Лабораторная диагностика пастериллеза

3. Идентификация бактерий пастериллеза

Для постановления диагноза пастериллеза, необходимо изучить клиническую картину больного животного.  Для пастериллеза характерна лихорадка,  интоксикация, воспаления кожи, подкожной клетчатки, артриты, остеомиелиты.

В зависимости от вирулентных свойств и путей проникновения возбудителя инкубационный период при пастереллезе длится от нескольких часов до 3 суток. Болезнь может протекать сверхостро, остро, подостро и хронически. 
 У крупного рогатого скота при сверхостром течении наблюдают внезапное повышение температуры тела до 41 °С, тяжелые расстройства сердечной деятельности, иногда кровянистый понос. Гибель животного наступает через несколько часов при симптомах быстро нарастающей сердечной слабости и отеках легких.

Острый пастереллез, как правило, протекает с преимущественным поражением либо кишечника (кишечная форма), либо органов дыхания (грудная форма), либо с появлением отеков в различных участках тела (отечная форма). Температура тела при всех формах проявления острого пастереллеза повышена.

Кишечная форма чаще проявляется у молодняка и характеризуется прогрессирующей диареей и слабостью животных. Нередки случаи появления крови в каловых массах. У животных наблюдаются жажда, анемичность слизистых оболочек и нарастающее угнетение.

Пригрудной форме отмечают признаки острой фибринозной плевропневмонии: ускоренное и затрудненное дыхание, кашель, истечения из носовых отверстий, вначале серозные, а затем серозно-гнойные, пульс учащен. При аускультации грудной клетки обнаруживаются участки притупления, усиленное бронхиальное дыхание, а иногда шумы трения. К концу болезни нередко развивается диарея с примесью крови. Заболевание длится несколько дней. Многие больные животные погибают, или болезнь принимает подострое или хроническое течение.

Кишечная форма чаще проявляется у молодняка и характеризуется прогрессирующей диареей и слабостью животных. Нередки случаи появления крови в каловых массах. У животных наблюдаются жажда, анемичность слизистых оболочек и нарастающее угнетение. 
Пригрудной форме отмечают признаки острой фибринозной плевропневмонии: ускоренное и затрудненное дыхание, кашель, истечения из носовых отверстий, вначале серозные, а затем серозно-гнойные, пульс учащен. При аускультации грудной клетки обнаруживаются участки притупления, усиленное бронхиальное дыхание, а иногда шумы трения. К концу болезни нередко развивается диарея с примесью крови. Заболевание длится несколько дней. Многие больные животные погибают, или болезнь принимает подострое или хроническое течение.

Отечная форма характеризуется образованием быстро распространяющихся воспалительных отеков подкожной клетчатки и межмышечной соединительной ткани в области головы, шеи, подгрудка, срамных губ, а иногда конечностей. Слизистая оболочка полости рта, уздечка языка и язык отечны, синюшно окрашены. Дыхание затрудненное, хрипящее. Из угла рта выделяется тягучая слюна. Животные гибнут при явлениях нарастающей сердечной недостаточности и асфиксии.

У буйволов пастереллез протекает сверхостро или остро с такими же клиническими признаками, как и у крупного рогатого скота.

У овец острое течение пастереллеза с присущими ему общими клиническими признаками септицемии наблюдается редко. Лихорадка, выраженное угнетение общего состояния сопровождаются развитием отеков подкожной клетчатки передней части туловища и фибринозной плевропневмонией. Больные погибают на 2-5-й день.

Для подострого и хронического течения болезни характерны симптомы затяжной фибринозной плевропневмонии, кератита, слизисто-гнойного ринита, артритов и прогрессирующего истощения.

  Пастереллез овец, вызванный гемолитической пастереллой, чаще всего проявляется пневмониями и реже — маститами.

Пастереллез свиней чаще всего встречается в виде вторичной инфекции, осложняющей чуму, грипп, рожу и другие болезни. Значительно реже болезнь протекает остро, как самостоятельная инфекция, характеризуясь явлениями геморрагической септицемии и поражением легких и плевры. В случае сверхострого течения болезни у животного внезапно повышается температура тела (до 41-42 °С). Больные свиньи лежат, отказываются от корма. Кожа ушных раковин и брюшной стенки становится синевато-багровой — признак сердечной недостпточности. Часто развивается фарингит, подкожная клетчатка в области шеи сильно отекает.

