Клонирование эмбриональных стволовых клеток мыши с применением автоматизированного комплекса для скрининга и отбора клонов ClonePixFL

Однако ЭСК привлекли всеобщее внимание в 1998 году после изолирования бессмертных линий ЭСК человека Д.Томсоном и Д.Герхартом. В 1999 году журнал “Science” признал открытие ЭСК третьим по значимости событием в биологии после расшифровки двойной спирали ДНК и программы "Геном человека". Осознание важнейшей роли ЭСК в биологии и медицине состоялось в опережающем режиме, поскольку в открытой печати в 1999 году об ЭСК человека появилось не более 4-5 фундаментальных публикаций (хотя биологические компании в конце ХХ века уже получили более 2500 патентов на новые технологии и манипуляции с ЭСК). Представляют интерес мотивы и аргументы лидирующих биологов, поставивших открытие ЭСК так высоко в истории биологии ХХ века [2].

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 3
1.1. Введение 3
1.2. Характеристика эмбриональных стволовых клеток 4
1.2.1. Эмбриональные стволовые клетки мыши 4
1.2.2. Эмбриональные стволовые клетки человека 7
1.2.3. Другие эмбриональные стволовые клетки 9
1.3. Клонирование 9
2. Материалы и методы 12
2.1. Культуры клеток 12
2.2. Клонирование 12
2.3. Методика получения и окраски метафазных препаратов ЭСК (кариотипирование) 13
2.4. Иммуноцитохимическое окрашивание ЭСК и дифференцированных клеток, полученных из них 15
2.5. Определение активности эндогенной щелочной фосфатазы 16
2.6. Выделение ДНК и ПЦР 16
2.7. Выделение, очистка РНК и ОТ-ПЦР 17
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 18
3.1. Клонирование клеток 18
3.2. Фенотип колоний полученных клонов после разделения на ClonePix 19
3.3. Анализ полученных данных 19
3.4. Кариотипирование 21
3.5. Активность щелочной фосфатазы 21
3.6. Маркер SSEA-1 эмбриональных стволовых клеток 22
3.7. ПЦР GAPDH 22
4. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 23