Отчет по практике вирусологии

                                           Министерство образования и науки

Федеральное государственное бюджетное  образовательное учреждение

Высшего профессионального образования

«Хакасский государственный университет  им. Н. Ф. Катанова»

Сельскохозяйственный институт (СХИ)

Кафедра инфекционный и незаразных болезней животных

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Отчет по практике вирусологии

 

 

 

 

 

                                                                                   Выполнила: Голубева Н. А   группа В-31

Проверила: Научный руководитель Усикова Т. И

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Абакан 2013

 

 

 

                                                        План.

 

 

1. Ведение.

 

2. Краткая характеристика хозяйства.

 

3. Устройство вирусологической лаборатории.

 

4. Правила взятия и пересылки материала для вирусологического исследования.

 

5. Стерилизация лабораторной посуды.

 

6. Образцы бланков, заполняемых при отправке патологического материала в лабораторию.

 

7. Список использованной литературы.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Ведение

 

Практика студентов  образовательных учреждений высшего профессионального образования является составной частью основной образовательной программой. Практика организуется в соответствии с Государственным образовательным стандартом. Практика включает следующие этапы: ознакомительная практика; производственная и преддипломная. Целью практики является углубление и закрепление знаний и профессиональных навыков, полученных в процессе обучения на основе изучения практических ситуаций, сбора и анализа материала, необходимого для предпринятого курсового или дипломного исследования. 
 
Базой практики может быть организация (предприятие, учреждение, фирма), обеспечивающая возможность ознакомления с основными направлениями ее деятельности, а также доступа к информации необходимой для написания курсовой или дипломной работы по специальности. 

Краткая характеристика хозяйства.

 

 

Предприятие г. Абакана (Республика Хакасия) «ГУ ХАКАССКАЯ  ВЕТЕРИНАРНАЯ ЛАБОРАТОРИЯ» со специализацией «Ветеринарные станции» относится  к виду деятельности - Животные. Которая является органом исполнительной власти Республики Хакасия, осуществляющим функции по обеспечению эпизоотического и ветеринарно-санитарного благополучия на территории Республики Хакасия, предупреждению болезней животных, обеспечению качества и безопасности выпускаемой продукции животного происхождения в ветеринарно-санитарном отношении, с целью защиты населения от болезней, общих для животных и человека.

Деятельность ведомства  осуществляется путем предоставления государственных услуг в рамках решения следующих задач: 

- предупреждение карантинных и особо опасных болезней животных и осуществление региональных планов противоэпизоотических мероприятий;

- организация лечебно-профилактической работы;

- организация диагностической работы и проведение лабораторных исследований современными методами;

- организация работы по обеспечению качества и безопасности продукции животного происхождения;

-  надзор за соблюдением ветеринарного законодательства Российской Федерации;

 

 

 

Устройство  вирусологической лаборатории.

    

     Вирусологическая лаборатория – учреждение, занимающееся изучением вирусов и вирусных заболеваний или производством вирусных препаратов (вакцин, диагностикумов, противовирусных иммунных сывороток и т. п.).

     Размеры  и штаты вирусологической лаборатории  зависят от назначения и объема работы. Но в любом случае обязательным является обеспечение безопасности персонала и возможности проведения работы в стерильных условиях.

     Вирусологическая  лаборатория состоит из собственно лаборатории и подсобных помещений – для обработки и стерилизации посуды, приготовления питательных сред (для выращивания клеточных культур, выявления бактерий и микоплазм), лиофилизации вирусов, инкубатора, вивария и др. Если вирусологическая лаборатория входит в состав более крупного учреждения (института, санитарно-эпидимиологической станции и т. п.), подсобные помещения могут быть общим для ряда лабораторий или всего учреждения.

     Собственно  вирусологическая лаборатория строится  по типу бактериологической лаборатории  с учетом специфики работы – выращивания клеточных и тканевых культур, ультрацентрифугирования, хранения вирусов при низких температурах и др. Она оборудуется для диагностической работы (выделения вирусов и серологических реакций), для изучения свойств вирусов, их структуры, проведения генетических исследований и т. п.

     Помещение  вирусологической лаборатории должно  быть светлым и достаточно  просторным, легко мыться и обрабатываться  дезинфицирующими растворами, с  этой целью стены красят масляной  краской или облицовывают плиткой. Пол не должен иметь щелей. Окна лаборатории ориентируют на север или северо-запад. При ориентировке на юг окна завешивают белыми шторами. Помещение оборудуют приточно- вытяжной вентиляцией примерно с 10-кратным обменом воздуха; оно должно быть обеспечено холодной и горячей водой, а также светильным газом. Желательно, чтобы в лаборатории имелась централизованная система сжатого воздуха (давление до 1,0-1,2 атм) и вакуума (до700-760 мм рт. ст. остаточного давления). Должны быть также предусмотрены душевые комнаты для сотрудников. При работе с особо опасными вирусами необходимо обезвреживание (путем кипячения) сточных вод.

