Стандартизация лекарственного растительного сырья, обладающего адаптогенным действием, на примере растений семейства аралиевые

5 мл извлечения или  2 мл настойки в колбе вместимостью 10 мл упаривают на роторном растворителе при температуре не выше 50⁰С до влажного остатка, добавляют 2 мл воды и остаток тщательно растворяют. Полученный раствор с помощью шприца наносят на патрон последовательным пропусканием 5 мл 95% спирта и и 10 мл воды. Колбу дважды промывают по 4 мл воды и каждую порцию тем же шприцем пропускают через патрон со скоростью 1 мл/мин. Элюат отбрасывают. Сумму гинсенозидов элюируют 3 мл 95% спирта в мерную колбу, доводят раствор спиртом до метки. 1 мл раствора помещают в мерную колбу и доводят раствором до метки (испытуемый  раствор).

0,5 мл испытуемого раствора  переносят в отдельную колбу  и добавляют 0,5 мл 8% спиртового  раствора ванилина, закрывают пробкой  и помещают на водяную баню со льдом на 5 мин. Далее добавляют 5 мл конц. раствора серной кислоты, тщательно перемешивают. Пробирку помещают в водяную баню с температурой 60 С на 10 мин., охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность. Параллельно проводят контрольный опыт.

Содержание суммы гинсенозидов в корнях (Х) и настойке (Х₁) в пересчете не гинсенозид проводят по формулам.

                                            =

 

Где W – влажность сырья, в %; D- оптическая плотность испытуемого раствора, D₀ – оптическая плотность контрольного раствора; 2- объем настойки, взятый на анализ; 222 – Е_1см продукта взаимодействия гинсенозида Rb₁ с ванилин-сернистым реагентом; 0,9 – поправочный коэффициент.

Содержание суммы гинсенозидов в настойке должно быть не менее 0,3-0,45%; в корнях  - не менее 3%.

Спектр поглощения суммы  гинсенозидов имеет выраженный максимум при 5454 нм. И подобен спектру панаксадиола и спектру спиртового извлечения (рис.3)

 

 

 

                                                                  Рис.3. Спектры поглощения в видимой области                                         продуктов:1- спиртовое извлечение корня,

2- фракция II ( сумма гинсенозидов),

3- РСО (панаксадиол).

 

 

Так как спектр поглощения панаксадиола и сумму гинсенозидов имеют близкие длины волн 545 4 нм, это дает основание предложить панаксадиол в качестве рабочего стандартного образца для количественного определения суммы гинсенозидов, в качестве аналитической длины волны – 545 нм.

В связи с ограниченной доступностью (дороговизной) индивидуальных гинсенозидов и агликонов, на практике используют Е _{1 см}, равной 222 для выражения содержания суммы гинсенозидов в женьшене корнях и настойке в эквиваленте гинсенозида Rb_1.[6]

Идентификация корней элеутерококка  по Британской фармакопее ХVиздания: к 0,5 г измельченных корней добавляют 20 мл разбавленного этанола (1:2), смешивают 15 мин и центрифугируют и используют жидкость в качестве исходного раствора. Отдельно растворяют 1 мг элеутерозида В для хроматографирования в растворе метанола (1:2) до получения 20 мл раствора. 2 мл этого раствора снова разбавляют 20 мл разбавленного метанола до получения 20 мл раствора и используют этот раствор в качестве стандарта. Выполняют испытание с 10 мл исходного раствора и раствора сравнения методом жидкостной хроматографии в соответствии со следующими условиями: пик времени удерживания элеутерозида В соответствует такому же времени удерживания полученного стандартного раствора.

Условия выполнения. Детектор: УФ-спектрофотометр ( длина волны 265нм). Колонка: используется нержавеющая стальная колонка 4,6 см по внешнему диаметру  и 15 см в длину, погруженная в октадецилсилановый силикагель жидкостного хроматографа. Температура в колонке поддерживается на уровне 50^оС. Подвижная фаза: смесь воды и ацетонитрила (9:1). Время удерживания элеутерозида В около 10 мин. [1]

Срок годности женьшеня корней и настойки по новому показателю (сумма гинсенозидов) проследили в течение 3,5 лет. При истечении указанного срока годности при хранении в условиях, соответствующих НТД, показатели остались неизменными. Установлены сроки годности корней и настойки – 3 года. [6]

Стандартизацию сырья  аралии маньчжурской производят по содержанию суммы аралозидов в пересчете на аммонийную соль аралозидов A, B,C с усредненной молекулярной массой не менее 5 % методом потенциометрического титрования.

