Особо опасные инфекции

В последнее время  в бактериологической практике нашел  довольно широкое применение микрообъемный  метод постановки серологических реакций  с использованием специальных планшеток и микротитровальных игл . Реакции агглютинации микрометодом ставят с холерными агглютинирующими референссыворотками в полистроловых микротитровальных планшетках с плоским или Vобразным дном, предназначенных для иммунологическ агглютинировались в планшетках и пробирках соответственно в 95 и 96% случаев. У холерных вибрионов классического и эльтор биоваров серовара Огава соотношения в обеих методиках были практически те же. Интересен факт, что при постановке реакции агглютинации с RO сывороткой наибольшее число штаммов, агглютинирующихся RO сывороткой до титра, было выявлено в микрометоде; в пробирках агглютинация установлена у одного штамма. Все штаммы вибрионов 040056 сероваров в микрометоде не агглютинировались холерными агглютинирующими сыворотками, а в пробирках штамм II 2581099 (040 серовара) агглютинировался всеми холерными сыворотками. Большинство изученных штаммов представителей семейства Enterobacteraceae также не агглютинировалось холерными агглютинирующими сыворотками, за исключением Sh. flexneri 2503, у которого в пробирках была выявлена агглютинация со всеми сыворотками, и штамма S. typhimurium 21, у которого отмечена неспецифическая реакция агглютинации со всеми сыворотками как в пробирках, так и в планшетках. При пользовании этим методом расход агглютинирующих сывороток уменьшается в 10 раз, значительно сокращается время, необходимое для постановки реакции, и ускоряется срок выдачи ответа. Кроме того, описанный метод менее трудоемок.

Таким образом, стандартность, достоверность полученных результатов, высокая экономичность метода позволяют рекомендовать его при идентификации холерных вибрионов, изучении штаммов и популяции штаммов холерных вибрионов по признаку агглютинабельности. А также: Иммобилизация вибрионов холерными сыворотками и типовыми холерными фагами. Капли испражнений или материала с поверхности пептонной воды обрабатывают холерной Осывороткой, типовыми сыворотками Огава и Инаба или типовыми холерными фагами. Готовят из них препараты "раздавленная капля", которые исследуют с помощью темнопольной и фазовоконтрастной микроскопии. В положительном случае через 35 минут движение вибрионов прекращается. РИФ. Препараты из исследуемого материала обрабатывают флюоресцирующей противохолерной сывороткой и исследуют в люминесцентном микроскопе.

Положительным результатом  считается обнаружение в препарате  даже единичных вибрионов с ярким  желтозеленым свечением в виде блестящего ободка по периферии клетки. Положительный  результат можно получить через 12 часа после начала исследования при  концентрации вибрионов не менее 106 клеток в 1 мл., поэтому рекомендуется предварительно подращивание материала на питательных средах. Экспрессдиагностика туляремии Возбудитель туляремии (Туляре  район Калифорнии)  Franciella tularensis относится к роду с невыясненным положением в систематике микробов. Этиологическая природа туляремии была установлена в 1912 году Г.Маккоем и Ш.Чепиным, а далее подробно изучена Э.Франсисом.

Туляремия тяжелая кровяная зоонозная инфекция с природной очаговостью. Основные источники инфекции  водяные крысы, ондатры, зайцы, крысы, мыши. Больной человек неконтагиозен и для возбудителя является биологическим тупиком. Передается трансмиссивным путем через клещей, а нередко и контактным, алиментарным или аспирационным путем. Возбудитель содержит нуклеопротеидный О и оболочечный белковолипидный Viантиген. У перенесших болезнь вырабатывается очень напряженный и длительный иммунитет. Материал для исследования: кровь, гной, пунктат бубона, слизь из зева. Реакция агглютинациирассеивания. Предложена простая, быстрая, высокочувствительная и специфичная реакция агглютинациирассеивания, для постановки которой используется антительный диагностикум. Это суспензия темнокоричневого цвета, представляющая собой комплексное соединение шаровидных крупнодисперсных НКчастиц (Никитин и Котич) и противотуляремийных иммуноглобулинов. Препарат хранят в холодильнике при +4°С в течение 23 лет. По истечении 3 лет препарат можно ресенсибилизировать, так как НКчастицы высокостабильны. Для постановки реакции агглютинациирассеивания на тщательно обезжиренное предметное стекло наносят слева относятся также Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, вызывающие септические гастроэнтероколиты или иерсиниозы.