Животные погибают при явлениях асфиксии в течение 1-2 суток. Если болезнь затягивается, на первый план выступают признаки фибринозной пневмонии. Появляются сильный кашель, одышки и слизисто-гнойный ринит. Болезнь обычно заканчивается смертельным исходом на 5-8-й день. При хроническом течении пастереллеза у больных свиней температура тела остается в пределах нормы, уменьшается кашель, но слабость и исхудание прогрессируют, может появиться экзема, опухают суставы. Некоторые животные выживают, но большинство погибают через несколько недель. 
Пастереллез у кроликов чаше проявляется остро, реже наблюдают подострое и хроническое течение. При остром течении у животного внезапно повышается температура тела (до 41 °С и выше) и отмечаются признаки катара верхних дыхательных путей — насморк, чихание. Дыхание становится затрудненным. Кролик плохо ест, заметно слабеет. Появляется диарея. Уже через 24-48 ч может наступить смерть. Характерно, что незадолго до смерти животного температура тела резко снижается. Подострое течение болезни у кроликов в большинстве случаев является результатом обострения хронического заболевания. При этом наблюдают клинические признаки, свойственные бронхопневмонии, крупозной пневмонии, фибринозному плевриту. Часто бывает диарея. Хроническое проявление пастереллеза встречается в стационарно неблагополучных кролиководческих хозяйствах. При этом характерными признаками пастереллеза являются ринит, конъюнктивит и кератоконъюнктивит. Дыхание становится затрудненным. В подкожной клетчатке можно обнаружить абсцессы. 
 У птиц пастереллез может протекать по-разному. Иногда погибает совершенно здоровая на вид птица. Лишь перед самой смертью отмечают угнетение общего состояния и посинение гребня. Моментальная, в течение ночи, гибель птиц, которые накануне выглядели совсем здоровыми, особенно если наблюдается падеж и водоплавающих птиц, является важным диагностическим признаком пастереллеза. При остром течении заболевания птица становится вялой, держится отдельно, сидит на одном месте, изо рта и носовых отверстий вытекает много пенистой слизи. Температура тела повышается до 43,5 °С, перья взъерошены, тусклые. Фекалии серого, желтого или зеленоватого цвета, иногда с примесью крови, выделяются очень часто. Ясно выражен цианоз гребня и сережек. Дыхание ускорено и затруднено в связи с наличием густой слизи в дыхательных путях. Аппетит отсутствует, усиливается жажда, общая слабость прогрессирует, птица с трудом приподнимается и погибает чаще всего через 3 дня.

 Лабораторная диагностика пастереллеза предусматривает:

1. микроскопию мазков из крови и мазков-отпечатков из пораженных органов;
2. выделение чистой культуры на питательных средах с идентификацией по биохимическим свойствам;
3. выделение пастерелл путем заражения лабораторных животных (белых мышей или кроликов) суспензией из патологического материала и культурой из питательной среды;
4. определение вирулентности выделенных культур для белых мышей и кроликов. Для определения вирулентности гемолитической пастереллы используют 7-дневные куриные эмбрионы;
5. определение серовариантной принадлежности пастерелл.

В качестве исследуемого материала от больных животных берут:

1. кровь из поверхностных сосудов
2. носовую слизь

После падежа или вынужденного убоя —

1. кровь из сердца
2. лимфатические узлы (брыжеечные, заглоточные, средостенные, надвыменные и др.)
3. кусочки легких
4. печени
5. селезенки
6. сердца
7. почки
8. трубчатой кости.

В летнее время при длительной транспортировке патологический материал консервируют 30%-ным стерильным раствором глицерина. 
Диагноз на пастереллез, вызванный P. multocida, считается установленным:

1. при выделении вирулентных пастерелл из крови или одновременно из нескольких паренхиматозных органов;
2. при выделении культуры только из легких крупного рогатого скота или свиней;
3. у овец одновременное выделение из легких, крови и паренхиматозных органов P. haemolytica служит основанием для постановки диагноза гемолитического пастереллеза.

Выделение из легких одновременно слабовирулентных P. multocida и P. haemolytica свидетельствует о смешанном заболевании пастереллезом, вызванном пастереллами обоих видов. Такой пастереллез диагностируют как пастереллезную пневмонию.

При постановке диагноза пастереллез необходимо дифференцировать от лихорадочных болезней септического характера, которые также сопровождаются появлением воспалительных отеков под кожей: сибирской язвы, эмфизематозного карбункула и злокачественного отека.

4. Методы исследования бактерий пастериллеза

Для методики исследования постерилеза применяют окрашивание по Романовскому – Гимзе, так как данная бактерия имеет овальный вид и и меет капсулу.

