Переливание крови

Определение групп  крови системы АВО.

Групповая принадлежность крови  определяется реакцией агглютинации при  помощи стандартных гемагглютинирующих сывороток или цоликлонов.

 Определение групп крови стандартными гемагглютинирующими сыворотками.

Стандартные гемагглютинирующие сыворотки системы (из крови доноров или ретроплацентарной крови) поступают в ампулах по 2 мл. Перед определением следует убедиться в наличии на этикетке ампулы обозначения группы сыворотки, срока годности, номера серии и наименования учреждения его изготовившего. Срок годности сыворотки- 4 месяца со дня изготовления. Если в ампулах с сыворотками обнаруживаются хлопья или взвесь, то они для использования не пригодны, несмотря на не истекший срок. Для удобства пользования сыворотка окрашивается в различные цвета. Сыворотка 1-й группынеокрашивается, 2-й группы - окрашивается в голубой цвет, 3-ей группы в розовый, 4-ой группы в желтый. Аналогичного цвета полосами маркируются ампулы. Ампулы хранятся в холодильнике при температуре +4 - +6 или при комнатной температуре. Сыворотками лучше пользоваться в день вскрытия ампул, но допускается хранение открытых ампул 3 - 4 дня в холодильнике при условии, если горлышко заклеивается пластилином, лейкопластырем, закрывается ваткой. Определение группы крови проводится при температуре +150 - +250С на маркированной плоскости (тарелке) белого цвета, где записывается фамилия лица, у которого определяется кровь, согласно международной классификации маркируются точки нанесения сыворотки. Используются стандартные сыворотки двух серий групп О(I), А(II), В(III). После их нанесения получается шесть капель, расположенных в два ряда в следующем порядке: О(I), А(II), В(III). Каждая сыворотка наносится своей пипеткой. Исследуемая кровь углами предметного стекла или стеклянными палочками вносится в сыворотку в количестве в десять раз меньшем и тщательно перемешивается. Можно перемешивать кровь с сывороткой одним и тем же углом предметного стекла (или стеклянной палочкой), но в этом случае после каждого перемешивания необходимо промывать стекло в воде и насухо вытирать. За ходом реакции, в общей сложности, наблюдают не менее 5 - ти минут, периодически покачивая тарелку. В лунки, где к третьей минуте наблюдения произошла агглютинация, вносят по капле физ.раствора и наблюдают еще две минуты. Добавление физиологического раствора не разрушает истинной агглютинации и позволяет отдифференцировать ее от псевдоагглютинации, обусловленной самопроизвольным склеиванием эритроцитов в монетные столбики. Результат оценивается по наличию агглютинации. Эритроциты группы О(I) не содержат антигенов и в реакцию агглютинации не вступают. Эритроциты группы А(II) не дают агглютинации только с сывороткой своей группы, эритроциты В(III) также не дают агглютинации только с сывороткой своей группы. Если во всех сыворотках произошла агглютинация, то для исключения неспецифической панагглютинации и подтверждения, что это эритроциты IV группы крови, следует дополнительно исследовать их стандартной сывороткой группы АВ (IV). Для этого используется одна сыворотка, исследование проводится с соблюдением всех выше указанных условий. Сыворотка группы АВ(IV) не содержит никаких антител, а поэтому не должна давать агглютинации. При определении групп крови следует обратить особое внимание на сроки чтения результата - они не должны быть менее 5-ти минут. Так разновидность второй группы крови А(II) дает агглютинации, как правило, раньше чем обычно - к исходу 3-4-ой минуты.

Определение группы крови моноклональными антителами.

Принимая во внимание высокую  активность и авидность реагентов Цоликлон, а также полную их стандартность, для каждого определения группы крови достаточно применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В. Цоликлоны анти - А и анти - В наносят на планшет или пластинку по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А и анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле (0,01 мл). После смешивания реагентов и крови за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2,5 мин.

