Вирусные гепатиты животных

Введение

Актуальность темы

Гепатит (Hepatitis) - воспалительный процесс в печени, характеризующийся дистрофией и диффузным или неоднородным гепатоцеллюлярным некрозом.

По этиологии гепатиты делятся на: инфекционный гепатит (сальмонеллез, клостридиоз, лептоспироз, аденовироз типа I, герпесвирусная инфекция); инвазионный гепатит (бабезиоз, лейшманиоз, токсоплазмоз); токсический гепатит, возникающий как следствие отравления (четыреххлористым углеродом, соединениями тяжелых металлов), применения токсичных препаратов (антибиотиков тетрациклинового ряда, сульфаниламидов, аминазина, фенобарбитала, производных стероидов и др.), а также нередко вследствие воздействия на печень эндотоксинов; реактивный гепатит, развивающийся на фоне заболеваний поджелудочной железы, желудочно-кишечного тракта, матки (Уша Б.В. и др., 2002).

Инфекционный (вирусный) гепатит (Hepatitis infectiosa) -острая контагиозная вирусная болезнь, проявляющаяся лихорадкой, фолликулярным конъюнктивитом, катаральным воспалением слизистых оболочек дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта, а также выраженными поражениями печени и центральной нервной системы.

Гепатиты вирусного происхождения встречаются преимущественно у плотоядных (инфекционный гепатит собак и лисиц), уток, реже у однокопытных (Уша Б.В.,1979).

Гепатит влечет за собой развитие печеночной недостаточности и изменение обмена веществ.

Нарушения углеводного обмена сводятся к изменению характера и скорости синтеза гликогена, расщеплению гликогена до глюкозы и снижению интенсивности глюконеогенеза. Данные нарушения обуславливают характерный признак печеночной недостаточности - нестабильный уровень глюкозы крови.

Нарушения липидного обмена приводят к развитию ожирения печени вследствие ограничения ее способности к синтезу липопротеинов.

Нарушения белкового обмена включает три вида изменений: снижение синтеза гепатоцитами альбуминов, что ведет к гипоальбуминемии, диспротеинемии и крови; ограничение синтеза прокоагулянтов, что сопровождается развитием коагулопатий; снижение активности процесса дезаминирования аминокислот и синтеза мочевины, что ведет к повышению в крови концентрации аммиака.

Нарушение обмена витаминов и минералов сопровождается: снижением всасывания в кишечнике жирорастворимых витаминов; уменьшением способности гепатоцитов превращать провитамины в витамины (например, р-каротин в витамин А); торможением образования коферментов из витаминов; 

В связи с этим изучение вирусных гепатитов дает возможность уяснить патогенетические особенности и морфологические проявления ряда важных патологических состояний, возникающих у животных и человека в ветеринарной и медицинской практике.

Целью явился анализ вирусных гепатитов животных.

Задачи исследования:

1. Проанализировать особенности вирусного гепатита плотоядных.
2. Изучить особенности вирусного гепатита птиц.
3. Рассмотреть меры борьбы с вирусными гепатитами животных.

 

 

 

 

 

 

1. Материал и методы исследования
1. Серологический метод исследования

Серологические исследования — это методы изучения антигенов или антител в биологическом материале больных животных, основанные на определенных реакциях иммунитета. Обнаружение в биологическом материале антител к возбудителю инфекции или антигенов позволяет установить причину заболевания.

Материал:

- сыворотка крови

- слюна

- фекальные массы.

Основные методы серологического анализа:

1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Данная реакция является непрямым вариантом серологического исследования, то есть, производится она в два этапа. На первом этапе производят выявление необходимого антитела в циркулирующем комплексе антиген – антитело с помощью антиглобулина, схожего по своей структуре с белками иммунной сыворотки. Выявление искомого антитела возможно также при изучении заранее приготовленного антигенного препарата под люминесцентным микроскопом, без использования антиглобулинов.

Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе.

