эм днями жеребости этот метод иногда дает неточные результаты, так как в этот период содержание пролана в крови незначительно (3а0–750 м. е. в литре крови). С 42-го по 100-й день жеребости количество гормона пролана в крови сильно повышается (до 10а 00а–130 000 м. е.), а потому в этот период реакция наиболее точная – дает верные результаты почти в 10а% случаев. После же 3 месяцев жеребости количество гормона пролана сильно снижается.

С 3 месяцев жеребости  и до родов определение жеребости  производят на основании обнаруживания в моче жеребой кобылы огромного количества гормона фолликулина, исчисляемое в десятках и даже сотнях тысячах мышиных единиц в литре моче. Правда, гормон фолликулин обнаруживается и нежеребых и в начале жеребости кобыл, но количество его исчисляется только в нескольких тысячах мышиных единиц в литре мочи. Таким образом, по разнице в количестве гормона фолликулина можно судить о жеребости кобылы.

Микроскопия мазков из влагалищной  слизи. Слизь берут с шейки матки (лучше с ее устья) стерильным плотным ватным тампоном с помощью корнцанга. Эти тампоном делают ровные мазки на сухом, обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом в течение 5 минут, окрашивают краской Гимза (на 1 мл дистиллированной воды 2–г капли краски) на протяжении 25–30 минут, тщательно смывают краску, высушивают и микроскопируют.

В мазках из слизи, взятой у жеребых кобыл, находят значительное количество клеток мерцательного эпителия, слизевые шары голубого цвета, единичные клетки плоского эпителия и иногда незначительное количество лейкоцитов.

В мазках из слизи, взятой у нежеребых кобыл, обнаруживают большое количество лейкоцитов и клеток плоского эпителия, единичные клетки мерцательного эпителия. Шаров из слизи нет. Слизь на мазке лежит ровным слоем.

Биологическое исследование крови и мочи. В период беременности в крови и моче кобыл накапливается довольно большое количество гонадотропных (фолликулостимулирующий гормон – ФСГ и лютеинизирующий гормон – ЛГ) и гонадальных (фолликулин) гормонов, стимулирующих функциональную деятельность половых органов.

Диагностика жеребости  по результатам биологического исследования крови или мочи основана на выявлении количественного содержания в них названных гормонов. Этот метод диагностики отличается высокой точностью (95–100%), но, несмотря на это, при массовых исследованиях на жеребость он применяется редко из-за сложности и дороговизны его выполнения.

Для выявления гормонов в крови и моче жеребых кобыл  существуют следующие способы: 1) Колла  и Харта, 2) Фридмана и Шнейдера, 3) Цондека и Ашгейма.

При изучении функционального состояния яичников некоторые авторы заменяют лапаротомию осмотром яичника через фистулу брюшной стенки.

Для этой же цели предложена пересадка яичника в переднюю камеру глаза кастрированных крольчих. При удачной операции, с ослаблением воспалительной реакции, роговица просветляется (в первые дни послеоперационного периода она мутнеет), и за привившимся яичником очень  просто и удобно вести наблюдение.

После введения испытуемой сыворотки в ушную вену крольчих в трансплантате можно видеть кровоизлияния, через три дня – увеличение фолликулов, а через пять дней – ясную лютеинизацию.

Реакция Цондека и  Ашгейма. Сущность реакции – выявление фолликулина в моче ил крови беременных.

У жеребой кобылы в  моче фолликулина в сотни раз  больше, чем в крови, поэтому при постановке реакции используют мочу. Содержание фолликулина в моче увеличивается с течением жеребости: в первые три месяца колеблется в пределах 300–800 МЕ, с третьего месяца до выжеребки достигает 28 000–500 000 и даже 1 000 000 МЕ в 1 л мочи.

Эти данные указывают  на целесообразность применения фолликулиновой реакции преимущественно после третьего месяца жеребости, а в более ранней стадии – исследование на пролан.

Техника реакции. Мочу пропускают через бумажный фильтр, подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции (лакмус). Для освобождения от токсичных веществ к моче прибавляют равное количество эфира и тщательно взбалтывают. Эфир сливают, а мочу оставляют стоять открытой до испарения остатков эфира (пока не останется слабый запах). Обработка эфиром повышает активность фолликулина.