1. Агглютинации нет (-) ни с Цоликлоном анти - А, ни с Цоликлоном анти - В. Следовательно, исследуемые эритроциты не содержат антигенов А и В, и кровь принадлежит к группе 0 (I). Это подтверждается наличием агглютининов α и β в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп А (II) и В (III).

2. Агглютинация (+) наблюдается  только с Цоликлоном анти - А. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген А, и кровь принадлежит к группе А(II). Это подтверждается наличием агглютининов β в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы В(III).

3. Агглютинация (+) наблюдается только с Цоликлоном анти - В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген В, и кровь принадлежит к группе В (III). Это подтверждается наличием агглютининов α в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы А(II).

4. Агглютинация (+) наблюдается  как с Цоликлоном анти - А, так и с Цоликлоном анти  - В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат оба антигена (А и В), и кровь принадлежит к группе АВ(IV). Это подтверждается отсутствием агглютининов α и β в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам отрицательной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп А (II) и В (III).

С целью исключения аутоагглютинации, которая может наблюдаться у некоторых больных (миеломная болезнь, ожоговая болезнь), а также в пуповинной крови новорожденных, в случае установления группы крови АВ (IV) необходимо произвести контрольное исследование: одну каплю (0,1 мл) изотонического раствора хлористого натрия смешать с маленькой каплей (0,01 мл) исследуемой крови. Реакция агглютинации должна отсутствовать.

Определение групп  крови системы перекрестным способом.

Для выполнения этого способа  требуется то же оснащение, что и  для определения групп крови  с помощью стандартных сывороток. Дополнительно надо иметь стандартные  эритроциты группы А(II), В(III). Стандартные  эритроциты готовятся из крови резус-отрицательных  доноров. Требования, предъявляемые  к этикеткам и условия те же, что для стандартных сывороток. Длительность хранения 2-3 суток при  температуре +4 - +8 С. Техника определения следующая: к нанесенным в два ряда стандартным сывороткам снизу дополнительно наносят ряд стандартных эритроцитов А (II), В (III). От исследуемого кровь забирается в пробирку. Ей дают отстояться. Затем к стандартным эритроцитам добавляют сыворотку исследуемой крови, а в стандартные сыворотки вносят эритроциты исследуемой крови. Наблюдение за реакцией проводят в течение 5-ти минут. Через 3 минуты в каждую каплю, где наступила агглютинация, добавляют каплю физиологического раствора, продолжая наблюдение до истечения 5-ти минут. Результаты реакций, полученные при помощи стандартных эритроцитов и стандартных сывороток должны совпадать, т.е. указывать на содержание агглютиногенов и агглютининов, соответствующих одной и той же группе крови.

Определение резус - принадлежности.

В повседневной практике определение  резус-фактора производится либо с  помощью антирезусных сывороток (анти-Д) или моноклональными анти-Д антителами.

Определение резус-фактора  антирезусной сывороткой анти - Д экспресс - методом (в пробирках без подогрева).

 Для проведения данного  исследования используется универсальная  антирезусная сыворотка для экспресс - метода (анти - Д). Исследуемая кровь берется из пальца или из флакона с консервированной кровью непосредственно перед исследованием. На дно пробирки наносят одну каплю стандартной антирезусной сыворотки для экспресс - метода и добавляют одну каплю исследуемой крови. После чего осторожными движениями добиваются, чтобы образовавшаяся жидкость растекалась по стеклу пробирки. Через 3 минуты после внесения эритроцитов добавляют в пробирку 2-3 мл физиологического раствора. Пробирку осторожно переворачивают 3 раза. Затем читают результат. Наличие глыбок агглютинатов свидетельствует о содержании в эритроцитах резус-фактора. В случае резус-отрицательной крови агглютинация не наблюдается.

 Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (цоликлон анти - Д супер).

На тарелку наносят  большую каплю реагента (около 0,1 мл). Рядом помещают маленькую каплю  (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10 - 15 сек., а четко выраженная агглютинация наступает через 30 - 60 сек. Результаты реакции учитывают через 3 мин. Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20 - 30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации. Цоликлон анти - D Супер выпускается во флаконах по 2, 5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения - 1 год в холодильнике при 2 - 8°С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде.