     В вирусологической  лаборатории обязательно наличие  отдельного помещения для стерильной  работы, состоящего из двух отделений,  разделенных стеклянной перегородкой. Внутреннее помещение – бокс – должно быть небольшим (6-8 м²), с низким потолком. Дверь должна открываться в предбоксник, служащий для одевания дополнительной одежды, отделенный второй перегородкой от остального помещения. Для стерилизации бокса и предбоксника используют бактерицидные лампы из увиолевого стекла с преобладающей длиной волны 254 нм. Для этой цели можно использовать лампы БУВ, которые устанавливают из расчета 2-2,5 вт на 1 м³ помещения; средний срок службы лампы 1500 часов. Обязательно обеспечение боксов стерильным воздухом за счет приточной вентиляции при 4-5-кратном обмене; для стерилизации воздуха могут быть использованы фильтры ЛАИК из ткани Петрянова – тип ФПП.

     В боксе  должны находиться лишь необходимые для работы инструменты и посуда, стерилизатор для инструментов, широкогорлые банки с дезинфицирующим раствором, бак с крышкой для зараженного материала. При работе с возбудителями особо опасных инфекций в боксе устанавливают дополнительно настольный бокс, в котором стерилизуют путем фильтрации как поступающий, так и оттекающий воздух. Основные правила работы с особо опасными возбудителями регламентируются специальной инструкцией.

     Для дезинфекции  в вирусологической лаборатории  используют чаще всего лизол 1-5%, хлорамин 1-5%, формалин 2,5-5%.

     Помимо  обычной бактериологической посуды, в вирусологической лаборатории  должны быть: гомогенизатор для  измельчения тканей, магнитные мешалки,  микроскопы (световые для исследования  в обычном и ультрафиолетовом свете, а также электронные), центрифуги различной мощности (на 3-5 тыс. об./мин, а также с охлаждением на 12-15 тыс. и 60 тыс. об./мин), имеющие набор роторов. Необходимы термостаты, одновременно работающие при различной температуре (от 25 до 40˚С), в том числе с подачей углекислого газа, или термостатные комнаты. Вирусологическая лаборатория оборудуется рефрижераторами или холодильными камерами с температурой +4, -20 и -40˚С. Для хранения культур клеток необходимы сосуды Дьюара с жидким азотом или холодильники с температурой ниже -90˚С.

     Лаборатории,  изучающие биохимию вирусов оборудуют  по типу химических. Работа с  радиоактивными изотопами производится  в специально оборудованном помещении.

     В отделениях  по приготовлению сред, помимо  обычной химической посуды необходимо иметь установки для обработки воды, которая дважды дистиллируется в стеклянных аппаратах или деионизируется на колонках с ионообменными смолами. Для стерилизации растворов, которые нельзя автоклавировать, используют асбестобумажные стерилизующие пластины Зейтца, вмонтированные в фильтры типа Сальникова (Ф-140, ФС-3, ФС-7 и т. п.); фильтрация осуществляется при давлении 0,5 атм.

     Рабочий стол вирусолога, по возможности располагают на расстоянии 1 м от окна и покрывают линолеумом или стеклом. На столе помещают газовую горелку. Обязательным оборудованием рабочего места является банка для пипеток с дезинфицирующим раствором (3% раствор карболовой кислоты), закрывающийся фарфоровый или стеклянный сосуд для ваты, набор штативов для пробирок, эмалированные кюветы, пинцеты, ножницы и скальпель, чистые предметные стекла с лунками и без них, а также покровные стекла. Микроскопы хранят в футляре или под стеклянным колпаком. В вирусологической лаборатории также должна быть умывальная раковина, над которой на полке помещают бутыль с раствором для дезинфекции рук.

     Виварий должен быть  отделен от помещения собственно  вирусологической лаборатории. В  нем необходимо иметь комнаты  для карантина поступающих животных, для их заражения и отдельно  для вскрытия. Работа с мелкими лабораторными животными производится за защитным стеклом. Обеззараживание клеток для содержания животных лучше производить паром. Необходимо также иметь крематорий для сжигания трупов животных и мусора.

     Устройство областной  вирусологической лаборатории, в которую хозяйство направляет материал для исследований, отвечает основным правилам и нормам.

 

Правила взятия и пересылки материала для  вирусологического исследования.

 

     Для вирусологических исследований желательно направлять пробы от животных в трех стадиях болезни:

• от свежих трупов (кровь, кость, лимфоузел и пораженные органы);
• от убитых в агонии животных (кровь, кость, лимфоузлы и пораженные органы);
• от выздоравливающих животных (кровь).

