Питательные среды

Содержание

 

1. Питательные среды

 

2. Классификация питательных сред

 

Список литературы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Питательные среды

 
       Питательные среды — субстраты, состоящие из компонентов, обеспечивающих необходимые условия для культивирования микроорганизмов или накопления продуктов их жизнедеятельности.

Питательные среды различаются  по назначению, консистенции и составу. По назначению их условно подразделяют на две основные группы — диагностические  и производственные среды. Диагностические  питательные среды включают пять подгрупп: среды для выращивания  широкого спектра микроорганизмов; среды для выделения конкретного  возбудителя; дифференциальные среды, позволяющие различать отдельные  виды микроорганизмов; среды для  идентификации микроорганизмов  и накопительные среды, предназначенные  для обогащения конкретного вида микроорганизмов. К числу производственных относятся питательные среды, используемые при промышленном изготовлении медицинских  биологических препаратов (бактериальных  вакцин, анатоксинов и др.) и контроле их качества. Питательные среды для  производства бактерийных препаратов в отличие от диагностических  сред не должны содержать вредных  для человека примесей и оказывать  отрицательного влияния на процесс  производства (не препятствуя, в частности, удалению из изготавливаемых препаратов продуктов микробного метаболизма, балластных органических и минеральных  веществ).

По консистенции различают жидкие, плотные и полужидкие среды. Плотные  и полужидкие питательные среды  готовят из жидких посредством прибавления к ним агара или (реже) желатина. Агар – агар-полисахарид, получаемый из определенных сортов морских водорослей. Агар обычно вносят в питательные среды в концентрации 1—2% (при изготовлении полужидких сред — 0,2—0,4%), желатин — 10—15%. При t° 25—30° желатиновые среды плавятся, поэтому микроорганизмы на них выращивают преимущественно при комнатной температуре. В качестве плотных сред применяют также свернутую сыворотку крови, свернутые яйца, картофель и среды, содержащие 1,5% силикагеля.

По составу питательные среды делят на простые и сложные. Простые питательные среды обеспечивают питательные потребности большинства патогенных микроорганизмов (мясопептонный бульон, мясопептонный агар, бульон и агар Хоттингера, питательный желатин, пептонная вода и др.). К сложным относят специальные среды для микробов, которые не растут на простых питательных средах. Такие среды готовят, прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества, необходимые для размножения того или иного микроорганизма. Сложными питательные среды являются и дифференциально-диагностические среды, например среды Гисса с углеводами и индикатором, применяемые для определения видовой принадлежности исследуемого микроба по его ферментативной активности. Некоторые сложные среды, так называемые селективные, или элективные, используют для целенаправленного выделения одного или нескольких видов микроорганизмов путем создания оптимальных условий их выращивания и угнетения роста сопутствующей микрофлоры. Например, висмут-сульфитный агар — строго селективная среда для выделения сальмонелл, агар и среда Левина — слабоселективные среды для выделения энтеробактерий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Классификация питательных сред производится по их составу и назначению

1. По составу питательные среды делятся на простые и сложные

Различают группу сред общего назначения - простых. К этой группе относят мясо-пептонный бульон (простой питательный бульон), мясо-пептонный агар {простой питательный агар), питательный желатин. Эти среды применяются для выращивания многих патогенных микробов. Среды общего назначения, или простые питательные среды, готовятся обычно из гидролизатов с добавлением пептона и хлористого натрия. Их используют также как основу для приготовления сложных сред.

2. Ко второй группе относятся среды элективные, специальные и дифференциально-диагностические.

Среды элективные (селективные, избирательные, накопления, обогащения). Принцип создания элективных питательных сред основан на удовлетворении основных биохимических и энергетических потребностей того вида микроба, для культивирования которого они предназначены, или на добавление ингибиторов, подавляющих рост сопутствующей микрофлоры. Определенный состав и концентрация питательных веществ, микроэлементов, ростовых факторов при строго определённом значении pH или добавлении ингибиторов обеспечивают оптимальные условия для выращивания одного или нескольких видов микроорганизмов. При посеве на них материала, содержащего смесь различных микробов, раньше всего будет провялятся рост того вида, для которого среда будет элективной.

Примером элективных сред являются желточный бульон, селенитовый бульон, среда Плоскирева – для выращивания микробов семейства кишечных, щелочная пептонная вода – для холерного вибриона.

Желточный бульон. К МПБ добавляют 10-20% бычьей желчи. Желчь подавляет рост коков и воздушной флоры, но благоприятна для размножения сальмонелл.

