Стафилококки

Поскольку микроб постоянно  обитает на коже, она чаще всего  и поражается. Фурункул – это  кожный абсцесс. Формирование абсцесса обусловлено локализацией и уровнем распространения. Стафилококковая пневмония – это множественные абсцессы в легких. Пиелонефрит – это множественные абсцессы экскреторной системы почек. Стафилококковая септицемия – образование множественных абсцессов по всему телу. В этом случае более подходит термин пиемия, буквально означающий "гной в крови".

Когда стафилококки инфицируют рану, они вызывают образование в  ней гноя. Стафилококки являются важнейшей  причиной раневой инфекции. В целом, они вызывают до 80% всех гнойных процессов у человека.

Эпидемиология.

Стафилококки в норме  обитают на коже человека, а также  на слизистой ротовой полости, глотки и носа. Они могут находиться здесь  постоянно, пока однажды не преодолеют кожный или слизистый барьер и  не вызовут развитие болезни. В другом случае они проникают через неповрежденную кожу в волосяные фолликулы и протоки сальных желез.

В норме способность  стафилококка к инвазии и резистентность хозяина хорошо сбалансированы поэтому  инфекция не развивается, пока не создастся ситуация, когда встречаются высоковирулентный микроб или макроорганизм со сниженной резистентностью.

Как правило, развивается  локальный процесс – абсцесс  или фурункул, без распространения  инфекции. Но в части случаев микроб выходит за пределы локальной инфекции, попадает в кровоток и поражает разные ткани и органы тела.

Механизм передачи инфекции преимущественно контактный. Например, через руки персонала в больнице. Персонал подвергается риску стать  носителями, в этом случае стафилококк  может длительно находиться у них на слизистой носа. Носители могут стать источниками инфекции.

Бактериологическая  диагностика.

Бактериологический диагноз  стафилококковой инфекции не представляет особых сложностей, если исследуют  кровь и другие жидкости организма, в норме стерильные. Выделенную культуру стафилококка необходимо идентифицировать как патогенную, в отличие от обычного микроба, обитающего на коже. Для этого используют ряд тестов. Свежевыделенные культуры стафилококка характеризуются как патогенные по таким признакам как продукция желтого пигмента, гемолизина, ферментация маннита, продукция ДНК-азы и коагулазы.

 

 

Иммунитет.

У людей имеется значительный естественный иммунитет к стафилококкам. Специфические антитела обнаруживаются в сыворотке крови большинства людей. Появление их связано с перенесенными, так называемыми, "малыми" стафилококковыми инфекциями кожи и слизистых. Приобретенный иммунитет может выполнять определенную защитную функцию, но практически не может служить серьезной защитой против стафилококковой инфекции. Особую группу риска составляют лица со сниженными защитными реакциями, например вследствие диабета или вирусных инфекций.

Профилактика  и контроль за стафилококковой инфекцией.

Основу контроля за стафилококковой  инфекцией в больницах (и в  любом другом месте) является тщательное соблюдение гигиенических стандартов и неукоснительное соблюдение правил асептики. Циркулирующие патогенные штаммы стафилококка так же чувствительны к дезинфицирующим средствам, как и обычные непатогенные штаммы.

Важное мероприятие – выявление носителей патогенного стафилококка (на слизистой носа) среди персонала, особенно в отделениях новорожденных.

Фаготипирование коагулазо+ стафилококков помогает выявить  источник в случае внутрибольничных инфекций.

 

 

 

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРОБОВ

РОДА  СТАФИЛОКОККА (Staphylococcus)

 

В соответствии   с   рекомендациями   "Краткого   определителя

бактерий Берги" 1980 г.,  род Staphylococcus относится к семейству

Micrococcaceae, в   которое   входят   также  роды  Micrococcus  и

Planococcus. Общими   чертами   представителей   этого   семейства

являются: 1)    морфология    микробных    клеток    -   все   они

грамположительные микроорганизмы  сферической   формы,   делящиеся

более чем в одной плоскости, 2) наличие фермента каталазы.