     Пробы необходимо брать асептически, не допуская их загрязнения, в стерильные флаконы (обычно из-под антибиотиков). Каждую пробу необходимо брать в отдельный флакон. Масса каждой пробы должна быть достаточной для исследования — не менее 5—10 мл, или грамм. Все флаконы должны герметически закрываться пробками (обычно резиновыми), продезинфицированы снаружи, высушены и маркированы. Надписи необходимо делать простым карандашом с указанием вида и номера животного, названия органа и даты взятия материала. Дополнительные данные, относящиеся к анамнезу, заболеваемости, размеру очага или вспышки, симптоматике, применявшимся вакцинам, препаратам и т. п., отражают в специальной карте или сопроводительном письме. Лучшие условия для сохранения проб материалов — замораживание. 
     Для пересылки образцы должны быть помещены в термосы со льдом или изотермические ящики, приспособленные для пересылки. Если образцы можно доставить в лабораторию в течение суток после отбора, то их не замораживают и не консервируют. Образцы, которые не могут быть доставлена в лабораторию в течение суток или в замороженном виде, необходимо консервировать глицерином. Он должен полностью покрывать кусочки взятых органов. Даже консервированные образцы желательно хранить в холодильнике. 
     Успешная и точная диагностика зависит от быстроты доставки материалов в лабораторию. 
     При вспышках заболеваний со значительной массовостью или смертностью из близко расположенных к лаборатории районов кроме образцов материала желательно присылать больных животных или свежие трупы. Их также необходимо доставлять с предосторожностями (упаковывать в ящики или коробки) во избежание разноса инфекции.      Образцы материалов от трупов должны быть отобраны в возможно короткие сроки после смерти животного, чтобы сохранить возможности для выделения возбудителя, вызывающего заболевание. В тропическом и субтропическом климате при повышенных температуре и относительной влажности воздуха время от гибели до отбора проб не должно быть более 12 ч.

Взятие  проб крови от переболевших животных.

     Пробы крови берут из яремной вены у крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, из хвостовой артерии у свиней и из подкрыльцовой вены у птиц. Кровь можно брать из ушной вены. 
     Перед взятием крови необходимо очистить и продезинфицировать кожу в месте укола или разреза. Каждую иглу или лезвие можно использовать только для одного взятия пробы.

Отбор проб костей.

     От мелкого животного можно отрезать небольшой кусочек ребра или трубчатой кости, предварительно освободив их от мышечной и хрящевой тканей от крупных животных можно наскоблить ножом или скальпелем ткань красного мозга из любой трубчатой кости, лопатки, позвонков, грудных концов ребер. Для этого нужно обнажить суставную поверхность, срезать хрящ и концом ножа или скальпеля, вращая их, наскрести и поместить во флакон необходимое количество (5—10 г) костно-мозговой ткани. 
     Целую кость, освобожденную от мышц, посылают в герметически заклеенном пластиковом мешке.

Отбор проб мозга.

     Отделить голову от туловища и хорошо зафиксировать. Снять кожу и мышцы с черепной коробки, сделав надрезы между глазными впадинами и от них в сторону затылка. С помощью пилы, топора, ножниц и пинцета снять черепную коробку. Отделить основные нервы, изъять мозг и поместить его на кювету или доску. Отобрать пробы коры больших полушарий и основания спинного мозга. 
     Для исследования на бешенство необходимо брать пробы аммоновых рогов. Для этого нужно рассечь продольными разрезами каждое центральное полушарие на расстоянии 2 см (для собак) от средней линии мозга, удалить верхние части до щели (пространства), в котором находятся аммоновы рога, представляющие собой полуцилиндрические тела белого цвета.  
Нужно взять несколько кусочков аммоновых рогов и основания спинного мозга. Общий вес каждой пробы должен быть 5—10 г. Пробы мозга для исследования на бешенство обычно консервируют глицерином и маркируют с пометкой «Бешенство».

Отбор проб при заболеваниях с поражением эпителиальных покровов (везикулярные поражения).

     При заболеваниях, которые вызывают поражение эпителиальных покровов, образование язв и абсцессов (ящур, везикулярный стоматит, оспа, бугорчатка и др.), от живых животных берут пробы крови и эпителий с участков поражения. От павших или убитых животных посылают образцы крови, лимфоузлов, кости и кусочков кожи на границе здоровых и пораженных участков. 
Правила отбора, консервирования, и пересылки образцов остаются такими же.

Отбор проб при подозрении на заболевания с признаками поражения нервной системы.

     При заболеваниях, сопровождающихся признаками поражений нервной системы (болезнь Тешена, Ауески, отит, риккетсиоз, спорадический энцефаломиелит крупного рогатого окота, бешенство и др.), берут пробы мозга, кости, лимфоузлы, кровь и, при наличии поражений, другие органы. 
Следует высылать также кровь от переболевших животных для обнаружения антител в серологических реакциях. Для получения убедительных результатов желательно пересылать пробы крови от большого числа переболевших животных (до 10 проб). 
     Правила отбора, консервирования и пересылки образцов, если нет подозрения на бешенство, остаются такими же, как было указано ранее. 
При подозрении на бешенство необходимо, когда это возможно, присылать целую голову, не прибегая к отбору проб мозга и других образцов. Если в лабораторию посылают целую голову, ее следует завернуть в бумагу, дополнительно упаковать в пластиковый мешок, поместить в не протекающее ведро или жестяную банку и доставить в более короткие сроки. 
     Отбирать пробы мозга можно только при создании гарантированной безопасности специалистов, работающих с этим материалом, с последующей дезинфекцией рабочего места. Пробы мозга может отбирать только специалист, у которого нет никаких ранений на руках, обязательно резиновых перчатках. Персонал, не участвующий в этой операции, должен находиться на удалении от этого места работы.