Контрольная работа по микробиологии

План

1. Таксономическое положение возбудителя…………………………………….3
2. Основные биологические свойства возбудителя……………………………3-4
3. Микробиологическая диагностика…………………………………………...5-7
4. Этиотропная терапия и специфическая профилактика…………………....7-10
5. Ситуационная задача……………………………………………………….10-11
6. Список  используемой литературы……………………………………………12

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1. Таксономическое положение возбудителя.

Вирус гриппа (Mixovirus influenzae) принадлежит к семейству ортомиксовирусов. Ортомиксовирусы (семейство Orthomyxoviridae) - это РНК-содержащие сложноорганизованные вирусы. Ортомиксовирусы получили свое название из-за сродства к мукопротеидам поражаемых клеток и способности присоединяться к гликопротеидам - поверхностным рецепторам клеток ( от греч. Orthos- прямой, myxa - слизь).

Семейство включает в себя род Influenzavirus. На основании различий специфических антигенов - нуклеопротеида (NP) и матриксного белка (М) вирусы гриппа разделены на три типа: А, В, С. Типы А и В образуют один род, тип С - другой. По антигенной структуре вирус гриппа типа А подразделяется на подтипы, а они в свою очередь, на множество вариантов. Вирусы, вызывающие грипп у человека имеют три основных антигенных подтипа гемагглютинина (Н1, Н2, Н3) и два подтипа нейраминидазы (N1,N2,N3).

 

2. Основные биологические свойства возбудителя.

Вирус гриппа имеет сферическую структуру и размер 80-120 нанометров. Геном вируса представляет собой спираль однонитчатой сегментированной минус-нитевой РНК (вирусы А и В имеют 8 сегментов, вирус С - до 7) Сегменты кодируют 10 вирусных белков. Сегменты РНК имеют общую белковую оболочку, которая объединяет их, образуя нуклеопротеид. Снаружи вирус покрыт липидной оболочкой. Именно липиды ответственны за ту тяжелую интоксикацию, которая поражает человека во время болезни. На поверхности вируса находятся выступы (гликопротеины) - гемагглютинин (названный по способности агглютинировать эритроциты) и нейроминидаза (фермент). Гемагглютинин обеспечивает способность вируса присоединяться к клетке. Нейроминидаза отвечает, во-первых, за способность вирусной частицы проникать в клетку хозяина, во-вторых, за способность вирусных частиц выходить из клетки после размножения. Нуклеопротеид (также называемый S-антигеном) постоянен по своей структуре и определяет тип вируса (А, В или С). Поверхностные антигены (гемагглютинин и нейроминидаза- V-антигены), напротив изменчивы и определяют разные штаммы одного типа вируса..

Вирусы рода Influenzavirus вызывают острое инфекционное вирусное заболевание, получившее название грипп. Грипп - это тяжелая вирусная инфекция, характеризуется поражением респираторного тракта, лихорадкой, общей интоксикацией, нарушением деятельности сердечно-сосудистой и нервной систем. Заболевание гриппом сопровождает высокая смертность, особенно у маленьких детей и пожилых людей. Вирус гриппа А как правило вызывает заболевание средней или сильной тяжести. Поражает как человека, так и некоторых животных (лошадь, свинья, птицы). Свиньи восприимчивы к вирусам птичьего, человеческого и свиного гриппа и, таким образом, могут заражаться вирусами гриппа других видов (например, уток или человека) одновременно. В этих условиях в одном организме может происходить активная репликация обоих подтипов вируса, которая может привести к перераспределению сегментов геномной РНК и, в результате, появлению нового вируса, содержащего новую комбинацию капсидных Н и\или N; этот процесс получил название антигенной изменчивости. Антигенная изменчивость может привести к появлению нового подтипа гриппа А, способного преодолевать межвидовой барьер и заражать людей, которые имеют слабый иммунитет или вообще не обладают иммунитетом к новому вирусу. При условии быстрой передачи вируса от одного человека к другому возникает угроза пандемии гриппа. Именно вирусы гриппа А ответственны за появление пандемий и тяжелых эпидемий. Известно множество подтипов вируса А, которые классифицируются по поверхностным антигенам - гемагглютинину и нейраминидазе: на настоящий момент известно 16 типов гемагглютинина и 9 типов нейраминидазы. Вирус видоспецифичен: то есть как правило, вирус птиц не может поражать свинью или человека, или наоборот.

