Биотехнология в молочном скотоводстве

4.Вызывание суперовуляции у коров-доноров.

Для вызывания суперовуляции  у крупного рогатого скота используются гонадотропные препараты (гонадотропин сыворотки жеребых кобыл - ГСЖК и  фолликулостимулирующий гормон - ФСГ - гипофиза животных), для синхронизации  половых циклов - аналоги простагландина Ф2-альфа (эстрофан, магэстрофан, клопростенол, суперфан, ремофан, клатрапростин, эстуфалан и др.). Препараты ГСЖК обладают комплексной фолликулостимулирующей и лютеинизирующей активностью. Период полураспада экзогенного ГСЖК у коров составляет около 6 дней. Соотношение ФСГ и ЛГ в различных партиях неодинаковое, что сказывается на результативности суперовуляции. Стимуляция роста фолликулов препаратами ГСЖК сопровождается, как правило, увеличением массы яичников, образованием после овуляции разного числа и величины желтых тел. Из-за длительного распада ГСЖК в крови животных накапливаются повышенные концентрации гормонов. Изменение эндокринного статуса при индукции суперовуляции может оказывать неблагоприятное действие на оплодотворяемость яйцеклеток, развитие зародышей, а также на физиологическое состояние половых органов (в частности, наблюдается кистозное перерождение яичников). Для исключения длительной стимуляции роста фолликулов применяется анти-СЖК. Обработка антисывороткой в день проявления охоты нейтрализует циркулирующую в крови животных ГСЖК и тем самым прекращает дальнейшую стимуляцию роста фолликулов в яичниках. Это создает более благоприятный фон для овуляции, оплодотворяемости яйцеклеток и последующего развития зародышей. В практике используются стандартные гонадотропные препараты высокой степени очистки: сергон (Чехия), фоллигон (Голландия), прегмагон (Германия). Эти препараты инъецируют донорам на 11-12-ый день полового цикла, однократно, в дозе 50 И.Е. на 100 кг живой массы животного. Применение этих гонадотропинов обеспечивает вызывание множественной овуляции у 75-78% животных и получение в среднем 3,5-4,0 жизнеспособных эмбриона на донора.

Для вызывания суперовуляции  у коров используются также гипофизарные препараты. Основное физиологическое  действие фолликулостимулирующих гормонов заключается в стимуляции роста  и созревания фолликулов яичника, образования  фолликулярных гормонов (эстрагенов), регулирующих процесс течки. Лютеинизирующий гормон совместно с фолликулостимулирующим вызывает овуляцию и стимулирует образование желтого тела. Желтое тело само выполняет функцию гормональной железы и вырабатывает гормон прогестерон, который обеспечивает сохранение беременности. В практике используются гипофизарные препараты производства США (ФСГ-п), России (ФСГ-супер), Чехии (фолликотропин), Литвы (фоллитропин) и др.

В отличие от ГСЖК, препараты  ФСГ вводятся многократно, так как  период полураспада ФСГ очень  короткий (5-6 ч). Применение ФСГ в  сочетании с простагландинами обеспечивает получение 5-6 жизнеспособных эмбрионов  и 10-12 овуляций на донора.

Оптимальными параметрами  использования гипофизарных гонадотропинов являются: доза ФСГ-п – 40-50 мг, ФСГ-супер  – 50А.Е., фолликотропина – 480 М.Е., фоллитропина – 1200 ЕД; начало экзогенного введения 10-12-ый день полового цикла; инъекция аналога простагландина F2-α на 3-й день от начала обработки в дозе 750 мкг.

Опыт работы по вызыванию  суперовуляции у коров-доноров  сывороточными и гипофизарными  препаратами показал, что при  использовании гипофизарных гормонов (ФСГ-п, ФСГ-супер, фолликотропин, фоллитропин) получаются более стабильные и высокие результаты суперовуляции и эмбриопродукции (табл. 1). Так, процент коров-доноров, реагирующих на обработку сывороточными гонадотропинами, составил 75,0-78,3%, гипофизарными препаратами – 85,3-88,8%, число овуляций на донора – соответственно 8,3-9,7 и 10,2-12,0, количество пригодных эмбрионов – 3,5-4,0 и 5,5-6,1.

