Методика обнаружения нитратов в растениях

Методика обнаружения  нитратов в растениях

Содержание

Введение

Глава 1. НИТРАТЫ, НИТРИТЫ И ПУТИ СНИЖЕНИЯ ИХ СОДЕРЖАНИЯ В ОВОЩАХ

Азотсодержащие соединения и их влияние на организмы

 

Глава 2. ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЕ  НИТРАТОВ В РАСТЕНИЯХ

Определение нитрат иона в почве

Экспериментальные результаты и их обсуждение

 

 

 

 

 

ВВЕДЕНИЕ

Интенсификация  сельскохозяйственного производства – естественный процесс, присущий эпохе  научно-технического прогресса. По сути, это качественно новый уровень  антропогенного воздействия на окружающую среду, при котором достижения науки  и техники направлены на увеличение уровня производства пищевых продуктов. По данным Института питания Академии медицинских наук нашей страны, годовая  потребность в овощах в различных  районах нашей страны составляет от 128 до 146 кг в год на душу населения. Поэтому особняком в пищевой  промышленности стоят продукты растительного  происхождения. В основе решения  проблемы, связанной с производством  достаточного количества продуктов  лежат современные агротехнические  приемы, а также применение регуляторов  роста, химических средств борьбы с  болезнями и вредителями растений и внесение минеральных удобрения. Это принесло свои плоды в плане  повышения урожаев, но в свою очередь  породило другую проблему – необходимость  обеспечения химической безопасности и высокого качества продуктов питания.

Большой интерес  в последнее время гигиенисты проявляют к вопросу об остаточном содержании нитратов в продуктах  питания и тем нарушениям в  состоянии здоровья человека, которые  могут быть вызваны нитратным  загрязнением.

Глава 1. НИТРАТЫ, НИТРИТЫ И ПУТИ СНИЖЕНИЯ ИХ СОДЕРЖАНИЯ В ОВОЩАХ

Азотсодержащие соединения и их влияние на организмы

Соли азотной  кислоты, нитраты, являются элементом  питания растений и естественным компонентом пищевых продуктов  растительного происхождения. Их высокая концентрация в почве абсолютно не токсична для растений, напротив, она способствует усиленному росту надземной части растений, более активному протеканию процесса фотосинтеза, лучшему формированию репродуктивных органов и в конечном итоге – более высокому урожаю. Например, если в период вегетации в растениях салата и шпината нитратов будет меньше 2000 мг/кг, то высокого урожая не жди: листья будут мелкие, грубые, непригодные для реализации. Во время массового образования кочанов и черешков листьев капусты нитратов должно быть 2000–3000 мг/кг.

Поскольку в органические соединения растений включается только аммонийный азот, нитрат-анионы, поглощенные растением, должны восстановиться в клетках до аммиака. Образованием аммиака завершается и распад органических веществ – аминокислот, амидов, белков. По образному выражению академика Д.Н.Прянишникова, аммиак «есть альфа и омега в обмене азотистых веществ у растений».

Нитраты, поступившие  в растения, восстанавливаются по схеме:

Первый этап восстановления нитрата протекает в соответствии с уравнением:

 

где NAД(Р)H – никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный, NAД(Р)⁺ – никотинамидадениндинуклеотидфосфат окисленный.

Нитратредуктаза – фермент класса оксидоредуктаз, синтезируемый в клетках в ответ на поступление NO₃^–; им особенно богаты молодые листья и кончики корней.

Образующиеся нитриты  не накапливаются, а быстро восстанавливаются  до NH₄⁺ с помощью фермента – нитритредуктазы:

где ФД – ферредоксин – железосодержащий белок, выполняющий функции переносчика электронов.

Нитритредуктаза – фермент, активность которого в 5–20 раз выше, чем нитратредуктазы. Эффективность этого фермента так высока, что свободные промежуточные продукты при восстановлении NO₂^– до NН₄⁺ (гипонитрит (HNО)₂, гидроксиламин NН₂ОН) в растении не накапливаются. Нитритредуктаза может содержаться и в листьях, и в корнях.

Аммиак, поступивший  в растение извне, образовавшийся при  восстановлении нитратов или в процессе фиксации молекулярного азота, далее  усваивается растениями с образованием различных аминокислот и амидов. Таким образом, нитраты являются естественным азотистым компонентом  растительного организма.