Чума особо опасная, очень тяжелая кровяная инфекция, склонная к широкому распространению и дающая высокий процент смертности (от 20 до 100%). Это зоонозная трансмиссивная природноочаговая инфекция. Источники  крысы, суслики, песчанки, полевки, сурки, мышевидные грызуны. Переносчики  кровососущие насекомые. В составе бактерий чумы содержится более полутора десятков специфических и групповых антигенов. Переболевшие приобретают пожизненный, устойчивый иммунитет фагоцитарного характера. Материал для исследования: содержимое бубонов, отделяемое язв, мокрота, кровь, испражнения. Метод бумажных индикаторных систем. Классические методы (посев на среды Гисса) громоздки, требуют много времени и большого количества питательных сред, имеющих ограниченный срок годности. В настоящее время эти методы не удовлетворяют запросам противочумной системы. В настоящее время наиболее перспективным методом определения ферментативной активности штаммов возбудителя чумы с целью идентификации выделяемых культур и изучения их свойств можно считать метод углеводнобумажных дисков, предложенный В.М.Никитиным и                 С.В. Плугару. В качестве среды лучше использовать бульон Хоттингера, т.к. он дает наиболее быструю ферментацию  3 часа. Целесообразно применять БИС в полевых условиях, так как наборы компактны и могут длительное время храниться при комнатной температуре. Фаготипирование. 1. Внесение бактериофага в исследуемый материал в момент его посева на агар с генцианвиолетом позволяет обнаружить под микроскопом негативные колонии фага или "дорожку" в первые часы, когда рост бактерий еще почти не заметен (через 2,5  3 часа). Метод прост, доступен и дает хорошие результаты при высокой концентрации чумного микроба и при относительно большом содержании посторонних микроорганизмов. 2. Определение нарастания титра чумного фага, вносимого в исследуемый материал, где в случае наличия возбудителя фаг начинает размножаться уже через 3040 минут. В жидкий исследуемый материал (2550100 мл) и в контрольную жидкость добавляют столько фага, чтобы получить его разведение 1:50  1:100; ставят пробы в термостатах при 370C на 4560 минут. После инкубации берут 0,5 мл жидкости из каждой пробы и разводят бульоном в 10 раз; из этого первого разведения фага готовят серию последовательных 10кратных разведений (до 1010  1011). По 0,5 мл жидкости из каждого разведения исследуемого и контрольного рядов добавляют к 2,5 мл полужидкого агара (0,1%), предварительно расплавленного и затем охлажденного до 48500С. Тут же к агару добавляют 0,1  0,2 мл взвеси 1  2 суточной индикаторной культуры (вакцинный штамм чумного микроба), содержащий 1520 млрд микробов в 1 мл. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и выливают на чашки Петри с 2% агаром Хоттингера. После того, как полужидкий агар застынет, чашки перевертывают дном кверху и ставят в термостат при 370С. Учет результатов производят через 34 часа. На фоне сплошного роста индикаторной культуры видны стерильные пятна (негативные колонии фага), количество которых на чашках с исследуемым материалом может превосходить в 1001000 и более раз число негативных колоний на контрольных чашках. Благодаря хорошей диффузии фаговых частиц и бактериальных клеток через полужидкий агар двухслойный метод дает стерильные пятна большего размера, чем при размазывании исследуемой массы шпателем по поверхности агара. Подсчет колоний ведут в счетной камере. А также: РИФ, РПГА и др.

Некоторые другие методы

Хемилюминесцентный иммуноанализ. Новым этапом на пути развития иммунологических методов диагностики ООИ является хемилюминесцентный иммуноанализ  ХЛИА. Преимущество этого метода определяется его высокой чувствительностью, относительной простотой и производительностью, возможностью полной автоматизации В открытой литературе имеются отдельные сообщения, посвященные применению ХЛИА в медицинской микробиологии, как для обнаружения бактериальных антигенов, так и Специфичность ХЛИА зависит от качества использованных иммуноглобулинов. На 42 близкородственных и гетерологичных штаммах положительные реакции получены с Y. pseudoTuberculosis 816111(37°) с чумными общими ИПК и В. sereus 1 и 3 с сибиреязвенными ИПК в концентрациях 1 106 м. т./мл. ХЛИА следует рекомендовать для лабораторной диагностики ООИ особенно в тех случаях, когда в исследуемом материале предполагается незначительное содержание возбудителя.