2. Иммуноферментный анализ (ИФА). Принцип метода заключается в своеобразном взаимодействии антитела с антигеном. Одним из обязательных условий реакции является предварительная фиксация одного из её компонентов, то есть антигена или антитела, на твёрдых планшетах. Затем, при помощи ферментной метки обнаруживают возникнувшие комплексы антиген – антитело благодаря изменению оптической плотности первоначальной смеси (субстрата), что проявляется изменением интенсивности её окраски. ИФА свойственны некоторые преимущества перед остальными серологическими методами, например, данная реакция является наиболее чувствительной, в тестах используются универсальные реагенты, остающиеся стабильными не менее 6 месяцев, автоматизированный процесс учёта результатов реакции. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит следующие компоненты: антиген, специфические сывороточные антитела, конъюгат, планшета с зафиксированным на ней специфическим антигеном,контрольные сыворотки.

Постановка реакции ИФА происходит в несколько этапов: вначале производится приготовление необходимых растворов, затем готовятся исследуемые образцы сывороток, а также контрольные сыворотки, позже следует нанесение приготовленных образцов сыворотки и контрольных сывороток на твёрдофазные носители, планшеты инкубируются, промываются и, только после проведённых процедур в лунки планшет вносится конъюгат (антиген). Через некоторое время он удаляется путём промывания лунок. На завершающем этапе в лунки вносится субстратная смесь и выдерживается в тёмном месте при комнатной температуре. Оценка результатов проводится автоматически при помощи специальных измерительных приборов, в некоторых случаях допускается визуальный учёт результатов проведённой реакции (Белоусова Р.В. и др., 2007).

2. Реакция преципитации в геле

Для диагностики инфекционного гепатита широко используют реакцию преципитации в агаровом геле. Простота постановки реакции, ее высокая чувствительность и строгая специфичность позволяют поставить диагноз в течение 24-48 ч, а также установить антигенное родство различных штаммов.  
         Реакция может быть применена для лабораторной диагностики в случаях остропротекающего заболевания, поскольку преципитирующий антиген обнаруживается у больных животных на 2-3-й день после заражения в различных органах и тканях, а также для выявления перенесенного ранее процесса, так как антитела у переболевших животных могут сохраняться несколько лет.

Для постановки реакции преципитации требуются следующие компоненты: тестирующая система, состоящая из антигена вируса инфекционного гепатита животного, специфической гипериммунной сыворотки против вирусного гепатита, контрольного положительного антигена, контрольного отрицательного антигена.  
         Механизм реакции в геле заключается в следующем: находящиеся раздельно в геле антигены и антитела диффундируют друг к другу, и на месте их соприкосновения (встречи) образуется полоска преципитата, что указывает на положительный результат.

В качестве испытуемого антигена используют 10%-ную суспензию печени больных животных. Специфическую гипериммунную сыворотку получают путем иммунизации или используют иммунную сыворотку реконвалесцентов. Реакция проходит при температуре 37°С в течение 48-72 ч. Сыворотку в лунки агара добавляют дробно, через каждые 12 ч.

Реакция считается положительной, если между испытуемым антигеном и гипериммунной сывороткой в агаре появляется полоска молочного цвета, по интенсивности выявления равная заведомо известному антигену и гипериммунной контрольной сыворотке. Между нормальной сывороткой и антигеном полосок не должно быть.

Нечетко выраженные (расплывчатые) полоски преципитата расцениваются как сомнительная реакция, а образование зон вокруг лунок является неспецифической реакцией (Белов А.Д. и др.,1990).

3. Лапароскопия

Применяют эндоскопическое исследование органов брюшной полости методом лапароскопии. Разработку методики, выявление показаний и противопоказаний и определение диагностических возможностей лапароскопии в ветеринарии разработал в 1962 году Б.В. Уша.

Лапароскопическое исследование проводится в два этапа:

1 этап - наложение пневмоперитонеума;

2 этап - осмотр органов  брюшной полости.

Для наложения пневмоперитонеума чаще используется вентральный доступ в брюшную полость. В точке, расположенной по абдоминальной линии на 4 см каудальнее пупка, вводят гильзу с газонепроницаемым уплотнением. Через гильзу проводят заполнение брюшной полости воздухом. Для создания пневмоперитонеума требуется 2-2,5 л воздуха. Затем через гильзу вводят оптическую систему. Гильзу фиксируют под углом 45-60° к брюшной стенке, направляя ее в сторону правого подреберья. Затем проводят осмотр органов брюшной полости.

При исследовании печени определяют ее размер, цвет, однородность окраски, консистенцию, наличие изменений, а также форму, размер, цвет и характер сосудистого рисунка желчного пузыря.