Вирус гриппа В как и вирус гриппа А, способен изменять свою антигенную структуру. Однако эти процессы выражены менее четко, чем при гриппе типа А. Вирусы типа В не вызывают пандемии и обычно являются причиной локальных вспышек и эпидемий, иногда охватывающих одну или несколько стран. Вспышки гриппа типа В могут совпадать с таковыми гриппа типа А или предшествовать ему. Вирусы гриппа В циркулируют только в человеческой популяции (чаще вызывая заболевание у детей). Вирус гриппа С достаточно мало изучен. Инфицирует только человека. Симптомы болезни обычно очень легкие, либо не проявляются вообще. Он не вызывает эпидемий и не приводит к серьезным последствиям. Является причиной спорадических заболеваний, чаще у детей. Антигенная структура не подвержена таким изменениям, как у вирусов гриппа А. Заболевания, вызванные вирусом гриппа С , часто совпадают с эпидемией гриппа типа А. Клиническая картина такая же, как при легких и умеренно тяжелых формах гриппа А.

Вирус гриппа наиболее устойчив при низких температурах - он может сохраняться при температуре 40С в течение 2-3 недель; прогревание при температуре 50-600С вызывает инактивацию вируса в течение нескольких минут, а действие дезинфицирующих растворов - мгновенно.

Диагноз «грипп» базируется на выделении и идентификация вируса, поиске вирусоспецифических антител в сыворотке больного.

При отборе материала для исследования важно получить пораженные вирусом клетки, так как именно в них происходит репликация вирусов. Материал для исследования - носоглоточное отделяемое - берут тампонами или отсасывают с задней стенки глотки и носа. Иногда используют мазки-отпечатки со слизистой носа. Пробы берут в первые три дня болезни, до начала антибактериальной терапии или после выведения антибактериального препарата из организма. При взятии материала соблюдают правила асептики. Отправляют в лабораторию, поместив в специальные растворы для сохранения жизнедеятельности инфицированных вирусом клеток. Материал либо хранят при температуре +40С, если исследование планируется в ближайшие 1-2 дня после взятия материала, либо замораживают при температуре -500С, если исследование будет проводиться в более поздние сроки. Для определения антител исследуют парные сыворотки крови больного.

 

3. Микробиологическая диагностика.

Микробиологическая диагностика основана на идентификации возбудителя или выявления иммунного ответа организма больного на него. Используются вирусологические, серологические, иммунологические и молекулярно-биологические методы (ПЦР).

В межэпидемический период используют иммунологические методы экспресс-диагностики. С помощью РИФ обнаруживают вирусные антигены на мазках эпителия слизистой оболочки носа. Исследуемый материал берут из носа в первые дни болезни. Приготовленные из него мазки обрабатывают специфическими гриппозными флюоресцирующими сыворотками. Образовавшийся комплекс антиген-антитело ярко светится в ядре и цитоплазме клеток цилиндрического эпителия и отчетливо виден в люминесцентном микроскопе. Ответ можно получить через 2-3 часа. Однако чувствительность его зависит от качества забора материала.

Новым направлением в разработке методов быстрой диагностики является создание экспрессных тестов, основанных на методе иммунохроматографии. Для его проведения используют сорбированные антитела к вирусному антигену, связанные с ферментом. Во время инкубации вирус взаимодействует с коньюгатом, и эта смесь, продвигаясь по хроматографической мембране, достигает места расположения антител, специфичных выявляемому вирусу. В случае положительного результата происходит специфическое связывание с антителом, что приводит к изменению окраски индикатора. Различные коммерческие иммунохроматографические тест-системы позволяют диагностировать грипп и дифференцировать тип вируса. Проведение этого метода занимает в среднем 10-30 минут. Метод прост, не требует для выполнения специально обученного персонала и может быть использован для диагностики в полевых условиях.