Иммуноблотинг

Иммуноблоттинг  разновидность  гетерогенного иммунного анализа. Сущность его заключается в переносе молекул исследуемого вещества с одного твердого носителя, используемого для фракционирования биополимеров, на другой, где с помощью иммунохимической реакции происходит их специфическое выявление. В зависимости от исследуемого вещества различают ДНК, РНК и белок  блоттинг. При постановке иммуноблоттинга соблюдается следующая методическая последовательность: электрофоретическое разделение анализируемого материала на индивидуальные белки или полипептиды в геле; получение реплики путем блоттинга белков или полипептидов с геля на твердофазный матрикс; блокирование фона, отмывка от компонентов, используемых при блокировании фона; инкубирование со специфической тестсывороткой; отмывка от избытка сыворотки; инкубирование с Jg к антителам специфической тестсыворотки, конъюгированными с меткой; отмывка от избытка меченого иммунореагента; выявление тестируемых антигенов авторадиографически или ферментативно по реакции с соответствующим субстратом. Иммунохимическое выявление антигенов можно проводить с помощью антител, конъюгированных с меткой. В качестве метки в последнее время широко применяют либо радиоактивные изотопы, либо ферменты (пероксидазу, щелочную фосфатазу, лактамазу и др.). Время блоттинга путем диффузии составляет 3648 ч. Но наиболее быстрый и эффективный способ переноса белков с гелей электроблот, время которого, в основном, составляет 13 ч (2), для некоторых высокомолекулярных белков более 12 ч. Конкретный выбор сорбентов для различных модификаций блотов (нитроцеллюлоза либо бумага, обработанная соответствующим образом), выбор условий блокирования и иммунохимического выявления антигенов полностью зависит от антигена, его количества, метода иммуноанализа и целей исследования. Метод ИБ по целому ряду обстоятельств получил наибольшее распространение как метод, пригодный для использования в качестве теста подтверждения. Безусловное достоинство метода  возможность тестирования антител к слабо или вовсе нерастворимым антигенам и исключение стадии введения радиоактивной метки в антигены. О чувствительности в случае ИБ судят по предельному количеству нанесенного на гель антигена, которое при фракционировании белков удается выявить иммунохимически после переноса с геля на твердую фазу (нитроцеллюлозу). Общая чувствительность анализа зависит от целого ряда причин: условий фракционирования и иммобилизации антигена на твердом носителе, уровня фона, специфичности и аффинности антител. Важное значение имеет вид используемой метки и способ ее выявления.

Таким образом, метод  иммуноблотинга позволяет идентифицировать зоны антигена на твердой фазе, не связывая весь белок с антителами специфической сыворотки. Иммуноблотинг и его модификации в основном используются для типирования бактериальных и вирусных антигенов и антител, особенно в случае недостаточной разрешающей способности обычных систем, а также при анализе иммуноглобулинов, нуклеиновых кислот или как тест подтверждения в сочетании с другими методами.

Обнаружение возбудителей, антигенов и антител при помощи суспензионных препаратов.

Принцип: фиксированные  на частицах компоненты вступают в  реакцию антигенантитело, которая  сопровождается образованием крупных, видимых невооруженным глазом агломератов. В суспензионных препаратах для  обнаружения и количественного  определения антигенов и антител используется свойство многих неорганических и органических веществ, таких как активированный уголь, дерматол, бентонит, каолин, гидроокись алюминия, си техническими возможностями лаборатории, контингентом зараженных людей, характером и масштабом распространения предполагаемой инфекции. Диагностику необходимо провести в наиболее короткие сроки, так как от этого зависит эффективность изоляции и лечения больных. При работе с патологическим материалом важно учитывать и предупреждать возможность заражения медицинского персонала, поэтому надо строго соблюдать инструкции по сбору материала от больных. Классические методы экспрессдиагностики в большинстве своем исчерпали себя, в связи с этим необходимо разрабатывать принципиально новые, такие как ПЦР и др. и автоматизировать существующие.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Заключение.

 

  Мероприятия по борьбе с инфекционными болезнями могут быть эффективными и дать надежные результаты в наиболее короткий срок только в случае планового и комплексного их проведения, т. е. систематического проведения по заранее составленному плану, а не от случая к случаю. Противоэпидемические мероприятия должны строиться с обязательным учетом конкретных местных условий и особенностей механизма передачи возбудителей данной инфекционной болезни, степени восприимчивости человеческого коллектива и многих других факторов. С этой целью основное внимание должно быть уделено в каждом случае наиболее доступному для нашего воздействия звену эпидемической цепи. Так, при малярии — это уничтожение возбудителей (плазмодиев малярии) в организме больного человека с помощью лечебных средств и уничтожение комаровпереносчиков; при пищевых токсикоинфекциях — санитарный надзор и изъятие из употребления зараженных продуктов; при бешенстве — уничтожение источника инфекции, т. е. бродячих собак и других животных; при полиомиелите — поголовная вакцинация детей и т. д.

Экспрессдиагностика ООИ и по сей день остается актуальной и одной из важнейших задач микробиологии и эпидемиологии.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список использованной литературы

 Ускоренные методы  диагностики инфекционных болезней (сб. тр.) Кишинев, "ШТИИНЦА", 1987. Препараты  для экспрессдиагностики (сб. тр.)  Ленинград, 1981. Иммунохимия и лабораторная  диагностика особо опасных инфекций (сб. тр.)  Саратов, 1985. Щербак Ю.Ф. Особо опасные инфекции  М., "Медицина", 1975. Ранняя и дифференциальная диагностика основных инфекционных заболеваний (уч.мет. пособие)  Ленинград,1988. Медицина катастроф (уч. пособие)  М., "ИНИ Лтд", 1996. Лебедева М.Н. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии  М., "Медицина", 1973. Борисов Л.Б., Козьмин Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии М., "Медицина", 1993. Повлович С.А. Медицинская микробиология в графах  Минск, "Вышэйшая школа", 1986, И.Г. Булкина «Инфекционные болезни», В.И. Покровский «Профилактика инфекционных заболеваний», Н.Р. Палеева «Справочник медицинской сестры».