Питательные среды

 

Помимо указанных сред, способность микроорганизмов расщеплять различные питательные субстраты определяют с помощью бумажных дисков, пропитанных определенными реактивами (системы индикаторные бумажные "СИБ"). Эти диски опускают в пробирки с исследуемой культурой и уже через 3 ч инкубации в термостате при 37° С по изменению цвета дисков судят о разложении углеводов, аминокислот, белков и т. д.

 

Гемолитические свойства (способность разрушать эритроциты) изучают на средах с кровью. Жидкие среды при этом становятся прозрачными, а на плотных средах вокруг колонии появляется прозрачная зона. При образовании метгемоглобина среда зеленеет.

Глава 9.Сохранение культур

 

Выделенные и изученные культуры (штаммы), представляющие ценность для науки или производства, хранят в музеях живых культур. Общесоюзный музей находится в Государственном НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича (ГИСК).

 

Задача хранения - поддержать жизнеспособность микроорганизмов и предупредить их изменчивость. Для этого надо ослабить или прекратить обмен в микробной клетке.

 

Один из самых совершенных методов длительного сохранения культур - лиофилизация - высушивание в вакууме из замороженного состояния позволяет создать состояние анабиоза. Высушивание проводят в специальных аппаратах. Хранят культуры в запаянных ампулах при температуре 4° С, лучше при -30-70° С.

 

Восстановление высушенных культур. Сильно нагревают кончик ампулы в пламени горелки и прикасаются к нему ватным тампоном, слегка смоченным холодной водой, чтобы на стекле образовались микротрещины, через которые воздух медленно просочится внутрь ампулы. При этом, проходя через разогретые края трещин, воздух стерилизуется.

 

Дав войти воздуху, быстро пинцетом надламывают и удаляют верхушку ампулы. Слегка обжигают отверстие и стерильной пастеровской пипеткой или шприцем вносят в ампулу растворитель (бульон или изотонический раствор). Перемешивают содержимое ампулы и засевают на среды. Рост восстановленных культур в первых посевах может быть замедлен.

 

Длительно сохранять культуры можно также в жидком азоте (-196° С) в специальных приборах.

 

Методы непродолжительного сохранения культур следующие:

 

1) субкультивирование (периодические пересевы на свежие среды) с интервалами, зависящими от свойств микроорганизма, среды и условий культивирования. Между пересевами культуры хранят при 4° С;

 

2) сохранение под слоем  масла. Культуру выращивают в  агаре столбиком высотой 5-6 см, заливают стерильным вазелиновым маслом (слой масла примерно 2 см) и хранят вертикально в холодильнике. Сроки хранения у разных микроорганизмов разные, поэтому из пробирок периодически высевают культуру, чтобы проверить ее жизнеспособность;

 

3) хранение при -20-70° С; 4) хранение в запаянных пробирках. По мере надобности сохраняемый  материал высевают на свежую  среду.

 

 

 

 

 

 

Список литературы:

 

 

1. Алешукина, А. В. Медицинская микробиология: учебное пособие для вузов / А. В. Алешукина. - Ростов-на-Дону: Феникс,

2003. - 437 с.

2. Аммосов, А. Д. Гепатит В / А.Д. Аммосов. - Новосибирск, 2000. - 132 с.

3. Бактерийные  и вирусные препараты : учеб. пособие / С. П. Карпов, А. А. Триполитова, В. Н. Новикова, Н. Ф. Сурнина, Б. Г. Трухманов ; под общ. ред. С. П. Карпова. - Томск : Изд-во ТГУ, 1971. - 308 с.

4. Бектемиров, Т. А. Успехи и проблемы вакцинопрофилактики  гепатита В / Т. А. Бектемиров // Вакцинация. - 2001. - №3. - С. 4-5.

5. Богданова, О.Ю. Систематика и классификация микроорганизмов: метод. указания к практическим  работам по дисциплине «Микробиология» / О.Ю. Богданова. - Мурманск: Изд-во МГТУ, 2000. - 80 с.

6. Богданова, О.Ю. Микробиология: учебное пособие / О.Ю. Богданова. - Мурманск: ООО РОСТСЕРВИС, 2005. - 250 с.

7. Борисов, Л.Б. Медицинская  микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов - М.: Медицинское информационное  агентство, 2002. - 736 с.

8. Букринская, А.Г. Вирусология / А.Г. Букринская - М.: Медицина, 1986. - 336 с.

9. Воробьёв, А.А. Основы  микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учеб. / А.А. Воробьёв, Ю.С. Кривошеин, А.С. Быков - М.: Высш. шк., 2001. - 224 с.

