Мокрота

прожигании бактериологической петли

Окраска по методу Циля-Нильсена

•Реактивы

Раствор фуксина

Основной фуксин 0,3г

Технический 95%-ный этиловый спирт 10мл

Растворите основной фуксин в спирте . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Раствор 1

Раствор фенола

Кристаллический фенол 5,0 г

Дистиллированная вода 100 мл

Растворите кристаллы фенола

в дистиллированной воде (может

потребоваться легкое нагревание) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Раствор 2

Рабочий раствор

Смешайте 10 мл раствора 1 и 90 мл раствора 2, перелейте в темную бутыль. Напиши-

те на этикетке название раствора, дату приготовления и срок хранения. Раствор мож-

но хранить при комнатной  температуре в течение 6–12 месяцев; перед использова-

нием раствора его следует профильтровать.

•Обесцвечивающий реактив: 3% кислотно-спиртовой раствор

Концентрированная соляная кислота (техническая) 3 мл

Технический 95%-ный этиловый спирт 97 мл

Аккуратно добавьте концентрированную соляную кислоту к 95%-ному спирту. Всегда

осторожно вливайте кислоту в спирт, но ни в коем случае не наоборот. Раствор само-

произвольно нагреется. Храните раствор  в темной бутыли. Напишите на этикетке

название раствора, дату приготовления  и срок хранения. Раствор можно  хранить при

комнатной температуре в течение 6–12 месяцев.

В странах, где дефицит спирта, в  качестве обесцвечивающего реактива можно  ис-

пользовать 25%-ный раствор серной кислоты. Этот раствор готовят следующим  об-

разом:

•Обесцвечивающий реактив: 25%-ный раствор серной кислоты

Концентрированная серная кислота (техническая) 25 мл

Стерильная дистиллированная вода 75 мл

Аккуратно добавьте концентрированную серную кислоту к воде. Всегда осторожно

добавляйте кислоту  к воде, но не наоборот. Раствор самопроизвольно нагревается.

Напишите на этикетке название раствора, дату приготовления и срок хранения.

Раствор можно хранить в темной бутыли при комнатной температуре  в течение

6–12 месяцев.

•Докрашивающий раствор: метиленовый синий

Хлорид метиленового синего 0,3 г

Дистиллированная вода 100 мл

Растворите хлорид метиленового синего в дистиллированной воде и храните готовый

раствор в темной бутыли. Напишите на этикетке название раствора, дату приготов-

ления и срок хранения. Раствор можно хранить при комнатной температуре в тече-

ние 6–12 месяцев.

•Методика

См. схему 2 на следующей странице.

МЕТОДИКА

Поместите маркированные предметные стекла на подставку («салазки») группами

(максимально по 12 шт.) так, чтобы  они не касались друг от  друга

Налейте на каждое стекло доста-

точное количество раствора Циля-

Нильсена (карбол-фуксина), про-

фильтрованного перед употребле-

нием, или накройте каждый препа-

рат полоской фильтровальной бу-

маги, если раствор красителя перед

использованием не фильтровался

Осторожно подогрейте препарат

до появления пара.

Не доводите до кипения.

Подогретый препарат оставляют

на 5 минут.

Ни в коем случае не допускайте

полного испарения  жидкости

Если использовались полоски фильтровальной бумаги, удалите их пинцетом.

Аккуратно промойте стекла под струей воды до полного удаления краски

Нанесите обесцвечивающий раствор (примерно на 3 минуты)

Тщательно промойте стекло водой. Удалите  остатки воды

Нанесите на предметное стекло докрашивающий раствор

Проводите дополнительное окрашивание  в течение 60 секунд

Тщательно промойте стекло

водой. Удалите остатки влаги.

Оставьте препарат высыхать

на воздухе.

Не промокайте

Окрашивание флуорохромами

При люминесцентной микроскопии в  качестве источника света используют кварц-

галогеновую или ртутную лампу. Преимущество люминесцентного метода микроско-

пии заключается в том, что используя объектив с меньшим увеличением можно быс-

трее просмотреть большую площадь препарата. Недостатком является то, что при ис-

пользовании объектива с меньшим  увеличением, выше вероятность ошибочно при-

нять артефакт за КУМ. Поэтому мы настоятельно рекомендуем, чтобы при выявле-

нии «подозрительных микроорганизмов» обязательно было проведено исследование

под большим увеличением, и чтобы  при позитивном результате бактериоскопии пре-

паратов, окрашенных флуорохромами, была проведена подтверждающая микроско-

пия препаратов, окрашенных по Цилю-Нильсену.

