Санитарно-показательные микроорганизмы

Из энтеробактерий выделяют БГКП — бактерии, обладающие дополнительным свойством

сбраживать глюкозу до кислоты и газа при температуре 37°С. Эта группа учитывается как

БГКП по ГОСТ 2874—82. Среди БГКП выделяются лактозоположительные палочки (ЛКП) (колиформные по международной классификации), которые способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при 37°С. Из группы ЛКП выделяют фекальные кишечные палочки (ФКП),

сохраняющие способность разлагать лактозу при 44,5°С. Из ФКП к Е. coli относят только

бактерии, не способные расти на цитратной среде. Последние являются показателями свежего фекального загрязнения.

 

 

ЭНТЕРОКОККИ

Энтерококки являются представителями нормальной микрофлоры кишечника человека и

животных и выделяются в окружающую среду в довольно значительных количествах (в 1 г фекалий до 108—109 жизнеспособных особей), но примерно в 10 раз меньше, чем БГКП. В настоящее время энтерококки считаются вторым после БГКП санитарно-показательным

микроорганизмом при исследовании воды водоемов, особенно в местах рекреации

плавательных бассейнов, сточных вод, почвы, предметов обихода.

К энтерококкам относят два вида стрептококков семейства Streptococcaceae рода

Streptococcus — S. faecalis (биовар liquetaciens и zymogenes) и S. faecium (биовар durans).

Энтерококки представляют собой диплококки ланцетовидной, овальной или круглой формы, иногда располагающиеся цепочками, они грамположительны, спор не образуют. В материале при выделении от больных обнаруживается капсула. Они хорошо размножаются на простых питательных средах, но при выращивании необходимо пользоваться средами с ингибиторами, подавляющими сопутствующую флору (кишечная палочка, протей и др.). Лучший рост

наблюдается при добавлении в среды глюкозы, дрожжевых препаратов и других стимуляторов роста. При культивировании в жидких питательных средах они образуют осадок и диффузное помутнение. На плотных средах колонии энтерококков мелкие, серовато-голубые, прозрачные,круглые с ровными краями, выпуклые, с блестящей поверхностью. На кровяном агаре в

зависимости от биовара они могут давать гемолиз (S. liquefaciens), изменение цвета вокруг

колоний на зеленовато-бурый — гемоглобин превращается в метгемоглобин (S. faecalis).

Многие штаммы не вызывают изменения цвета среды. Энтерококки разлагают глюкозу и

маннит до кислоты и газа, но не обладают каталазной активностью (в отличие от других

грамположительных кокков). По антигенной структуре они однородны и относятся к группе D по классификации Ленсфильд. Дифференцирование энтерококков от стрептококков проводят по тестамШермена (табл. 2).

Энтерококки довольно устойчивы к физическим и химическим факторам, что и было

положено в основу дифференциации энтерококков от других стрептококков, входящих в

нормальную микрофлору человека и вызывающих заболевания верхних дыхательных путей. Помимо устойчивости к температуре (легко переносят нагревание до 60°С в течение 30 мин),энтерококки резистентны к действию активного хлора, некоторых антибиотиков, красителей и др. Дифференциацию S. faecalis от S. faecium проводят по способности ферментировать глицерин: S. faecalis расщепляет глицерин в аэробных и анаэробных условиях, в то время как S.faecium— только в аэробных. Для дифференциации видов энтерококков рекомендовано свыше 30 биохимических тестов: ферментация сорбита, маннита, арабинозы, редукция ТТХ (2, 3, 5,-

трифенилтетра-золий хлорид), пептонизация молока и др. Необходимость разделения

энтерококков на виды связана с их неодинаковой распространенностью у людей и животных.

Однако в обычной, повседневной практике все представители энтерококков считаются

санитарно-показательными микроорганизмами.

Энтерококки принято считать показателями свежего фекального загрязнения, что связано с их биологическими свойствами. Прежде всего энтерококки быстрее отмирают в окружающей среде в сравнении с БГКП, не способны размножаться в объектах внешней среды, за исключением некоторых пищевых продуктов. Следует помнить, что чистые культуры

отдельных видов энтерококков применяются в производстве молочнокислых продуктов, сыров

и т. д. благодаря их высокой ферментативной деятельности.