Лабораторными животными  служат овариоэктомированные белые  мыши (кастраты), выдержанные в течение  двух недель после операции и проверенные  на отсутствие течки. Можно использовать инфантильных самок мышей; у каждой из них окрасить шерсть на условном месте и в течение трех дней два раза в день вводить под кожу:

 

 

к а с т р а  т а м

1-й мыши – 0,3 цельной  мочи

2-й     »    – 0,2     »  »

3-й     »    – 0,1     »  »

4-й     »    – 0,1 мочи, разбавленной

водой в 2 раза

 

инфантильным

1-й мыши – 0,2 цельной  мочи

2-й     »    – 0,1     »  »

3-й     »    – 0,1     »  »

4-й     »    – 0,1 мочи, разбавленной

водой в 2 раза

 

 

Если есть основание  предполагать более поздние сроки  жеребости, когда фолликулина в  моче много, можно всем мышам вводить мочу, разбавленную водой в 2–3 раза.

Через 100 часов после  первой инъекции (лучше с 70–80-го часа) из влагалищной слизи каждой мыши три раза в день изготовляют мазки. Для получения материала и  приготовления мазков употребляют платиновые петельки. Прокаленную на спиртовке петельку погружают в дистиллированную воду и вместе с захваченной ею каплей воды вводят во влагалище. Для извлечения слизи петли проводят по слизистой оболочке легким скоблящим движением. Той же петлей слизь размазывают на поверхности предметного стекла. На одно стекло можно нанести 3–ж мазков. Каждый мазок помечают восковым карандашом тем номером, которым обозначена мышь.

Мазок высушивают на воздухе, фиксируют спиртом и окрашивают по Романовскому или просматривают под микроскопом без окраски, в затемненном поле зрения. Наличие в мазке безъядерных клеток (чешуек), указывающих на  появление течки, расценивается как положительный диагноз. В сомнительных случаях можно вскрыть 1–2 мыши. Диагноз подтверждается обнаружением матки, увеличенной под влиянием фолликулина.

Реакция Колла и Харта. Пролан появляется в крови кобыл через 30–40 дней после начала жеребости в количестве 144 МЕ^* в литре (в среднем). К 40–50-му дню жеребости количество пролана достигает 26 тысяч, к 90-му дню – 30–40 тысяч МЕ. С 90-го дня содержание в крови пролана начинает уменьшаться.

Практически выявление  пролана в сыворотке крови  кобыл может быть осуществлено в  период между 40–120 днями жеребости (с половины второго до пятого месяца).

Тест объектом служат инфантильные мыши (весом 6–8 г) или крысы (весом 20–28 г).

Из вены кобылы, подлежащей исследованию, берут около 50 мл крови и ставят в прохладное место для отделения сыворотки. Последнюю вводят под кожу трем мышам или крысам в дозах (мл):

1-й мыши .  .  .  .    0,5

2-й      »    .  .  .  .    0,3

3-й      »    .  .  .  .    0,1

1-й крысе .  .  .  .    1,0

2-й      »    .  .  .  .    0,5

3-й      »    .  .  .  .    0,3

 

Всего делают шесть инъекций в течение трех суток (по две инъекции в сутки).

На 4–5-й день после начала инъекций от подопытных животных 2–3 раза в день готовят мазки из влагалищной слизи и исследуют под микроскопом. Если кобыла была жеребой, то под влиянием имеющегося в крови пролана у инфантильных мышей или крыс происходит половое созревание – развитие фолликулов. С созреванием фолликулов образующийся в них фолликулин вызывает течку, и мазок состоит из безъядерных клеток (чешуек). Если картина не ясна, через 100 часов после начала инъекции мышей убивают. При наличии у кобылы жеребости у мышей удается установить увеличение рогов матки, а в яичниках – зрелые фолликулы, желтые тела или фолликулы, заполненные кровью.

Решающее значение имеют  изменения яичников и матки, поэтому  для суждения о реакции всех или  некоторых мышей убивают или  вскрывают.

Реакция Фридмана и Шнейдера. Объектом служат крольчихи весом 900–1200 г, то есть достигшие половой зрелости. Самки должны содержаться изолировано от самцов, а еще лучше и от самок.

Десять миллилитров  сыворотки крови исследуемой  кобылы вводят в ушную вену крольчихи. Через 36–48 часов после инъекции у крольчихи производят лапаротомию и осмотр яичников. После инъекции сыворотки на месте разорвавшихся фолликулов или обнаруживают фолликулы, полость которых заполнена кровью.