При окраске по Романовскому - Гимзе обнаруживают биполярность - интенсивное окрашивание полюсов микроба. В мазка из культур биполярное окрашивание наблюдают редко.

Для этого на чистое предметное стекло наносят каплю физиологического раствора. В каплю вносят предварительно обожженной и охлажденной иглой небольшое количество культуры исследуемого микроба пастериллеза (из колонии) и тщательно перемешивают. Препарат покрывают покровным стеклом. Неокрашенные препараты рассматривают с объективом 40 и окуляром 10х или 15х при затемненном поле зрения. Подвижность микробов лучше всего наблюдать в суточных бульонных культурах. Краску смывают водой и препарат высушивают. Окрашенные препараты чаще всего рассматривают с иммерсионной системой. Для этого препарат помещают на предметный столик, закрепляют клеммами или препаратодержателем и на мазок наносят каплю кедрового масла. Полностью открыв диафрагму и подняв конденсор до уровня предметного столика, устанавливают максимальное освещение. Затем, глядя сбоку, с помощью кремальеры опускают тубус микроскопа вниз до соприкосновения объектива с маслом и слегка раздавливают его каплю. При этом объектив почти касается предметного стекла. Затем с помощью кремальеры, смотря в окуляр, поднимают тубус до тех пор, пока не появится окрашенный фон. После этого микрометрическим винтом устанавливают нужную резкость препарата. Изучение свойств выделенных неизвестных микроорганизмов. При этом исследуют их морфологические, культуральные и физиологические свойства. Морфологические признаки изучают, наблюдая под микроскопом. В данном случае мы наблюдаем полочковидную, с закругленными концами палочку без жгутиков, не имеет капсулу.

5. Питательные  среды пастериллеза

Для культивирования микроорганизмов используются различные по составу питательные среды, в которых должны содержаться все вещества, необходимые для роста. Потребности микроорганизмов в питательных веществах чрезвычайно разнообразны и определяются особенностями их метаболизма. Поэтому универсальных сред, одинаково пригодных для роста всех микроорганизмов, не существует. 

Питательная среда должна соответствовать следующим требованиям

включать доступный для клетки источник энергии. Для одних организмов (фототрофов) таким источником служит свет, для других - органический (хемоорганотрофы) или неорганический (хемолитотрофы) субстрат содержать все необходимые компоненты для реализации конструктивных процессов в клетке. Причем синтетические способности микроорганизмов могут варьировать от использования углекислого газа в качестве единственного источника углерода (автотрофы) до потребности в более восстановленных соединениях углерода - кислотах, спиртах, углеводах и др. (гетеротрофы).

В узком смысле слова любая искусственная питательная среда должна соответствовать следующим требованиям : содержать все необходимые для роста питательные вещества в легко усвояемой форме; иметь оптимальную влажность, оптимальную вязкость, оптимальную рН, (оптимальные - для конкретного микроорганизма), быть изотоничной, сбалансированной с высокой буферной емкостью и, по возможности, прозрачной.

Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения микроорганизмов, их культивирования и сохранения в лабораторных или промышленных условиях.

Выбор состава питательной среды зависит в значительной степени от целей эксперимента либо промышленного процесса.

Существует следующая классификация питательных сред:

- по составу: питательные среды делятся на натуральные, синтетические и полусинтетические. Также они могут классифицироваться как среды определенного и неопределенного состава. Натуральными называют среды, которые состоят из продуктов растительного или животного происхождения, имеющих неопределенный химический состав.

 Примерами питательных сред  такого типа являются среды, представляющие  собой смесь продуктов распада  белков (казеина, мышц млекопитающих), образующихся при их гидролизе. К питательным средам неопределенного  состава можно отнести и среды, полученные на основе растительного  сырья: картофельный агар, томатный  агар, отвары злаков, дрожжей, пивное  сусло, настои сена и соломы  и др. Основное назначение таких  питательных сред - выделение, культивирование, получение биомассы и поддержание  культур микроорганизмов.

К числу сред неопределенного состава относят и среды полусинтетические. В такую среду вносят известные соединения как явно необходимые; а также добавляют небольшое количество дрожжевого или кукурузного экстракта (или любого другого природного продукта) для обеспечения неизвестных потребностей роста. Такие среды часто используются в случае промышленного культивирования биологических объектов для получения продуктов метаболизма, например, для получения аминокислот, антибиотиков, витаминов и т.д.