Аналитическую пробу сырья  измельчают до размера частиц, проходящими сквозь сито с отверстиями 1 мм. Около 5 г неизмельченного сырья помещают в патрон из фильтровальной бумаги и опускают в экстрактор аппарата Сокслета с объемом 150-200 мл. В колбу-приемник заливают 250 мл метилового спирта, 70 мл 50% раствора серной кислоты и экстрагируют на кипящей водяной бане 7 часов. Полученную смесь разбавляют водой вдвое и охлаждают в течении 10 мин. Выпавший осадок отфильтровывают через стеклянный фильтр ПОР-16 диаметром не менее 50 мм. Первую порцию отфильтровывают без вакуума, затем, когда отделение фильтрата почти прекратится, осторожно включают вакуум и фильтруют оставшуюся часть. Осадок промывают водой до нейтральной реакции по универсальной индикаторной бумаге, затем подсушивают не выключая вакуума. С воронки осадок количественно переносят 50 мл горячей смеси метилового и изобутилового спиртов в соотношении 1:1,5 в стеклянный стакан вместимостью 100 мл. Полученный раствор титруют потенциометрически раствором едкого 0,1М натрия едкого в смеси метилового спирта и бензола. Отмечают количество титранта, израсходованного на доведение рН испытуемого раствора до 7,0. Параллельно проводят контрольный опыт.

Содержание суммы аралозидов в пересчете на аммонийную соль аралозидов А,В,С с усредненной молекулярной массой, абсолютно сухое сырье в процентах вычисляют по формуле:

 

 

0,10422- количество солей  аралозидов, соответствующее 1 мл раствора едкого натра, в граммах; V-объем раствора NaOH, израсходованного на титрование пробы, в мл; V₁ – NaOH , израсходованного на доведение рН до 7,0; V₂ - объем NaOH, израсходованного на титрование контрольной пробы, в мл, m – масса сырья, в г; W-потеря в массе при высушивании в процентах. [3]

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Глава 4

Препараты, получаемые из лекарственных растений семейства  аралиевые

Известно, что препараты, полученные из корня женьшеня обладают выраженным адаптогенным действием. Очищенный сухой экстракт корня более эффективен, чем другие препараты женьшеня. Основой производства данного экстракта является процесс экстрагирования сырья методом перколяции 40% этиловым спиртом. Так как экстрагирование растительного материала, имеющего клеточную структуру, является сложным физико-химическим процессом, на протекание которого влияют множество факторов. Поэтому необходимо произвести оптимизацию данного процесса.

Факторы, влияющие на процесс  экстрагирования и качество экстракта:

- продолжительность настаивания,  мин. Для набухания и растворения  экстрагируемых веществ требуется определенное время. Излишнее время настаивания способствует переходу в вытяжку большого количества балластных веществ;

- скорость вытеснения. Разность  концентраций является движущей  силой диффузионного процесса. Поэтому  важно поддерживать максимальный  перепад концентраций. Это определяет  как полноту извлечения действующих  веществ, так и качественный  состав получаемой вытяжки;

- плотность загрузки сырья,  определяет эффективную поверхность  экстракции

-измельченность сырья. Оптимальная измельченность увеличивает площадь соприкосновения фаз, ускоряет процесс массопереноса, оказывает влияние на гидродинамические характеристики слоя и как следствие ускоряет проникновение экстрагента и растворения низкомолекулярных и высокомолекулярных веществ;

- модуль эктракции, выраженный в отношении массовых частей сырье-экстрагент. От количества эктрагента зависит разность концентраций, а поскольку необходимо получить сухой экстракт, то чем концентрированнее получается вытяжка, то тем это более экономически  целесообразно. (см. табл.2) [10]

               Таблица 2

Уровни варьирования факторов, влияющих на процесс экстрагирования  корня женьшеня

Х	Фактор	Нижний уровень	Основной уровень	Верхний уровень	Интервал варьирования фактора
Х1	Время настаивания, м	90	135	180	45
Х2	Скорость вытеснения	1,30(0,60)	1,95(0,95)	2,60 (1,30)	0,65 (0,35)
Х3	Плотность загрузки	0,34	0,37	0,40	0,03
Х4	Измельченность сырья	1,10	1,65	2,20	0,55
Х5	Соотношение массовых количеств  сырье-экстрагент	1:5	1:6,5	1:8	1:1,5

 

Из корня женьшеня также  готовят настойку 1:5 и 1:10 на 70% этиловом спирте. Для этого собирают осенью на 5-6 году жизни, отмывают, цельные  или разрезанные вдоль на куски  и высушивают корни растения женьшеня – Panax ginseng C.A. Mey. Применяют также корни женьшеня пятилистного (Panax quinqueafolium) и женьшеня ползучего (Panax repens). Назначают внутрь за 30-40 мин до еды 15-25 капель 2-3 раза в день. Курс лечения 30-40 дней. При необходимости его повторяют через 2-3 недели.

Противопоказания: гипертоническая  болезнь, повышенная возбудимость, бессонница, кровоточивость. Как и другие аналогичные  настойки, не следует принимать настойку женьшеня во второй половине дня.