Для бактериоскопического исследования на туберкулез не следует приобретать очень

дорогие современные люминесцентные микроскопы. Вполне достаточно иметь  мик-

роскоп со следующими техническими характеристиками:

•Достаточно галогеновых ламп. Обычно они уже встроены в микроскоп и имеют

гораздо меньшую стоимость по сравнению  с ртутными лампами, у которых, кроме

того, еще и ограничен срок работы. Галогеновые лампы нагреваются практически

сразу.

•Необходим достаточно мощный световой поток, поэтому значение апертуры кон-

денсора и двух объективов должно быть достаточно большим. Необходимо иметь

3 объектива: например, с увеличениями  в 10 и 25 раз для предварительного  про-

смотра препаратов и с увеличением  в 45 раз для уточнения морфологии выявлен-

ных элементов.

РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ И ВЫДАЧА ОТВЕТА

Во время бактериоскопии нужно  установить, присутствуют ли кислотоустойчивые

микобактерии в препарате и  если они имеются, то подсчитать приблизительное  ко-

личество микобактерий в поле зрения. Рекомендуется по одной и той же схеме про-

сматривать 100 подходящих полей зрения. Подходящими считаются те поля зрения,

в которых видны клеточные элементы бронхиального происхождения (лейкоциты,

волокна слизи и клетки эпителия). Поля зрения, не содержащие таких элементов, не

должны учитываться при бактериоскопическом исследовании.

Отрицательный результат

Укажите метод окраски препарата. Ответ «кислотоустойчивые микобактерии не об-

наружены» дается, если кислотоустойчивые микобактерии не были выявлены в 100

просмотренных полях зрения.

Положительный результат

Укажите метод окраски препарата. Количество найденных микроорганизмов  свиде-

тельствует как о степени опасности больного для окружающих, так и о тяжести ту-

беркулезного поражения. При положительном результате бактериоскопии необхо-

димо дать и количественную характеристику. При окраске препаратов по методу Ци-

ля-Нильсена для оценки результатов бактериоскопии может быть предложен следую-

щий полуколичественный метод:

Количество кислотоустойчивых  Число полей зрения Ответ

микобактерий (КУМ)

КУМ отсутствуют на 100 иммерсионных полей Кислотоустойчивые мико-

зрения бактерии не обнаружены

(в 100 полях  зрения

КУМ не выявлены)

от 1 до 9 КУМ 1 на 100 иммерсионных полей Укажите точное количество

зрения (1–9 КУМ на 100 полей зрения)

от 10 до 99 КУМ на 100 иммерсионных полей 1+

зрения (10-99 КУМ на 100 полей

зрения)

от 1 до 10 КУМ на одно поле зрения 2+

(1-10 КУМ на одно  поле зрения

в 50 просмотренных  полях

зрения)

больше 10 КУМ на одно поле зрения 3+

(более 10 КУМ  на одно поле

зрения в 20 просмотренных

полях зрения) СБОР МОКРОТЫ

МЕТОДИКА

•Добейтесь взаимопонимания с больным и объясните ему, для чего

необходимо провести исследование мокроты.

•Проинструктируйте больного, чтобы он прополоскал рот перед сдачей

мокроты. При этом из полости рта  удаляются остатки пищи и

контаминирующие бактерии.

•Пациент должен сделать 2 глубоких вдоха, задержать дыхание на

несколько секунд после каждого  вдоха и затем медленно выдохнуть. Затем

попросите больного вдохнуть в третий раз и с силой выдохнуть  воздух.

Потом попросите вдохнуть еще раз  и затем покашлять. Это способствует

получению мокроты из глубоких отделов  легких. После появления

продуктивного кашля пациент должен поднести к губам контейнер и

аккуратно сплюнуть в него мокроту. Нередко мокрота бывает густой и

слизистой, хотя может быть жидкой с частицами некротических тканей из

пораженных участков легких. Цвет мокроты может быть грязно-белым

или грязновато-светлозеленым. Мокрота с кровью имеет красный или

коричневый цвет. Жидкая прозрачная слюна или выделения из

носоглотки не являются мокротой и  имеют небольшую диагностическую

ценность в диагностике туберкулеза.

•Если объем собранной мокроты недостаточен, попросите больного

покашлять еще. Надо помнить о том, что многие пациенты не в

состоянии собрать мокроту в течение нескольких минут. Необходимо дать

им достаточно времени и дождаться  действительного глубокого кашля.

•Если все-таки мокроту получить не удалось, считайте данный контейнер

все равно использованным и уничтожьте в соответствии с инструкцией.

•Проверьте, чтобы контейнер был плотно закрыт и четко маркирован сам

контейнер (а не его крышка).

•Вымойте руки водой с мылом.

•Дайте пациенту новый контейнер и объясните, что важно собрать

мокроту утром, как только он проснется.

•Покажите пациенту, как следует плотно закрыть контейнер.

•Объясните больному, куда он должен доставить мокроту (в медицинское

учреждение или в лабораторию).