Вирусологический метод позволяет выделить вирус гриппа от больного, что делает возможным изучать биологические свойства вируса. Оптимальная лабораторная модель для культивирования большинства штаммов вируса гриппа - это куриный эмбрион. Культурирование вируса производится на 10-11 дневных куриных эмбрионах (в амниотической или аллантоисной жидкости) в течение 48 часов (для достижения необходимого для обнаружения количества вируса). Для определения типа вируса требуется 1-2 дня. Выделить вирусы можно и в культуре клеток (первичная культура клеток почек обезьян, почек макак-резус и т.п.), и в организме лабораторных животных. С 1998 года появились новые штаммы вируса А (Н3N2) и вируса гриппа типа В, для которых оптимальной моделью являются культуры клеток. В виду сложности и длительности процедуры, такая диагностика имеет смысл только для определения этиологии локальной эпидемии.

Серологические методы помогают ретроспективной диагностике гриппа. Они не могут быть использованы для диагностики гриппа на ранних стадиях заболевания. Это связано с тем, что противогриппозные антитела появляются в крови через две недели после инфицирования. Основное значение серологических методов - ретроспективная диагностика гриппа, что позволяет косвенно определить спектр циркулирующих в человеческой популяции вирусов гриппа.

Исследуют парные сыворотки крови, взятые у больных в острый период болезни (до 5-го дня от начала заболевания) и в период реконвалесценции с интервалом 12-14 дней. Наиболее показательными в серологической диагностике являются реакция связывания комплемента (РСК) с гриппозными антигенами и реакция торможения гемагглютинации (РТГА). Реже используют реакцию нейтрализации (РН) и реакцию торможения непрямой гемагглюти-нации (РНГА). Независимо от применяемого метода диагноз гриппа ставится в случае нарастания титра антител в сыворотке реконвалесцентов в 4 и более раз по сравнению с сывороткой, взятой в острой фазе болезни, в условиях одномоментного исследования обеих сывороток. Каждая из указанных реакций имеет свои достоинства и недостатки. Преимуществом РСК в диагностике гриппа является отсутствие влияния на результаты исследования изменений антигенной структуры циркулирующего возбудителя, а также неспецифических ингибиторов в исследуемой сыворотке, существенно осложняющих постановку РТГА. Недостатком РСК является сложность и трудоемкость данного метода, требующего для своей постановки около 3 дней.

РТГА, благодаря простоте выполнения и высокой специфичности, стала наиболее широко используемым методом серологической диагностики гриппа, имеющим, однако, и ряд существенных недостатков:

· Влияние неспецифических ингибиторов гемагглютинации, для устранения которого требуется использование специально отобранных ингибиторо-резистентных штаммов;

· Сравнительно невысокая чувствительность реакции, что затрудняет выявление низких концентраций антител;

· Частые расхождения результатов РТГА при обследовании одних и тех же сывороток в разных лабораториях.

Частота положительных диагнозов гриппа по данным серологических методов зависит от следующих факторов:

· Интенсивности заболеваемости населения гриппом;

· Точности выявления заболеваний по данным клинической диагностики;

· Точности применяемых методов лабораторного исследования;

· Антигенной структуры используемых для диагностики штаммов вируса гриппа, что особенно важно для постановки реакции торможения гемагглютинации;

· Возраста обследуемых больных.

Методы молекулярной биологии позволяют быстро и с высокой степенью достоверности проводить не только индикацию, но и субтипирование (идентификацию) вирусов гриппа. Совершенствование метода ПЦР диагностики привело к созданию технологии постановки ПЦР в режиме реального времени, что значительно повысило чувствительность метода и сократило время получения результата до нескольких часов, по сравнению с классической ПЦР, для постановки которой требовалось до 48 часов. Метод позволяет определить малые и сверхмалые количества РНК вируса, проводить дифференцировку между типами вируса.

 

4. Этиотропная терапия и специфическая профилактика.

Этиотропная терапия заключается в назначении противовирусных препаратов. На сегодняшний день медицина имеет в своем распоряжении относительно небольшой перечень высокоспецифических противовирусных средств, которые получили международное признание.

Противовирусное лекарственное средство, которое используется в медицинской практике, обязательно должно отвечать двум требованиям. Во-первых оно должно действовать не только на определенный этап репродукции вируса, хотя в идеале этот эффект должен носить строго избирательный характер. Повреждение того или иного этапа репродукции вируса не должно затрагивать процесс жизнедеятельности клеток, органов и целого организма, иметь побочное действие. Во-вторых, сочетание с такими уникальными свойствами должно иметь оптимальную биодоступность при его применении. Его концентрация должна поддерживаться постоянно в организме пациента в процессе всего курса применения препарата.