Согласно решению  Международного  подкомитета  по   таксономии

стафилококков и микрококков (Варшава,  1975 г.) род Staphylococcus

состоит из 3 видов:  S. aureus,  S. epidermidis, S. saprophyticus.

Представители двух  последних  видов относятся,  к так называемым,

коагулазоотрицательным стафилококкам,   которые    долгое    время

считались непатогенными.  Сейчас  эту точку зрения следует считать

опровергнутой. Доказано,  что S.  epidermidis может вызывать такие

заболевания как  эндокардит,  сепсис,конъюнктивит,  инфекцию ран и

мочевыводящих путей, а S. saprophyticus - острый уретрит и цистит.

Целью первичной     идентификации     является    установление

принадлежности выделенной культуры к  семейству  Micrococcaceae  и

роду Staphylococcus.

Для установления   принадлежности    культур    к    семейству

микрококков (Micrococcaceae) используют тест на каталазу.

Отмечают способность  представителей  семейства   микрококков,

имеющих фермент  каталазу,  расщеплять перекись водорода,  образуя

воду и газообразный кислород.

В отличие от микрококков, представители родственного семейства

стрептококков каталазы не имеют.

 

Установление принадлежности культуры

к роду Staphylococcus

 

На этом этапе  исследования  применяются  методы,  позволяющие

дифференцировать стафилококки от микрококков. К их числу относятся

культуральный, бактериоскопический  и  биохимический  методы,   из

которых последний является главным.

 

Культуральный метод

 

Основным отличием   стафилококков   от   микрококков  является

окраска колоний на плотной  среде.  Для  стафилококков  характерны

золотистые (от  палевых  до ярко-золотистых) или белые колонии.  У

микрококков колонии окрашены,  как правило, в желтый (с различными

оттенками -  от  желто-зеленого до оранжевого) или розовый (вплоть

до красного) цвета.  Дополнительным тестом может служить  характер

роста на  плотной кровяной (5%  дефибринированной крови барана или

кролика) среде.  Подавляющее  большинство  штаммов  S.  aureus   и

некоторые штаммы  S.  epidermidis  растворяют эритроциты,  образуя

прозрачную зону    гемолиза     вокруг     колоний.     Микрококки

гемолитическими свойствами не обладают.

 

Бактериоскопический метод

 

В мазках,  окрашенных по Граму,  стафилококки располагаются по

одиночке, парами  или  в  виде  скоплений  (гроздей)  неправильной

формы. Для  микрококков,  помимо  указанных вариантов,  характерно

также образование тетрад и пакетов.  Размеры  микробных  клеток  у

микрококков, как  правило,  больше  (диаметр  0,5-3,5 мкм),  чем у

стафилококков (диаметр 0,5-1,5 мкм).

 

Определение ферментации  глюкозы в анаэробных условиях

 

Стафилококки являются факультативными  анаэробами, микрококки -

облигатными аэробами. В связи с  этим стафилококки способны расти и

ферментировать глюкозу в анаэробных  условиях,  микрококки  лишены

этой способности.

Принцип. При  ферментации  глюкозы   в   анаэробных   условиях

образуется молочная кислота,  в  связи с чем среда закисляется  и рН

ее снижается.  Закисление среды  выявляется  по  изменению  окраски

индикатора, добавленного в среду.

Ингредиенты. Полужидкие  среды  (0,3%  агар),  содержащие   1%

глюкозы -   это   готовая   среда   с  индикатором  ВР  или  среда

Хью-Лейфсона с индикатором бромтимоловым  синим.  Последняя  среда

является более   чувствительной,   т.к.   изменение   ее   окраски

происходит при более высоких  значениях рН,  поэтому она  позволяет

выявить ферментацию  глюкозы  слабо  активными  штаммами  вида  S.

saprophyticus. В  связи  с  этим,  если   какой-либо   штамм   дал

отрицательный результат   на   среде   ВР,  его  следует  повторно

исследовать на среде Хью-Лейфсона.

