Бактериологический метод исследования

Государственное бюджетное образовательное учреждение среднего профессионального образования города Москвы «Медицинское училище №15 Департамента здравоохранения города Москвы»(ГБОУ СПО «МУ №15 ДЗМ»

 

 

 

 

 

РЕФЕРАТ на тему:

Бактериологический метод исследования

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Выполнила:

                                                                            Студентка 101 гр

                                                                                 Сидорчук Кристина

 

Содержание:

1 Бактериологический  метод

2 Питательная  Среда

3 Классификация

4 Этапы бактериологического исследования

5 Сбор и  транспартировка проб биологических  материалов

6 Выделение и идентификация чистой культуры бактерий

7 Определение  чувствительности микроорганизмов к антибиотикам 
Бактериологический метод

Бактериологическое исследование основано на культивировании бактерий на питательных средах, выделении чистой культуры возбудителя и ее идентификации.

Чистой культурой называют популяцию микроорганизмов одного вида, как правило выращенную из изолированной колонии на плотной питательной среде.

Выбор метода культивирования, состава питательной среды зависит главным образом от типа питания и дыхания (биологического окисления) микроорганизмов. На рисунке показан наиболее распространенный способ посева исследуемого материала с целью выделения чистой культуры: механическое разобщение клеток микроорганизмов по поверхности плотной питательной среды с помощью бактериологической петли.

 

 

 

Питательная среда

Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного происхождения. Состав сред определяется метаболическими потребностями той или иной группы бактерий. Все питательные среды должны отвечать следующим требованиям:

• содержать основные питательные вещества в легкоусвояемой форме;
• быть влажными, изотоничными и нетоксичными (для исследуемых микробов);
• иметь определенную вязкость;
• иметь оптимальный показатель pH и окислительно-восстановительный (редокс) потенциал;
• обладать буферными свойствами;
• быть стерильными;
• по возможности быть прозрачными.

Классификация

• По исходным компонентам:
• натуральные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения(мясо, костная и рыбная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др.)
• синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде.
• По консистенции(степени плотности):
• жидкие
• полужидкие
• плотные
• Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым прибавляют агар-агар или желатин. Кроме того, в качестве плотных сред применяют свёрнутую сыворотку крови, свёрнутые яйца, картофель, среды с силикагелем. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.
• По составу:
• простые: мясопептонный бульон(МПБ), мясопептонный агар(МПА),  питательный желатин,
• сложные — готовят прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества.
• По назначению:
• основные — служат для культивирования большинства патогенных микробов. МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода.
• специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.
• селлективные(избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся селлективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH.Жидкие элективные среды называют средами накопления.
• дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности.
• консервирующие — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.

Этапы бактериологического исследования

1) Сбор и  транспортировка проб биологических  материалов

2) обработка  исследуемого материала физическими  или химическими факторами в  целях удаления или уменьшения  посторонней микрофлоры.

3) посев исследуемого  материала на питательные среды для получения изолированных колоний;

4) инкубация  засеянных питательных сред.

5) исследование колоний . Для изучения выбирают однородные изолированные колонии, располагающиеся далеко от краев чашки и по штриху петли, окружают их чертой, нумеруют и делают с них мазки;

6) пересев  с выбранных колоний на среды  накопления.

7) инкубация  посевов в термостате до появления  сплошного роста (обычно 1 -2 дня);

8) определение  чистоты выросшей на скошенных  средах путем макроскопического  осмотра роста и микроскопии  мазка из него;

9) идентификация  выделенной чистой к-ры и в  случае необходимости

10) заключение  о видовой принадлежности выделенной  колонии и ее свойствах.

Сбор и транспортировка проб биологических материалов

Основные требования, предъявляемые к отбору и транспортировке материала для бактериологического исследования:

• взятие материала до начала этиотропного лечения:
• соблюдение условий стерильности при сборе;
• техническая правильность сбора;
• достаточное количество материала;
• обеспечение температурного режима хранения и транспортировки;
• сведение к минимуму промежутка времени между сбором материала и посевом на плотные питательные среды.

Транспортировку материала в лабораторию необходимо осуществить как можно скорее (желательно немедленно, но не более чем через 1-2 ч после его взятия). Следует соблюдать определённый температурный режим. Стерильные в норме материалы (кровь, СМЖ) хранят и доставляют в лабораторию при температуре 35-37 °С. Нестерильные материалы (моча, отделяемое дыхательных путей и др.) хранят при комнатной температуре не более 1-2 ч или не более 18 ч при 4 °С (условия бытового холодильника). При невозможности доставить пробы в лабораторию в регламентированные сроки рекомендовано использовать транспортные среды, предназначенные для сохранения жизнеспособности возбудителей в условиях консервации.

 

 

Кровь

для исследования следует брать у больного в период подъёма температуры тела. Рекомендовано исследовать 4-6 проб крови, взятых с интервалом 4 ч.

Пробу крови (10 мл у взрослого и 5 мл у ребёнка) засевают минимум в два флакона со средой для аэробных и анаэробных микроорганизмов в соотношении 1:10.