Залогом эффективного применения метода трансплантации эмбрионов в  практике племенной работы являются высокие показатели овулирующей реакции яичников коров-доноров на гонадотропные обработки и выход достаточного числа качественных эмбрионов. Высокая вариабельность и непредсказуемость как по числу вызванных овуляций, так и по количественному и качественному составу извлеченных зародышей создают трудности в планировании программы пересадок эмбрионов реципиентам и ведут к повышению затрат на трансплантацию.

В связи с этим, для  совершенствования схем индукции полиовуляции у коров-доноров требуется изыскания новых подходов к решению этой проблемы, разработки эффективных препаратов, позволяющих получать хорошие результаты по выходу эмбрионов.

В то же время использование  вышеперечисленных гонадотропинов при индукции полиовуляции не исключают образования на яичниках неовулировавших фолликулов, наличие которых может привести к нарушениям гормонального статуса доноров. С целью исключения длительной стимуляции роста фолликулов и наступления равномерной овуляции рекомендуется использовать синтетические аналоги гонадотропин рилизинг-гормона (Гн-РГ). Инъекция донору Гн-РГ (сурфагон, диригистран и др.) в день охоты способствует выделению лютеинизирующего гормона и овуляции фолликулов в фиксированное время.

Таблица 1

Результаты суперовуляции  и эмбриопродукции доноров при использовании разных гонадотропинов.

Здесь и далее: Р£ 0,05, Р£ 0,01, Р£ 0,001

Многолетний опыт нашей работы показал, что инъекция Гн-РГ в 2-3 раза снижает число неовулировавших фолликулов, повышает на 6-9% количество овуляций и на 11-19% число эмбрионов, пригодных к пересадке, в расчете на одного донора.

5.Синхронизация половых циклов доноров и реципиентов.

Синхронность проявления эструса между донором и реципиентом - важнейшее условие высокой приживляемости эмбрионов. Для синхронизации охоты используют простагландин ПГФ2-альфа или его синтетические аналоги (эстрофан, магэстрофан, ремофан, клопростенол, клатрапростин, суперфан, эстуфалан и др.).

По технологии трансплантации на каждого донора следует подготавливать не менее 5 реципиентов, причем день охоты  реципиента должен совпадать с днем первого осеменения суперовулирующего донора. В случае использования в технологии трансплантации постоянных доноров (проверенных на гормональную обработку и имевших стабильный выход качественных эмбрионов) число реципиентов можно увеличить до 10.

Перед гормональной обработкой животных исследуют ректально (определяют размеры и форму яичников, наличие  и выраженность желтого тела). Лютеиновая фаза цикла соответствует оптимальному времени для инъекции препаратов. Простагландины вводят внутримышечно  в дозах, указанных в наставлениях по их применению. Как правило, животные приходят в охоту через 48-72 часа после  инъекции препарата. Не пришедших в  охоту животных обрабатывают повторно через 10-11 дней с момента первого  введения ПГФ2-альфа. Двукратное введение препарата (в любую фазу полового цикла) с 10-ти дневным интервалом эффективно использовать на большом поголовье  доноров и реципиентов, так как  это способствует увеличению числа животных, проявивших признаки половой охоты, и снижает трудоемкость операций обслуживающего персонала.

Эффективен способ синхронизации  эструса у доноров и реципиентов  путем комплексного использования  в лютеиновой фазе полового цикла  инъекций гонадотропина с простагландином  Ф2 и гонадотропин рилизинг-гормоном. Животных, имеющих хорошо выраженное желтое тело, обрабатывают ФСГ-супер в общей дозе 10 Арм.ед. для телок и 15 Арм.ед. для коров двукратно по 5-7,5 Арм.ед. через 12 часов, на следующий день однократно инъецируют эстрофан по 500 мкг, а через 60 часов от момента введения эстрофана дополнительно сурфагон по 25 мкг. Половая охота у животных проявляется на 2-3 сутки после введения простагландина.

Следует учитывать, что данные обработки осуществляются не параллельно: доноров обрабатывают за 15 дней до начала стимулирования суперовуляции, а реципиентов  – на второй день после начала стимулирования суперовуляции у доноров.