Готовую среду  разливают  по  5  мл  в  пробирки  и подвергают

дробной стерилизации.  Непосредственно  перед посевом  пробирки  со

средой помещают  на  15  минут  в кипящую водяную баню для  удаления

кислорода, а затем быстро охлаждают в ледяной бане.

Ход исследования.

Суточную агаровую  культуру  исследуемого  штамма  с   помощью

бактериологической петли  сеют  в  столбик  среды  уколом  до  дна

пробирки, а затем на поверхность  агара наливают 1,5 мл стерильного

вазелинового масла   для   создания   анаэробных   условий.  Посев

инкубируют при 37°С  в  течение  5  суток,  ежедневно  регистрируя

результаты. Реакция   считается   положительной,  если  происходит

желтое окрашивание столбика среды,  занимающее не  менее  2/3  его

высоты. Длительные  сроки  учета  реакции  представляют  известные

неудобства, поэтому   на   практике    дальнейшую    идентификацию

стафилококков проводят, обычно не дожидаясь  результатов анаэробной

ферментации глюкозы. В этой связи  результаты указанного теста  как

бы дополняют  результаты  других  тестов,  полученных на следующих

этапах идентификации.

 

Видовая идентификация  стафилококков

 

Первым этапом исследования является дифференциация штаммов  S.

aureus от    представителей   двух   коагулазотрицательных   видов

стафилококка.  Если установлено,  что штамм не относится к виду S.

aureus  проводят  его  идентификацию   для выяснения принадлежности

культуры к видам S. epidermidis или  S. saprophyticus.

 

Идентификация S. aureus

 

Ориентировочные данные о принадлежности культуры к виду  можно

получить при  изучении  характера  колоний,  выросших после посева

исходного материала   на   элективную   среду   стафилококков    -

молочно-желточный солевой агар (МЖСА).

 

Определение ферментации  маннита

в анаэробных условиях

 

См. определение ферментации  глюкозы  в  анаэробных  условиях.

Определение проводят  аналогичным  путем,  но в качестве субстрата

используют 1% раствор маннита.

 

Идентификация S. epidermidis и  S. saprophyticus

 

Те штаммы,  которые после исследований, описанных в предыдущем

разделе, признаны   не  относящимися  к  S.  aureus,  подвергаются

дальнейшей идентификации    для    установления     их     видовой

принадлежности.

Дифференциацию S.    epidermidis    от    S.     saprophyticus

рекомендуется проводить в 3 тестах:  определение 1) устойчивости к

новобиоцину, 2)  фосфатазы,  3)   способности   окислять   маннит.

Для штаммов S. epidermidis характерны: чувствительность

к новобиоцину,  наличие фосфатазы,  неспособность окислять маннит,

для штаммов S. saprophyticus - противоположные  свойства. Поскольку

не все   стафилококки  по  своим  характеристикам  укладываются  в

указанную схему,  такие штаммы  следует  обозначать Staphylococcus

spp.

 

Определение устойчивости к новобиоцину <*>

 

Принцип. Антибиотик   новобиоцин   в   избранной  концентрации

подавляет рост штаммов  S.  epidermidis,  но  не  влияет  на  рост

естественно устойчивых к нему штаммов S. saprophyticus.

--------------------------------

<*> -   Может   быть  использован   метод  диффузии  в агар  с

применением бумажных стандартных  дисков с новобиоцином.

 

Ингредиенты. Из  стерильного  водного  раствора новобиоцина (10

мг в 10 мл дистиллированной воды) берут 0,5 мл и вносят в пробирку

с 3 мл стерильного физиологического раствора. Содержимое пробирки

переносят во флакон с 250 мл расплавленного и охлажденного до 50°С

1,8% питательного  агара,  перемешивают  и разливают среду в чашки

Петри. Конечная концентрация  новобиоцина  в  среде  составляет  2