Автор работы: Пользователь скрыл имя, 24 Февраля 2015 в 13:24, курсовая работа
Заболевания встречаются относительно редко. До 1955 г. было описано всего 95 случаев пастереллеза человека, с 1955 по 1963 гг. наблюдался еще 21 случай, в последующие годы по 1-5 заболеваний. Источником инфекции являются многие виды животных (крупный и мелкий рогатый скот, кошки, собаки, кролики, свиньи, зайцы, крысы, птицы и др.). Чаще всего пастереллез возникает после укусов кошек и собак, а также после царапин, нанесенных кошками (бактерионосительство у кошек достигает 80%)
Введение…………………………………………………………………………..3
1. Общая характеристика пастериллеза………………………………………….5
2. Схема исследования бактерии пастериллеза…………………………………7
3. Идентификация бактерий пастериллеза……………………………………..10
4. Методы исследования бактерий пастериллеза…………………………...…16
5. Питательные среды пастериллеза……………………………………………17
6.Красители и реактивы применяемые для идентификации пастериллеза….21
Заключение……………………………………………………………………….27
Список используемых источников……………………………………………..28
Синтетические среды - это среды определенного состава, представленные чистыми химическими соединениями, взятыми в точно указанных концентрациях и соотношениях отдельных элементов. Обязательными компонентами таких сред являются неорганические соединения (соли) и углерод- и азотсодержащие вещества (типичными представителями являются глюкоза и (NH4)2SO4. Часто к таким средам добавляют буферные растворы и хелатирующие соединения. Основное назначение таких питательных сред - изучение особенностей физиологии и метаболизма микроорганизмов, выделение генетических рекомбинантов.
По назначению среды разделяют на основные, элективные
(селективные) и дифференциально-
Бактерии пастереллы хорошо растут на обычных питательных средах (МПБ, МПА). Оптимальная температура роста - 36-38° С при рН среды 7,2-7,4. На агаре пз стереллы растут в виде серовато-белых блестящих колоний. Наиболее пышны рост можно получить на среде с добавлением сыворотки крови. Бактерии вызывают помутнение бульона с образованием на дне пробирки слизистого осадка поднимающегося в виде косички.
Пастереллы обладают незначительной ферментативной активностью. Они сбраживают без образования газа глюкозу, сахарозу, сорбит, маннит, не сбраживают лактозу и дульцит, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты.
Бактерии отличаются большой морфологической изменчивостью. На питательных средах они имеют форму овоидов, кокков, коккобактерий. Сложна и ан тигенная структура этих микробов. Серологически различают четыре группы па стерелл - А, В, С и D. Среди пастерелл, выделенных от свиней, преобладают се ротипы A, D и В. В бульонных культурах бактерии образуют токсины, природа которых еще мало изучена.
Пастереллы, в том числе и P. multocida, обладают незначительной устойчи востью к воздействию дезинфицирующих веществ: 5 % раствор карболовой кислоты и 0,5% креолин убивают микроб через 1 мин, 5% раствор известкового молока - через 4-5, 1% медный купорос - через 3 и хлорная известь - через 20 мин. При температуре 70-90° С бактерии гибнут в течение 5-10 мин. Особенно губительно действуют прямые солнечные лучи - инактивация происходит через 6-8 мин.
6. Красители и
реактивы применяемые для
Красители - химические вещества, окрашивающие различные структурные компоненты клеток. Используются для микроскопического изучения морфологии и цитологии микроорганизмов. Обычно красители представляют собой соли двух типов
1) кислые красители (эозин), у которых ион, придающий окраску, является анионом и взаимодействует с основными (цитоплазматическими) структурами клетки;
2) основные, взаимодействующие с кислыми (преимущественно ядерными) структурами клетки. Перед окрашиванием клетки обычно убивают (фиксируют). В микробиол. практике чаще всего применяют основные анилиновые красители–метиленовый синий, кристаллический фиолетовый, основной фуксин и др.
