Микробиологическая диагностика брюшного тифа

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) обладает чрезвычайно высокой чувствительностью и специфичностью. Он основан на многократном увеличении числа специфических участков генов вируса или бактерий. Изолированное умножение гена или его фрагментов называют амплификацией. ПЦР позволяет осуществлять такую амплификацию при помощи ДНК-полимеразы и коротких олигонуклеотидных 20-30-членных затравок (праймеров), комплементарных специфическим последовательностям антипараллельных цепей ДНК-генома хламидии.

Культуральный метод – “золотой стандарт” – обладает 100% специфичностью, но в силу высокой стоимости и трудоемкости не имеет широкого распространения. Кроме того, при персистирующем хламидиозе часто возникают некультивируемые L-формы хламидий, и культуральный метод дает в таких случаях ложноотрицательный ответ. При исследовании на хламидии культуральным методом пациенты не должны применять антибиотики тетрациклинового ряда и другие препараты, активные в отношении хламидий, в течение месяца.

«Золотым стандартом» в диагностике хламидийной инфекции считают культуральный метод с использованием чувствительной культуры клеток. Чувствительность культурального метода по сравнению с ПЦР составляет 70—80%, однако он более специфичен. Культуральный метод незаменим для оценки эффективности антибактериального лечения и определения чувствительности хламидий к антибиотикам. В отличие от лабораторных методов, предназначенных для выявления антигена или ДНК хламидий, культуральный метод позволяет обнаружить жизнеспособные микроорганизмы. После антибактериальной терапии с помощью ПЦР или МИФ можно получить ложноположительные результаты, что связано с выявлением нежизнеспособных фрагментов хламидий, которые длительное время остаются в эпителиальных клетках, но при заражении культуры клеток роста не дадут. Метод требует специального оснащения лаборатории и высококвалифицированного персонала, длительность выполнения анализа — до 7 дней, при определении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам — до 14 дней, что затрудняет его использование в практической медицине.

Бактериологическая диагностика

Материал для исследования: 
соскоб пораженного органа, мокроты, кровь.

Микроскопия:

• методы окраски:по Граму (красный цвет), Романовскому-Гимзе (сине-фиолетовый), Здродовскому (красный), Маккиавелло (красный) или Кастанедо (голубой).

Микрокартина:элементарные тельца имеют округлую форму, размером 0,25-0,35 мкм. Располагаются в цитоплазме макрофагов и клетках ретикулоэндотелиальной системы в виде крупных скоплений, цепочками или парами.

• грамотрицательны;
• спор не образуют;
• капсулу не образуют;
• неподвижны.

Культивирование:

• культивирование на биологических моделях: 
  культивируют чаще в желточном мешке куриных эмбрионов, в культуре растущих и перевиваемых клеток: HeLa, Hep-2, СОЦ, а также на цыплятах, белых мышах или морских свинках путем их заражения интраназальным, внутримозговым и внутрибрюшинным методами.

особенности выделения возбудителя:

• после 3-4 «слепых» пассажей в желточный мешок куриных эмбрионов хламидий обнаруживают микроскопически в препаратах-мазках из растертых оболочек желточного мешка;
• при цитопатогенном действии хламидий происходит вакуолизация и деформация ядра клетки, образование включений (микроколонии) оболочка которых вскоре разрывается, элементарные тельца освобождаются и попадают в межклеточное пространство.

Биопроба 
Суспензией патологического материала заражают естественно-восприимчивых животных, морских свинок, белых мышей и иногда суточных цыплят. У морских свинок при подкожном или внутрибрюшинном инфицировании (по 0,4-0,5 мл) через 7-8 дней повышается температура до 40,5oС, болезнь заканчивается летально. Беременные морские свинки, как правило, абортируют (через 10-20 дней после введения материала). Белые мыши чувствительны при разных способах заражения: при интраназальном, внутримышечном (по 0,2 мл) и внутрибрюшинном (по 0,5 мл). В результате 60-80 % этих животных погибает на 6-8-е сут.