В то же время у животных и человека высокие дозы нитратов могут вызвать отравление и даже привести к смерти. Токсическое действие нитратов связано с восстановлением  их до нитритов, аммиака, гидроксиламина под влиянием микрофлоры пищеварительного тракта и тканевых ферментов. Если в организм человека поступают высокие дозы нитратов, через 4–6 ч появляются тошнота, одышка, посинение кожных покровов, диарея. Одновременно ощущается общая слабость, головокружение, боли в затылке и сердцебиение. Первой медицинской помощью при этом является обильное промывание желудка, прием активированного угля и солевых слабительных. Употребление в течение долгого времени пищи и воды с высоким содержанием нитратов вызывает также аллергию, нарушение деятельности щитовидной железы, приводит к возникновению многочисленных болезней в результате нарушения обмена веществ, опорно-двигательного аппарата и нервной системы.

Чем же обусловлено такое  токсическое действие на организм нитратов? Дело в том, что нитраты, превратившись  в желудочно-кишечном тракте в нитриты, попадают в кровь и окисляют двухвалентное  железо гемоглобина в трехвалентное. При этом образуется метгемоглобин, не способный переносить кислород к тканям и органам, в результате чего может наблюдаться удушье.

Выявлены два способа  окисления гемоглобина HbFe²⁺. При прямом окислении роль окислителя играют нитрит-анионы:

3HbFe²⁺ + 2NO₂^– + 14H⁺ = 3HbFe³⁺ + 2NH₃ + 4H₂O.

Во время косвенного окисления  гемоглобина сначала нитриты  окисляются до нитратов с образованием пероксида водорода, затем последний вступает в реакцию с железом гемоглобина:

NO₂^– + О₂ + Н₂О = NO₃^– + Н₂О₂,

HbFe²⁺ + 2Н₂О₂ + 4Н⁺ = HbFe³⁺+ 4Н₂О.

Угрозой для жизни является накопление в крови 20% и более  метгемоглобина (HbFe³⁺).

Наибольшая же опасность  повышенного содержания нитратов в  организме заключается в способности  нитрит-иона участвовать в реакции нитрозирования аминов и амидов, в результате которой образуются нитрозосоединения, обладающие канцерогенным и мутагенным действием.

Образование нитрозосоединений происходит при взаимодействии азотистой кислоты с вторичными аминами как в продуктах питания в процессе их кулинарной обработки, так и внутри организма:

(R₂)NH + НNO₂ = (R)₂N–NO + Н₂О.

N-нитрозосоединения имеют общую структуру:

Их можно разделить  на два класса с различными свойствами: нитрозамины, где R₁ и R₂ – алкильные или арильные группы, и нитрозамиды, где R₁ – алкильная или арильная группа, R₂ – ацильная группа.

Проведенные на животных опыты  показали, что N-нитрозосоединения способствуют образованию опухолей во всех органах, кроме костей.

Чаще всего контролируют наличие в продуктах N-нитрозодиметиламина (НДМА) и N-нитрозодиэтиламина (НДЭА).

Допустимое суточное потребление  нитратов для человека не должно превышать 5 мг на 1 кг массы тела, т. е. не более 350 мг в сутки для человека массой 70 кг.

В организм человека нитраты  поступают (в %): с овощами – 70, с водой – 20, с мясными, молочными и консервированными продуктами – 6. Наиболее опасно отравление нитратами, растворимыми в воде, т. к. это увеличивает скорость всасывания их в кровь, поэтому содержание нитрат-аниона в воде не должно превышать 45 мг/л.

Содержание нитратов и  нитритов в продуктах животноводства невелико, например в молоке и молочных продуктах их содержится не более 10 мг/кг. Нитраты и нитриты используют как консерванты при производстве сыров, и их суммарное содержание не превышает 50 мг/кг. При изготовлении ветчинно-колбасных изделий нитраты и нитриты добавляют не только для подавления деятельности болезнетворных бактерий, но и для того, чтобы придать мясным изделиям красно-коричневый оттенок. Содержание этих веществ в мясной продукции также не представляет опасности для здоровья людей (нитраты – 1–5 мг/кг, нитриты – 0,8–2,2 мг/кг).

Больше всего нитратов в организм человека поступает с  овощами и картофелем. Это послужило  причиной того, что во многих странах  мира, в том числе и в нашей, в 1988 г. были разработаны предельно  допустимые концентрации (ПДК) нитратов в сельскохозяйственной продукции. ПДК нитратов в овощной продукции  разных стран колеблются в значительных пределах, причем у нас установлены  самые низкие ПДК по сравнению  с зарубежными странами.

В табл. 1 (см. с. 2) приведены  данные, характеризующие способность  различных сельскохозяйственных культур  накапливать нитраты.

Следует отметить, что содержание нитратов в разных частях растений неодинаково. Больше всего нитратов в тех частях растения, которые  содержат большое количество тканей, служащих для проведения воды и минеральных  солей к листьям и органам  (ксилемные ткани). В жилках листьев, листовых черешках, стеблях нитратов больше, чем в мякоти листьев и плодах; в кожице и поверхностных слоях плодов они преобладают над внутренними слоями; в генеративных органах (органы полового размножения растений) эти вещества отсутствуют или имеются в меньших количествах, чем в вегетативных.