Исследованиями установлено  (табл. 2), что комплексное использование гормональных препаратов ФСГ, ПГФ2альфа Гн-РГ для синхронизации эструса у самок крупного рогатого скота существенно повышает эффективность работ по трансплантации. Из 50 телок, обработанных в опыте, клинически выраженную охоту проявили 88% животных, что на 11,4% больше, чем в контроле, а число реципиентов, пригодных для эмбриотрансплантации, и приживляемость пересаженных зародышей увеличилась соответственно на 15,0 и 12,2%.

Аналогичная закономерность наблюдалась по группе коров-доноров. Количество животных, пригодных для  использования в качестве доноров, увеличилось на 15,5, а число коров, положительно реагирующих полиовуляцией, на – 14,8%. В опытной группе по сравнению с контрольной повысился выход полноценных эмбрионов от донора на 24% (Р£ 0,05), а выход зародышей, пригодных для пересадки, от общего числа извлеченных зародышей –14,7%.

Таблица 2

Эффективность способов подготовки животных для эмбриотрансплантации.

Таким образом, комплексное  использование гормональных препаратов для синхронизации эструса самок  крупного рогатого скота позволяет  повысить количество телок-реципиентов  и коров-доноров, пригодных для  эмбриотрансплантации, соответственно на 15 и 15,5%, уровень приживляемости зародышей – на 12,2%, выход полноценных эмбрионов от числа извлеченных – на 14,7%.

6.Искусственное осеменение коров-доноров.

Эффективность искусственного осеменения коров-доноров в суперовулирующую охоту во многом зависит от правильности выбора оптимального времени для осеменения коров с учетом таких особенностей эструса, как проявление течки, ее интенсивность и длительность, общая реакция возбуждения, охоты и овуляции, качество используемой спермы быков-производителей, а также строгого соблюдения ветеринарно-санитарных требований при выполнении работ.

Течка у коров характеризуется  набуханием и покраснением слизистых  преддверия влагалища и шейки  матки, выделением слизи из половых  органов. Длительность течки составляет от 2 до 6 суток. Через 24-36 часов после  начала течки наступает общее  возбуждение, животное теряет аппетит, снижает удой, становится беспокойным, прыгает на других животных. Через 6-12 часов, после того как у коровы появились признаки возбуждения, наступает  охота, которая продолжается 12-18 часов.

У мясного скота продолжительность  течки колеблется в пределах от 21 до 44 часов, охота длится от 7 до 12 часов, овуляция наступает через 20-25 часов  от начала и 10-15 часов после окончания  охоты.

Выявление животных в охоте  проводят не реже трех раз в день при активных прогулках или пастьбе. В суперовулирующий цикл 60-70% коров приходит в охоту утром, 10% - в полдень и 20-30% вечером. Продолжительность каждого наблюдения составляет 1-2 часа. Охоту считают установленной, если корова не менее двух раз подряд проявила рефлекс неподвижности.

При осеменении необходимо учитывать тот факт, что овуляция наступает через 10-15 часов после  окончания охоты, а яйцеклетки при  выходе из фолликулов в рог матки  способны сохранять жизнеспособность только в течение 5-6 часов, поэтому  осеменять коров следует перед  овуляцией, как можно ближе к  ее началу.

Сроки осеменения коров можно  определить и ректально. За 6-12 часов  до овуляции в яичнике присутствует зрелый фолликул, представляющий собой  пузырек размером 1,5-1,8 см, при осторожном надавливании на который ощущается зыбление.

Осеменение доноров осуществляют ректоцервикальным способом, позволяющим  контролировать состояние половых  органов самки, дважды в день двойной  дозой спермы в тело матки с  применением стерильных инструментов одноразового пользования. В каждой дозе должно быть не менее 30 млн. подвижных  спермиев. Первое осеменение проводят после установления охоты, второе - через 10-12 часов. При необходимости (длительная охота) осеменение повторяют 3-4 раза. Используется только сперма с  высокой оплодотворяющей способностью и хорошего качества. Иногда для  повышения результативности осеменения используется семя двух быков. Достоверно не известны причины этого. Однако существует мнение, что происходит отбор наиболее жизнеспособных мужских гамет, обладающих высокой оплодотворяющей способностью.