Проба на индивидуальную совместимость крови донора и  реципиента по групповому фактору.

Проба на групповую совместимость  крови донора и реципиента производится с каждым флаконом, непосредственно  перед гемотрансфузией, одновременно с определением группы донора и реципиента при комнатной температуре (от +15 до +25 С). С помощью пробы на групповую совместимость устанавливают наличие или отсутствие в крови реципиента антител, направленных против донорской крови из данного флакона. Природа антител, если они обнаруживаются, этой пробой не устанавливается. На тарелку наносят сыворотку реципиента, в нее помещают в 10 раз меньшую каплю донорской крови. Результат читают через 5 минут, при наличии агглютинации добавляют каплю физиологического раствора и продолжают наблюдение еще 2 минуты. При отрицательном результате агглютинация не наступает и капля остается равномерно окрашенной в красный цвет. Это означает, что в сыворотке реципиента антитела против эритроцитов донорской крови отсутствуют и противопоказаний к переливанию этой пробой не установлено.

 Проба на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента по резус-фактору Rho(D).

 Эта проба дает возможность  выяснить наличие или отсутствие  антител системы резус в крови  реципиента, направленных против  эритроцитов донора. В пробирку  помещают 2 капли сыворотки крови  реципиента, 1 каплю 33% полиглюкина и 1 каплю донорской крови. В нее в 10 раз меньшую каплю крови донора. Содержимое пробирки перемешивают путем размазывания его по ее стенкам. Через 3 минуты в пробирку добавляют 3 мл физиологического раствора хлорида натрия и после перемешивания читают результат. При положительном результате видна агглютинация эритроцитов, выраженная в большинстве случаев неярко. При отрицательном результате агглютинация не наступает и содержимое остается равномерно окрашенной в розовый цвет. Положительный результат указывает на то, что в сыворотке реципиента содержатся антитела, вызывающие агглютинацию эритроцитов донора. Это значит, что кровь несовместима и ее переливать нельзя. Отрицательный результат - отсутствие агглютинации указывает и на то, что противопоказаний к переливанию данной пробой не выявлено. Постановка пробы на резус - совместимость может в отдельных случаях сопровождаться возникновением ложной реакции - псевдоагглютинации донорских эритроцитов в сыворотке реципиента. Дифференцировать истинную и псевдоагглютинацию можно только при рассмотрении под микроскопом свежеприготовленного мазка. Результат учитывается при малом увеличении микроскопа с окуляром (х15). Истинная агглютинация дает глыбки агглютинатов в виде "тутовых ягод" или "гроздей винограда". При ложном положительном результате на фоне свободных эритроцитов видны разной длины цепочки эритроцитов, сложившихся в монетные столбики. Следует помнить: проба на резус - совместимость не заменяет пробы групповой совместимости и ограничиваться ее проведением нельзя. Практика показывает, что в ряде случаев проба на резус - совместимость бывает отрицательной, в то время как на групповую совместимость дает четко положительный результат, что указывает на недопустимость переливания крови этого донора.

Подготовка к  переливанию крови. Биологическая  проба. Способы хранения донорской  крови.

Биологическая проба.

Биологическая проба проводится с каждым флаконом переливаемой крови. После пункции вены больного, струйно, трехкратно, с интервалами в три  минуты переливают по 15 мл крови. Для  предупреждения свертывания крови  в игле во время 3 - х минутного интервала трансфузию продолжают редкими каплями (20 капель в минуту). Если за это время реакция на переливание (беспокойство, чувство жара во всем теле, боли в животе, пояснице, голове, цианотично-красная окраска лица, сменяющаяся бледностью, снижение артериального давления, учащение дыхания и пульса) не выявляется, то можно переливать требуемую дозу.