Меняется содержание нитратов в растениях и в течение  суток. Это объясняется интенсивностью восстановления нитрат-ионов до аммиака. Ночью и рано утром активность ферментов, участвующих в восстановлении NО₃^–, низка, что ведет к их накоплению. С повышением температуры и интенсивности освещения активность этих ферментов, в первую очередь нитратредуктазы, возрастает, что ведет к снижению содержания нитратов. В связи с этим сбор овощей лучше вести днем, когда содержание NО₃^– уменьшается на 30–40% по сравнению с утренними часами.

Уменьшается количество нитратов и при хранении овощей и фруктов. Например, во время зимнего хранения содержание нитратов в картофеле  снижается на 20%. В первый период хранения происходит послеуборочное дозревание, и нитрат-анионы, восстановившись до аммиака, включаются в состав органического вещества. Во второй период хранения, когда клубень выходит из состояния покоя и начинает прорастать, нитраты расходуются на построение новых органов (листья, корни).

Агробиологи насчитывают  около 30–40 факторов, влияющих на накопление нитратов в растениях, основным из которых  является чрезмерное внесение удобрений, особенно их нитратных форм (аммиачная, калийная, натриевая селитра). Подкармливать  растения лучше амидными или аммонийными  формами удобрений (карбамид или  мочевина, сульфат аммония), т. к. аммиачный  азот поглощается растениями и сразу  включается в аминокислоты и белки  без накопления нитратов.

Увеличение количества нитратов в продукции можно получить и  при избыточном удобрении почвы  органикой. Важный фактор регулирования  содержания NО₃^– – совместное применение органических и минеральных удобрений. Уменьшение содержания нитрат-ионов при этом связано с тем, что органические удобрения обогащают почвы полезной микрофлорой, которая временно поглощает лишний азот, стимулируя тем самым замедление процесса нитрификации в почве в начальный период развития растений.

 

Таблица 1 Содержание нитратов, мг/кг сырой массы товарной части растения

Подкормка азотом незадолго (за 1–2 недели) до уборки урожая также ведет к увеличению содержания нитратов в растительной продукции. Наоборот, чем больше срок между  внесением удобрений и уборкой  урожая, тем меньше NО₃^– содержится в растении. Наиболее эффективны подкормки азотом в период интенсивного роста растений. В это время азот быстро вовлекается в процесс роста и поэтому не накапливается в виде нитратов. При снижении интенсивности роста, вызванном старением растения или действием неблагоприятных внешних факторов, азот перестает вовлекаться в обмен веществ и накапливается в виде NО₃^–-ионов.

Хороший эффект дает применение медленно действующих форм азотных удобрений (карбамидформ урамик, оксамид, уреа–Z и др.), которые, постепенно растворяясь, обеспечивают более равномерное азотное питание растений.

Наряду c азотом для нормального роста и развития растений необходимы фосфор и калий. При дефиците этих питательных элементов затормаживается образование органического вещества в процессе фотосинтеза, в результате чего снижается расход поступившего азота на процессы роста. Это приводит к увеличению концентрации нитратного азота в органах растений. Следует избегать одностороннего преобладания минерального азота: его надо использовать с учетом обеспеченности растений фосфором, калием и другими элементами.

Из микроэлементов наиболее важным для предотвращения накопления нитратов является молибден, т. к. этот металл входит в состав нитратредуктазы и, следовательно, принимает участие в восстановлении нитратов.

Из остальных  агротехнических факторов выращивания  растений немаловажное влияние на концентрацию нитратов оказывают освещенность, влагообеспеченность, температура выращивания и сроки  уборки урожая.

При слабой освещенности нитраты не полностью превращаются в аминокислоты, особенно в листовых овощах, редисе, огурцах, выращиваемых в закрытом грунте. При посадке  овощных культур не следует заглушать  посевы, необходимо следить за правильным формированием растений, не допуская избыточной листовой массы.

В засушливые годы при внесении высоких доз азотных  удобрений в почву растения накапливают  больше нитратов, поэтому необходим  регулярный полив овощей, чтобы азотное  питание было умеренным и равномерным.

Температурный фактор особенно влияет на содержание нитратов у растений, выращенных в условиях короткого светового дня (редис, салат, шпинат, лук). Если в теплице  поддерживается умеренная температура (13–23 °С), то овощи содержат меньше нитратов, чем при более низкой (8–18 °С) или  более высокой (20–28 °С) температуре.