В последние годы биотехнологическими  методами удалось получить in vitro из культуры тканей корня женьшеня биомассу, близкую по составу, органолептическим и фармакологическим свойствам к природному корню женьшеня.

Из биомассы получена настойка «Биоженьшень» (Tinctura «Bioginseng»), близкая по действию к обычной настойке женьшеня. Настойка «Биоженьшень» - прозрачная жидкость от желтого до коричневого цвета со специфическим запахом, солоновато-горького вкуса. Изготовлена на 40% этиловом спирте с содержанием 10% (1:10) сухой биомассы женьшеня. Принимают внутрь за 30-40 до еды по 30-50 капель 2-3 раза в день. Максимальная суточная доза для взрослых – 200 капель.

Хранение: список Б. В прохладном, защищенном от света месте. При хранении возможно появление легкой опалесценции и выпадение небольшого осадка.

Из корневищ заманихи изготовляли  спиртовую настойку (Tinctura Echinopanacis) 1:5 на 70% спирте. 20 г измельченных корней заманихи заливают 100мл 70% спирта, настаивают в теплом темном месте 10--15 дней и процеживают в темную стеклянную банку. Настойка заманихи высокой имеет светло-коричневый цвет, горьковатый вкус и своеобразный запах. Принимают ее по 30--40 капель 2--3 раза в день до еды, как средство, стимулирующее центральную нервную систему при астенических состояниях, при гипотонии. Курс лечения: 1,5-2 мес. Хранят в прохладном месте.

Это прозрачная жидкость янтарного  цвета со своеобразным запахом, приятным вкусом. Содержит следы алкалоидов, эфирные масла, сапонины, гликозиды.

По действию препараты  заманихи являются аналогами препаратов женьшеня, но действуют слабее. Настойку заманихи применяют как стимулирующее  средство при астении, депрессивных состояниях, гипотонии, она обладает общеукрепляющим действием, используется после перенесенных заболеваний, при  депрессивных состояниях, а также  при гипотонии. При астенических состояниях под влиянием настойки заманихи у больных уменьшаются головная боль, боль в области сердца и неприятные субъективные ощущения в различных частях тела, снижается утомляемость и раздражительность, улучшается сон.

Положительные результаты получены у больных вялотекущей шизофренией  и с преобладанием в клинической  картине депрессии. Под влиянием лечения заманихой больные становятся активнее, охотнее вступают в контакт  с окружающими, у них появляется интерес к событиям и людям.

Использование настойки заманихи в комплексном лечении больных  сахарным диабетом наиболее эффективно в тех случаях, когда в клинической  картине отмечаются симптомы адинамии.

Настойку заманихи применяют  при общей слабости организма, сердечной  недостаточности, физическом и нервном  переутомлении, чувстве усталости, пониженной работоспособности, половом  бессилии и некоторых нервных  и психических заболеваниях. Настойка заманихи в умеренных дозах повышает кровяное давление, а в средних  и больших дозах снижает его. Подобно настойке женьшеня, действует  возбуждающе на центральную нервную  систему, повышает общий тонус и  работоспособность организма. Применяют  также в комплексной терапии  при лечении сахарного диабета.

Также получают настойку корневищ с корнями заманихи на 70% спирте. По действию на организм настой корневищ близка к женьшеню, но несколько слабее. Ее применяют как средство, стимулирующее центральную нервную систему, при астеническом и депрессивном состояниях, а также при гипотензии - по 30-34 капель до еды 2-3 раза в день

Для медицинского применения предложены новые лекарственные  формы заманихи: порошок и таблетки сухого экстракта смеси эхиноксозидов. Также применяются препараты, сочетающие в себе шиповник, женьшень, аралию маньчжурскую и другие лекарственные растения.

 

Сироп-тоник с шиповником. Бодрящий, тонизирующий напиток с  выраженными антистрессовыми свойствами. Полезные сочетания комплекса природных  витаминов шиповника и адаптогенных свойств корней заманихи способствует повышению физической и интеллектуальной активности. Применять по 1-2ст.ложке, добавляя в чай, кофе, другие напитки.

Настойка корней аралии маньчжурской оказывает хорошее лечебное действие при послегриппозных астениях и некоторых других заболеваниях центральной нервной системы. Отмечена способность препаратов аралии нормализовать сон у больных с психическими заболеваниями, страдающих бессонницей. Под влиянием настойки улучшалось состояние больных с повышенной нервной возбудимостью. Очищенные гликозиды корней растения тоже оказывают возбуждающее действие. В частности, они способны устранять изменения электроэнцефалограммы, вызываемые веществами, угнетающими центральную нервную систему. Стимулирующее действие на центральную нервную систему свойственно также препаратам коры ствола растения.