Метод лапароскопии позволяет установить характер поражения печени.

4. Биопсия

Данный способ позволяет взять образец ткани печени или клеток на гистологический и цитологический анализ. В ветеринарии используется несколько техник проведения биопсии:

1. Слепая биопсия

В 1966 году Б.В.Уша предложил универсальную иглу для биопсии, позволяющую брать пробы при помощи аспирации и путем среза органа.

В области 11-го или 12-го межреберья готовят операционное поле и проводят местную анестезию. Через насечку кожи вводят иглу с мандреном. Преодоление сопротивления при введении иглы, указывает на то, что игла попала в печень. Извлекают мандрен и присоединяют шприц (аспирационная биопсия). Предварительно в шприце создают вакуум и ставят ограничитель иглы на заданную глубину вкола (2 см). Вводят иглу в паренхиму печени и затем извлекают ее из брюшной полости. Проба печеночной ткани остается в просвете иглы.

Для получения среза печени длиной 0,5-2 см и диаметром 1,5-2 мм игла Уша вводится в печень с открытым запирающим устройством, затем закрывают запирающее устройство и извлекают иглу.

К недостаткам использования метода слепой биопсии относится возможное травмирование внутренних органов, сосудистых структур, что может вызвать неконтролируемое кровотечение.

b)       Прицельная биопсия

Этот метод проводится под контролем УЗИ или лапароскопа и позволяет оценить характер поражения печени, выбрать наиболее подходящее место для взятия пунктата, а также проследить за ходом иглы.

После определения места биопсии, на коже над выбранной точкой делают надрез и вводят универсальную иглу Уша. После проникновения конца иглы в брюшную полость ее продвижение осуществляется под контролем. Берут пробу ткани путем аспирации или среза органа.

2. Собственные исследования

1. Вирусные гепатиты плотоядных животных

Вирусные гепатиты плотоядных (лат. Hepatitis infectiosa carni-vorum) - остро протекающая контагиозная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, катаральным воспалением слизистой оболочки дыхательного и пищеварительного тракта, поражением глаз, печени и центральной нервной системы.

Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб. Впервые вирус гепатита выделил Грин (1928) в США у серебристо-черных лисиц. В СССР это заболевание у лисиц и песцов описали А. П. Киру-Муратов (1932), И. Г. Лебенберг (1937). У собак инфекционный гепатит изучал С. Рубарт (1947). Болезнь распространена во многих странах: США, Японии, Швеции, Дании, Англии, Турции, России и др.

Возбудитель гепатита плотоядных — ДНК-содержащий вирус из рода Mastadenovirus семейства Adenoviridae (рис.1). По вирулентности штаммы несколько различаются по выраженности тропизма к ткани печени или мозга: штаммы вируса подразделяют на нейро- и гепатотропные. Вирус культивируется в культурах клеток эпителия, вызывая в них выраженное ЦПД (цитопатическое действие вируса) с образованием внутриядерных телецвключений. 

Вирионы возбудителя гепатита плотоядных располагаются в ядрах клеток. Структура их включает преципитирующий, гемагглютинирующий и комплементсвязывающий антигены. У всех штаммов имеются одинаковый групповой и специфические комплементсвязывающие антигены.          Вирус устойчив к различным физическим факторам. При замораживании, высушивании и в 50%-ном растворе глицерина при комнатной температуре вирус остается вирулентным в течение нескольких лет, в природе он может сохраняться более 2 лет. При температуре 4 °С вирус сохраняет активность более 9 мес, при 37°С — до 39 дней, 50 С—150мин, 60 °С — 3 - 5 мин, 100 С — 1 мин.

Рис. 1. Аденовирусы (лат. Adenoviridae).

 

Возбудитель устойчив к эфиру, хлороформу и метанолу и неустойчив к формалину, лизолу, фенолу, свежегашеной извести, которые инактивируют его в течение 30 мин.

Эпизоотология. В естественных условиях к инфекционному гепатиту восприимчивы собаки всех возрастов и пород, но более чувствителен молодняк в возрасте 1,5 - 6мес. Животные старше 3 лет заболевают редко. Болеют также песцы, лисицы, волки и шакалы. Мыши, обезьяны и человек могут быть скрытыми носителями вируса инфекционного гепатита плотоядных.