Для крашения бактерий, грибов и простейших применяют в основном органическиекрисители анилинового ряда, вирусов – неорганические, негативного типа (напыление металла или негативное контрастирование). Красители делят на:
1) витальные, окрашивающие живых микробов, и поствитальные, окрашивающие убитых микробов;
2) позитивные, окрашивают микробов, но не фон, и негативные, к-рые заполняют фон, но не окрашивают микробов (форму и размеры их устанавливают по неокрашенным силуэтам);
3) основные с ауксохромной группой NH2, реагирующие со структурами с отрицательным зарядом (ядро, нуклеоид, клеточная стенка);
4) кислые, вступающие в связь со структурами, несущими положительный заряд (цитоплазма), и нейтральные (амфотерные), взаимодействующие с кислыми и основными структурами.
При крашении бактерий чаще применяют поствитальные, позитивные, основные красители, при крашении простейших - нейтральные красители. При крашении микробов используют водные, спиртовые, спиртоводные, щелочные растворы, их готовят из сухих красителей или ненасыщенных спиртовых растворов. В микробиологической практике в основном употребляют следующие красящие растворы:
1) карболовый фуксин основной (Циля): 1 г К., 10 мл этанола 96%, 100 мл 5% водного р-ра фенола;
2) водный фуксин основной (Пфейффера): 10 мл карболового фуксина, 90 мл дистил. воды;
3) фуксин кислый: 0,1 г К., 100 мл дистил. воды;
4) сафранин: 1 г К., 100 мл дистил. или анилиновой воды;
5) нейтральрот: 0,5- 1 г К., 100 мл дистил. воды;
6) конгорот: 0,5 г К., 100 мл дистил. воды;
7) эозин: 0,5 г К., 100 мл 70% этанола;
8) метиленовый синий водный: 0,1 - 1 г К., 100 мл дистил. воды;
9) метиленовый синий щелочной (Леффлера): 30 мл насыщенного спиртового р-ра К., 100 мл 0,05% р-ра калия гидроксида;
10) уксуснокислый синий: 0,1 г К., 2 мл 96% этанола, 5 мл уксусной к-ты ледяной, 100 мл дистил. воды;
11)толуоидиновый синий: 1 - 2 г К., 100 мл 2% водного р-ра фенола;
12) генцианвиолет и кристаллвиолет: 1 г К., 10 мл этанола абс., 100 мл 2% водного р-ра фенола;
13) хризоидин: 1-2 г К., 300 мл кипящей дистил. воды;
14) везувин: 0,1-0,2 г К., 100 мл кипящей дистил. воды;
15) Романовского - Гимзы: коммерческий препарат состоит из смеси азура, эозина и метиленового синего. Перед употреблением 1 каплю препарата вливают в 1 мл щелочной (рН 7,2) дистил. воды. Все красящие растворы хранят в склянках с притертыми пробками и пипетками с баллончиком, желательно в темноте. Меняют в зависимости от срока хранения.
Окраска микроорганизмов — наиболее распространенный в микробиологии комплекс методов и приемов, применяемый для обнаружения и идентификации микроорганизмов с помощью микроскопа. В нативном (естественном) состояниибактерии имеют такой же коэффициент преломления, как и стекло, поэтому они невидимы при микроскопическом исследовании. Окраска микроорганизмов позволяет изучить морфологические особенности микробов, а иногда точно определить их вид, например некоторые микробы — одинаковые по морфологии — различно окрашиваются с помощью одних и тех же сложных методов окраски. Окраска микроорганизмов представляет собой физико-химический процесс соединения химических компонентов клетки с краской. В ряде случаев различные части микробной клетки (ядро, цитоплазма) избирательно окрашиваются различными красителями. Наиболее пригодными для окраски микроорганизмов являются анилиновые краски, главным образом основные и нейтральные, кислые краски менее пригодны.
Приготовление окрашенного препарата включает ряд этапов:
1) приготовление мазка;
2) высушивание мазка;
3) фиксацию мазка;
4) окраску;
5) высушивание.
Мазок готовят на чистых предметных
стеклах, на середину которых наносят
небольшую каплю воды и в нее с помощью
бактериологической петли помещают исследуемый
материал. Материал распределяют на стекле
равномерным тонким слоем, размер мазка
—1—2 см2.
Препарат обычно высушивают при комнатной
температуре на воздухе. Для ускорения
высушивания допускается подогревание
мазка в струе теплого воздуха высоко
над пламенем горелки.