Широкому использованию энтерококков как показателей фекального загрязнения

препятствуют трудности, связанные с выделением их из окружающей среды: требуется больше

времени, чем при индикации БГКП, и нужны сложные в приготовлении питательные среды.

Тем не менее в «Унифицированных методах исследования качества воды» стран— членов СЭВ

(1975), в ряде документов санитарного  законодательства СССР и стандартах  качества питьевой

воды в Англии, США, Франции, Югославии энтерококки признаны дополнительным

показателем фекального загрязнения воды.

 

 

КЛОСТРИДИИ

Клостридии, так же как энтерококки и БГКП, являются обитателями кишечника человека и

некоторых теплокровных животных и выделяются в окружающую среду с фекалиями в

сравнительно небольшом количестве — 106 в 1 г. К имеющим санитарно-показательное

значение относятся главным образом С. perfringens и С. sporogenes, способные редуцировать

сульфит в сульфитных средах при 45°С в течение 12—24 ч. При определении санитарно-

показательных клостридии высчитывают количество их в 1 л воды или в 1 г почвы (индекс

клостридии). Как правило, в не загрязненных фекалиями образцах почвы клостридии не

обнаруживаются.

С. perfringens относится к семейству Bacillaceae и представляет собой крупные (5—8 мкм в

длину и 1—2 мкм в ширину) неподвижные полиморфные грамположитель-ные

спорообразующие палочки. В организме человека и животных они способны образовывать

капсулы. Споры С.perfringens термоустойчивы (особенно типов С и А, которые выдерживают

кипячение до 2 ч). С. perfringens является анаэробом, одним из возбудителей газовой

анаэробной инфекции, некоторые серологические варианты (А и С) способны вызывать

пищевые токсико-инфекции.

С. perfringens легко культивируются на простых питательных средах, но обязательно с

добавлением сахара как источника энергии. Они обладают слабыми протеолитическими

свойствами, но имеют большой набор сахаролитических ферментов, сбраживающих сахара с образованием кислоты и газа. Эти микробы вызывают быстрое свертывание молока (в течение 2—5 ч) с образованием губчатого сгустка, «подбрасываемого» к ватной пробке пробирки за счет газообразования, и прозрачной сыворотки. При идентификации С. sporogenes учитывается характерное их свойство вызывать пептонизацию молока и образовывать в нем споры, которые можно обнаружить на 5-е сутки.

Большим преимуществом С. perfringens перед кишечными палочками как санитарно-

показательными микроорганизмами является быстрая и технически несложная индикация их в окружающей среде, не требующая последующей идентификации. При посеве материала

исследуемых объектов (почвы, пищевых продуктов, перевязочных материалов и т. п.) на среду

Вильсона— Блера, молоко, сульфит-неомицинполимиксиновую среду (СНП, предложенную Г. И. Сидоренко, Ю. П. Пивоваровым в 1968 г.) уже через 8—12 ч инкубации в термостате при температуре 45°С можно получить ответ о присутствии клостридии. Только в исключительных

случаях выделяется чистая культура для детального изучения. Незаменимы С. perfringens как

показатели загрязнения пищевых продуктов и почвы в том случае, когда они определяются с

целью обнаружения других патогенных клостридии— возбудителей ботулизма и столбняка.

Против использования C.perfringens как санитарно-показательных микроорганизмов есть двавозражения: во-первых, они способны образовывать споры и, следовательно, длительно

сохраняться в объектах окружающей среды, во-вторых, возможно их размножение в почве и

других объектах. Однако последнее утверждение до сих пор остается спорным.

Исследованиями последних лет было доказано, что в почве имеются токсические вещества,

выделяемые микробами-антагонистами_______, которые способствуют гибели анаэробов, в равной

степени действуя на вегетативные тела клостридии и их споры. Кроме того, для прорастания

спор клостридии нужны толчок в виде «теплового» шока (нагревание до 70°С в течение 30 мин)

и температура не ниже 18—20°С.