Испражнения

для бактериологического исследования отбирают с помощью стерильных деревянных шпателей в количестве 3-5 г в стерильный сосуд с плотно закрывающейся крышкой. Исследование взятого материала необходимо начать как можно быстрее после доставки его в лабораторию (не позже чем через 2 ч).

При отборе испражнений желательно направлять для исследования патологические примеси (слизь, частицы эпителия и др.), избегая попадания в материал примеси крови, обладающей бактерицидными свойствами.

Моча

Среднюю порцию свободно выпущенной мочи в количестве 3-5 мл собирают в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Предпочтительно отбирать утренние порции мочи.

Жёлчь

собирают во время дуоденального зондирования в процедурном кабинете, отдельно по порциям А, В и С в три стерильные пробирки, соблюдая правила асептики.

Промывные воды желудка

собирают в стерильные банки в количестве 20-50 мл. Следует иметь в виду, что промывание желудка в этих случаях проводят только индифферентными (не обладающими бактериостатическим или бактерицидным действием на микроорганизмы) растворами, лучше кипячёной водой без добавления соды, перманганата калия и др.

Мокрота.

утреннюю мокроту, выделяемую во время приступа кашля, собирают в стерильную банку. Перед откашливанием больной чистит зубы и полощет рот кипячёной водой в целях механического удаления остатков пищи, .спущенного эпителия и микрофлоры ротовой полости.

Отделяемое глотки, ротовой полости и носа.

Материал из ротовой полости берут натощак или через 2 часа после еды стерильным ватным тампоном или ложечкой со слизистой оболочки или ее пораженных участков у выхода протоков слюнных желез, поверхности языка, из язвочек. При наличии пленки ее снимают стерильным пинцетом.

Материал из носовой полости забирают сухим стерильным ватным тампоном, который вводят в глубь полости носа. Материал из носоглотки берут стерильным заднеглоточным тампоном.

Выделение и идентификация чистой культуры бактерий

• Аэробные и факультативно-анаэробные бактерии.
• На первом этапе из исследуемого материала готовят мазки, микроскопируют их, затем сеют материал на плотную среду в чашки Петри шпателем или бактериологической петлей. При этом достигается механическое разъединение микроорганизмов на поверхности питательной среды, что позволяет получить их рост в виде изолированных колоний

На втором этапе изучают культуральные свойства бактерий (характер их роста на питательных средах).

• Макроскопическое изучение колоний в проходящем и отраженном свете.

Чашку поворачивают дном к себе и рассматривают колонии в проходящем свете. При наличии различных видов колоний их нумеруют и описывают каждую в отдельности. Обращают внимание на следующие свойства:

 а) величину  колоний (крупные — более 4 мм  в диаметре, средние — 2—4 мм, мелкие  — 1 — 2 мм, карликовые — менее 1 мм);

б) форму очертаний колоний (правильно и неправильно округлая, розеткообразная, ризоидная и др.);

в) степень прозрачности (непрозрачная, полупрозрачная, прозрачная).

Микроскопическое изучение колоний.

Чашку устанавливают вверх дном на предметном столике микроскопа, опускают конденсор и с помощью объектива 8х изучают колонии, фиксируя в протоколе их структуру (гомогенная или аморфная, зернистая, волокнистая и др.) и характер краев (ровные, волнистые, зазубренные, бахромчатые и др.).

Из части колоний готовят мазки (при взятии материала из колонии отмечают ее консистенцию — сухая, слизистая, пастообразная), окрашивают по Граму и микроскопируют, выясняя тинкториальные свойства микроорганизмов. При наличии однородных бактерий остаток колоний пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры в достаточном количестве. Пробирки с посевами помещают в термостат на 18 — 24 ч при температуре 37 °С.

На третьем этапе изучают образовавшиеся в чашках изолированные колонии и из наиболее типичных делают мазки. Остаток колонии засевают в среду Китта—Тароцци. для накопления чистой культуры и инкубируют при 37 °С.

На четвертом этапе выросшую на среде Китта—Тароцци культуру проверяют на чистоту и идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим, антигенным и другим свойствам.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам обычно применяют:

•  Метод диффузии в агар.

На агаризованную питательную среду засевают исследуемый микроб, а затем вносят антибиотики. Обычно препараты вносят или в специальные лунки в агаре, или на поверхности посева раскладывают диски с антибиотиками («метод дисков»). Учет результатов проводят через сутки по наличию или отсутствию роста микробов вокруг лунок (дисков).

Метод дисков — качественныйи позволяет оценить, чувствителен или устойчив микроб к препарату

• Методы определения минимальных ингибирующих и бактерицидных концентраций, т. е. минимального уровня антибиотика, который позволяет invitroпредотвратить видимый рост микробов в питательной среде или полностью ее стерилизует. Это количественные методы, которые позволяют рассчитать дозу препарата, так как концентрация антибиотика в крови должна быть значительно выше минимальной ингибирующей концентрации для возбудителя инфекции. Введение адекватных доз препарата необходимо для эффективного лечения и профилактики формирования устойчивых микробов.