Высушенный мазок подвергается фиксации, при которой мазок прикрепляется к стеклу (фиксируется), а микробы становятся более восприимчивыми к окраске. Способов фиксации много. Наиболее простой и распространенный — фиксация жаром — нагревание на пламени горелки (препарат проводят несколько раз через наиболее горячую часть пламени горелки). В ряде случаев прибегают к фиксации жидкостями (этиловый или метиловый спирт, ацетон, смесь равных объемов спирта иэфира — по Никифорову). После фиксации мазок окрашивают. Количество краски, наносимое на препарат, должно быть таким, чтобы покрыть всю поверхность мазка. По истечении срока окрашивания (2—5 мин.) краску сливают и препарат промывают водой.
Существуют простые, сложные
и дифференциальные способы окрашивания
микробов. При простой окраске обычно
употребляют одну краску, чаще всего красную
— фуксин, или синюю — метиленовый синий.
Фуксин красит быстрее (1—2 мин.), метиленовый
синий — медленнее (3—5 мин.). Фуксин приготовляют
в виде концентрированного карболового
раствора (фуксин Циля), очень стойкого
и пригодного для окраски в течение многих
месяцев. Метиленовый синий приготовляется
заранее в насыщенном спиртовом растворе,
который стоек и может долго храниться.
Сложные способы окраски, при которых
применяются два или более красителя,
являются ценными методами, используемыми
в микробиологической диагностике инфекционных
болезней.
Наибольшее практическое значение имеет
окраска по Граму (см. Грома метод окраски)
и окраска по Цилю.
Метод окраски по Цилю является
основным для окраски кислотоустойчивых
бактерий. Здесь применяются два красителя:
карболовый фуксин Циля и метиленовый
синий. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются
в красный цвет, все некислотоустойчивые
формы — в синий.
Метод Бениньетти является одним из способов
окраски жгутиков. Протрава и окраска
одним из красящих растворов, составляемых
ex tempore (по мере надобности): I — сульфат цинка — 1 г, танин — 10 г, дистиллированная вода
— 100 мл и II — насыщенный спиртовой раствор
генцианвиолета. Смешивают 5 мл раствора
I и 3 мл раствора II, наносят на препарат,
нагревают до появления паров, промывают
водой, высушивают и рассматривают.
Из других сложных методов применяется
так называемый негативный способ Бурри,
способ Гинса для выявления капсул и ряд
других.
Для идентификации пастериллеза применяют окрашивание по Романовскому – Гимзе. Для этого Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчета 1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20 — 25 минут при 37 °C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.
Красящую смесь Романовского-Гимзы, которая имеет в основе краску Романовского Райта, в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.
- Мазки, фиксированные в метиловом
спирте, окрашивают раствором (1 мл
готовой жидкой краски + 2 мл основного
буферного раствора + 47 мл дистиллированной
воды) в течение 40—120 мин (продолжительность
окрашивания подбирают
- Ополаскивают в
Наблюдаем окрашивание бактерии пастериллеза в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клетки — в голубой, ядро — в красный.
Заключение
Для предупреждения пастереллеза необходимо обеспечить охрану благополучного хозяйства от заноса возбудителя с больными животными, пастереллоносителями, с кормами. Особое внимание уделяют соблюдению общих ветеринарно-санитарных правил, обеспечению животных и птиц нормальными зоогигиеническими условиями содержания и рациональным кормлением.
Если ранее в хозяйствах регистрировали болезнь, всех животных и птиц вакцинируют против пастереллеза в течение года согласно действующим наставлениям. Такие хозяйства должны комплектоваться только вакцинированными животными.
При установлении пастереллеза среди свиней, крупного и мелкого рогатого скота, кроликов, пушных зверей, птиц в хозяйствах вводят ограничения. Всё поголовье неблагополучной группы обследуют клинически, больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют и лечат, больных кроликов и птицу убивают, остальных вакцинируют. Проводят текущую дезинфекцию, трупы животных и птиц утилизируют или сжигают. Ограничения с хозяйства снимают через 14 дней после поголовной вакцинации животных и последнего случая заболевания при условии проведения заключительной дезинфекции.
Список используемых источников