10. Гепатиты В, С, D - проблемы диагностики, лечения  и профилактики // Бюллетень «НВБ». - М.: Вектор-бест. - 2003. - № 3, сентябрь.

11. Гусев, М.В. Микробиология: Учебник для студ. биол.специальностей. / М.В. Гусев, Л.А. Минеева. - 4-е изд., стре. - М.: Изд. центр «Академия», 2003. - 464 с.

12. Емцев, В.Т. Микробиология: учебник для вузов / В.Т. Емцев, Е.Н. Мишустин. - 6-е изд., испр. - М.: Дрофа, 2006. - 444 с.

13. Калинин, В.Л. Введение  в молекулярную вирусологию /

В.Л. Калинин - СПб.: Изд-во СПбГТУ, 2002. - 302 с.

14. Кипайкин, В.А. Эпидемиология / В.А. Кипайкин, Л.А. Рубашкина - Ростов н/Д.: Феникс, 2002. - 480 с.

15. Коротяев, А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учеб. / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев - 3-е изд., перераб. и испр. - СПб.: СпецЛит, 2002. - 591 с.

16. Лабораторная  диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний / Под ред. Э. Леннета, Н. Шмидта - М.: Медицина, 1974. - 775 с.

17. Левитан, Б. Н. Дельта-гепатит // Б. Н. Левитан, А. В. Дедов. - Астрахань: АГМА. - 2001. - 104 с.

18. Медицинская  вирусология: Руководство / Под общ. ред. Д. К. Львова. - М.: ООО «Медицинское  информационное агентство», 2008. - 656 с.

19. Медицинская  микробиология / Под ред. В.И. Покровский, О.К. Поздеев - М.: Гэотар Медицина, 1999. - 1200 с.

20. Мешкова, Р.Я. Руководство по иммунопрофилактике для врачей / Р.Я. Мешкова - Смоленск, 1998. - 132 с.

21. Нетрусов, А.И. Общая микробиология: учебник для студ. Вузов / А.И. Нетрусов, И.Б. Котова. - М.: Издательский центр «Академия», 2007. - 288 с.

22. Определитель  бактерий Берджи / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Смита и др.; Пер. с англ. В 2 т. - М.: Мир, 1997.

23. Основы медицинской  бактериологии, вирусологии и иммунологии/ Под ред. Г.М. Шуба - М.: Логос, 2003. - 264 с.

24. Перетрухина, А. Т. Материалы по получению культурального оспенного аллергена для реакции in vitro: Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук / А.Т. Перетрухина. - Томск, 1978. - 163 с.

25. Практикум по  общей вирусологии / Под. ред. И.Г. Атабекова. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Изд-во МГУ, 2002. - 184 с.

26. Практикум по  микробиологии: Учеб. пособие для  студ. высш. учеб. заведений / А.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук // Под ред. А.И. Нетрусова. - М.: ИЦ «Академия», 2005. - 608 с.

27. Пяткин, К.Д. Микробиология / К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - М.: Медицина, 1981. - 511 с.

28. Тимаков, В. Д. Микробиология / В.Д. Тимаков. - М.: Медицина, 1973. - 430 с.

29. Троценко, Н.И. Практикум по ветеринарной вирусологии / Н.И. Троценко, Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская - 2-е изд., перераб и доп. - М.: Колос, 2000. - 272 с.

30. Справочник  по применению бактерийных и  вирусных препаратов / В. И. Алексеева [и др.] ; сост. В. Л. Василевский ; под ред. С. Г. Дзагурова, Ф. Ф. Резепова. - М. : Медицина, 1975. - 223 с.

31. Шувалова, Е.П. Инфекционные болезни: учебное пособие  для вузов/ Е.П. Шувалова, Е.С. Белозеров, Т.В. Беляева, Е.И. Змушко; Под ред. Е.П. Шуваловой. - Ростов н/Д: Изд-во «Феникс», 2001. - 960 с.

32.   К. Френкель, "Основы учения о бактериях"

33.   Актуальные  вопросы эпидемиологии и инфекционных  болезней. / Н.А. Семина. - М.: Медицина, 1999

34.   Медицинская  микробиология / Под ред. акад. РАМН  В.И. Покровского. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001.

35.   Санитарная  микробиология и вирусология. / З.Н. Качемасова, С.А. Ефремова, А.М. Рыбакова - М.: Медицина, 1987.

36.   Егоров  Н.С. Практикум по микробиологии. М 1976