Обнаружение С. perfringens в определенном титре в окружающей среде свидетельствует о

старом фекальном загрязнении. Однако если количество их велико и они обнаруживаются

вместе с БГКП, то это говорит о свежем фекальном загрязнении.

Несомненно, должна проверяться на присутствие C.perfringens вода, подаваемая на

предприятия консервной промышленности, в производстве которых нахождение в воде

клостридии особенно опасно. Поэтому строго нормируется и контролируется их количество: в

объеме 100 мл воды не должна обнаруживаться ни одна особь клостридии.

В ряде стран (Англия, Франция, Югославия) клостридии включены в стандарты качества

воды как дополнительный показатель. По «Международным стандартам качества питьевой

воды», утвержденным ВОЗ в 1973 г., считается обязательным при выборе нового источника

водоснабжения определение титр-перфрингенс как показателя возможного присутствия

патогенных клостридии.

 

 

 

 

СТАФИЛОКОККИ

Стафилококки являются представителями нормальной микрофлоры. Основным местом

локализации их служат слизистые оболочки верхних дыхательных путей человека и

некоторых теплокровных животных, а также кожные покровы. Присутствуют стафилококки и в

кишечнике здоровых людей. В окружающую среду — в воздух, на предметы обихода —

стафилококки попадают со слюной и мокротой при разговоре, кашле, чиханьи, пении, а также с

кожи, из мест воспалений и раневых поверхностей. Загрязнение воды водоемов

стафилококками происходит при купании людей. При этом титр стафилококков изменяется в

зависимости от количества купающихся, что особенно легко учесть в бассейнах, где число

стафилококков может достигать десятков тысяч в 1 л воды. Стафилококки являются важным показателем загрязненности воды, позволяющим контролировать состояние воды в зонах рекреации водоемов. Стафилококки более длительно выживают в воде (особенно в морской) по сравнению с БГКП и энтерококками. С распространением стафилококков в окружающей среде тесно связана проблема внутрибольничных инфекций стафилококковой природы, которая в свою очередь неотделима от проблемы носительства патогенных стафилококков у людей, особенно среди медицинского персонала. Все это позволяет отнести стафилококки к бактериям-индикаторам воздушно-капельного загрязнения и использовать их определение при санитарно-микробиологической оценке объектов окружающей среды.

Стафилококки относятся к семейству Micrococcaceae роду Staphylococcus и представлены

тремя видами: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus, встречающимися у человека.

Стафилококки имеют сферическую форму, располагаются в виде гроздей винограда,

грамположительны, спор и капсул не образуют, неподвижны. Они неприхотливы к

питательным средам, являются факультативными анаэробами, на мясопептонном агаре

образуют круглые непрозрачные колонии диаметром 1—2 мм, гладкие, блестящие, с различным пигментом. S. aureus образуют, как правило, золотистый пигмент, у других видов колонии могут иметь цвет от эмалево-белого до палевого и лимонно-желтого. На кровяном агаре стафилококки, обладающие гемолизином, способны лизировать эритроциты. В жидких питательных средах стафилококки дают диффузный рост и осадок на дне.

Биохимически стафилококки достаточно активны. Они ферментируют до кислоты без газа

маннит, мальтозу, лактозу, глюкозу, сахарозу, образуют сероводород, не выделяют индол,

разжижают желатин, восстанавливают нитраты в нитриты. Патогенные стафилококки

выделяют ряд ферментов: плазмокоагулазу, лецитовителлазу, ДНК-азу, фибринолизин, бета-лактамазу, некоторые штаммы способны выделять энтеротоксины. При идентификации патогенных стафилококков (S. aureus) принято определять их способность коагулировать цитратную плазму, ферментировать маннит в анаэробных условиях и наличие лецитовителлазы.

При эпидемиологических обследованиях для установления источника инфекции, путей ее

распространения применяется определение фаговаров. Международным комитетом по

определению фаговариантов для стафилококков предложен набор из 20 основных фагов,