 У детей кровь при  проведении биопробы переливают струйно трехкратно с интервалами по три минуты в следующих дозах: детям до 2-х лет - 2 мл;  до 5-ти лет - 5 мл;  до 10-ти лет - 10 мл; старше 10-ти лет - 15 мл. Только быстрое введение несовместимой крови дает стремительное нарастание в крови реципиента продуктов распада и проявляется клинически сразу же. Медленное введение крови создает накопление продуктов распада постепенно и видимое проявление несовместимости может наступить слишком поздно, когда большая часть или вся кровь уже перелита. При переливании крови больному, находящемуся под наркозом, необходимо обращать внимание на величину артериального давления, частоту пульса и дыхания, окраску кожных покровов. После переливания первых 100 мл крови из каждого флакона, в чистую сухую пробирку с несколькими каплями гепарина берут 5 мл крови и центрифугируют. Наличие розовой окраски плазмы (а также и учащенный пульс, и падение артериального давления) указывает на гемолиз и на то, что перелита несовместимая кровь. Если плазма имеет обычную окраску, то кровь признают совместимой и можно продолжать трансфузию. Категорически запрещается переливать кровь или ее компоненты из одной бутылки или контейнера нескольким больным, в том числе и детям. После переливания контейнер или бутылка с остатками трансфузионной среды хранится в течение 2 - х суток в холодильнике.

 Правила хранения и оценка годности крови к переливанию.

Флаконы с кровью должны храниться в специально отведенном для этого холодильнике. Оптимальная  температура хранения консервированной крови от +4  до +6 С. Срок годности к переливанию составляет при этом 21 день. Допустимо хранение крови и при температуре +8 - +12 , но в этих условиях срок годности сокращается соответственно на 5 - 10 суток. Следует отметить, что надо стремиться переливать кровь небольших сроков хранения (1 - 3 суток), использование для трансфузий крови со сроком хранения при +4 - +6 свыше 10 суток нецелесообразно, в связи со значительным снижением при этом кислородно -  транспортной функции эритроцитов. В процессе хранения рекомендуется как можно меньше передвигать флаконы и тем более взбалтывать кровь. До проведения всех проб на совместимость и проверки группы крови и резус - фактора консервированной крови, следует убедиться в пригодности крови к переливанию. Для этого осторожно, чтобы не взболтать кровь, берут флакон и осматривают его, оценивая состояние герметичности упаковки, этикетки и содержимого флакона. Кровь признается годной лишь в том случае, если на флаконе нет трещин, пробка плотно прилегает к горлышку и кровь не поступает сквозь проколы в пробках. Этикетка флакона должна быть сохранена так же, как и номер флакона, группа крови, резус - фактор, дата заготовки и т.д. должны на ней отчетливо читаться. Наличие хотя бы одного из перечисленных дефектов позволяет считать кровь не пригодной к переливанию. Особое значение имеет оценка вида крови во флаконе. Кровь не пригодна к переливанию, если в ней определяется бактериальное загрязнение, гемолиз. Бактериальное загрязнение проявляется наличием белой мути или пленки на поверхности плазмы. Часто беловатый налет появляется в хилезной ("жирной") крови. Для быстрого определения природы беловатого налета следует флакон поместить на 30 минут в термостат или водяную баню при температуре +34 - +37. В этих условиях хилезная пленка исчезнет, а если имеет место бактериальное загрязнение, то она сохраняется. Наличие гемолиза устанавливается просматриванием флакона с кровью в проходящем свете. Если в крови нет гемолиза, то при длительном стоянии в ней четко определяется три слоя. Верхний слой желтоватый, опалесцирующий, прозрачный - плазма, нижний слой - темно-красный - осевшие эритроциты и тромбоциты и на его поверхности тонкий беловатый лейкоцитарный слой. При гемолизе плазма имеет розовую окраску. Если флакон оказался взболтанным, допустимо взять из него 5 - 7 мл крови и отцентрифугировать. Образование золотисто - желтого слоя надосадочной жидкости указывает на отсутствие гемолиза. При гемолизе отстой будет иметь розоватый или красно-бурый оттенок.