Селенитовый бульон. Состоит из фосфатного бульона с добавлением натриевой соли селенита, которая является ингибитором роста кокковой флоры, кишечной палочки, но не задерживает роста сальмонелл.

Среда Плоскирева. Плотная среда, содержащая ингибиторы кишечной палочки, коков, но благоприятная для роста шигелл и сальмонелл, размножение которых не тормозится бриллиантовым зелёным и желчными солями.

Пептонная вода. Содержит 1% пептона и 0,5% хлористого натрия. Среда является элективной для хлорных вибрионов, т.к. они лучше других бактерий размножаются на “голодных средах”, особенно при щелочной реакции, потому что сами выделяют кислые продукты жизнедеятельности.

Специальные среды. Необходимы для культивирования бактерий, не растущих на простых питательных средах. Для некоторых организмов к простым питательным средам необходимо добавлять углеводы, кровь и др. дополнительные питательные вещества. 

Примерами простых питательных  сред являются сахарный бульон и сахарный агар для стрептококка (готовится соответственно из МПБ и МПА, к которым добавляется 0,5-2% глюкозы).

Для пневмококков и менингококков  специальной средой являются cывороточный бульон и сывороточный агар (для приготовления сывороточного бульона смешивают 1 часть МПБ с 2 частями свежей сыворотки, для получения, сывороточного агара к расплавленному МПА добавляется 10-25% стерильной лошадиной или бычьей сыворотки).

Дифференциально-диагностические  среды используют для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ". По своему назначению дифференциально-диагностические среды разделяют следующим образом:

1. Среды для выявления протеолитической  способности микробов, содержащие  в своем составе молоко, желатин,  кровь и т.д.

2. Среды с углеводами и многоатомными  спиртами для обнаружения различных сахаролитических ферментов.

В состав дифференциально-диагностических  сред, предназначенных для выявления  сахаролитических свойств и окислительно-восстановительных ферментов, вводят индикаторы: нейтральную красную, кислый фуксин, бромтимоловый синий, водный голубой с розовой кислотой (ВР). Изменяя свою окраску при различных значениях рН, индикатор указывает на наличие фермента и расщепление введённого в среду ингредиента.

Примеры дифференциально-диагностических  сред:

Среда Эндо. Состоит из МПА с добавлением 1% лактозы и обесцвеченного сульфитом натрия основного фуксина (индикатор). Среда Эндо имеет слаборозовый цвет. Используется в диагностике кишечных инфекций для дифференциации бактерий, разлагающих лактозу с образованием кислых продуктов, от бактерий, не обладающих этой способностью. Колонии лактозонозитивных микробов (кишечная палочка) имеют красный цвет вследствие восстановления фуксина. Колонии лактозонегативных микроорганизмов - сальмонелл, шигелл и др. -бесцветны.

К дифференциально-диагностическим  средам относятся короткий и развёрнутый  пёстрый ряд. Он состоит из сред с  углеводами (среды Гисса), МПБ, молока, мясопептонной желатины.

Среды Гисса готовятся на основе пептонной воды, к которой прибавляются химически чистые моно-, ди- или полисахариды (глюкоза, лактоза, крахмал и др.).

Для обнаружения сдвигов рН в результате образования кислот и разложения углевода в среды прибавляют индикатор. При более глубоком расщеплении углеводов образуются газообразные продукты (СО2, СН4 и др.), которые улавливаются при помощи поплавков - маленьких пробирочек, опущенных в среду кверху дном. Среды с углеводами могут готовиться и плотными – с добавлением 0,5-1% агар-агара. Тогда газообразование улавливается по образованию пузырьков (разрывов) в столбике среды.

На МПБ, входящем в пёстрый ряд, обнаруживают продукты, образующиеся при расщеплении аминокислот  и пептонов (индол, сероводород). Сероводород  обнаруживается путем помещения  в МПБ после засева культуры полоски  фильтровальной бумаги, пропитанной  раствором уксуснокислого свинца. При  расщеплении аминокислот, содержащих серу, выделяется сероводород, бумажка  чернеет за счёт образования сернистого свинца. Для определения индола можно  использовать сложный индикатор. Индол  образуется при расщеплении триптофана, и его можно обнаружить при  добавлении к культуре, выращенной на МПБ, этого индикатора. При наличии  индола МПБ окрашивается в зеленый  или синий цвет.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список литературы

1. Мишутсин Е.Н., Емцов Б.Т. – Микробиология. 2-ое издание – М.: Колос, 1978
2. http://www.chimmed.ru/new/ks/pitatelniesredi.php