Автор работы: Пользователь скрыл имя, 16 Мая 2012 в 23:51, курсовая работа
Цель данной курсовой работы: проанализировать методы анализа дыхания микроорганизмов почвы и влияния на него химических и физико-химических факторов.
В работе рассмотрена почва и ее характеристики, методы контроля микробиологического состава почв, методы контроля дыхания почв, биокалориметрический анализ биологической активности и содержания микроорганизмов почв, влияние физико-химических факторов на дыхание микроорганизмов почв. В экспериментальной части данной работы проведено определение общего количества микроорганизмов методом культивирования, оценка редуктазной активности микроорганизмов, измерение тепловыделения микроорганизмов, определение базового дыхания микроорганизмов почв, проанализировано влияние физических факторов на микроорганизмы почв.
Введение………............................................................................................................................................5
1 Основная часть……………………………………………………………………………………….…..7
1.1 Почва и ее характеристики…………………………………………………………………………....7
1.1.1 Микробиологический состав почв…….............................................................................10
1.1.2 Биологическая активность почв……………………………………………………….…13
1.2 Методы контроля микробиологического состава почв…………………………………………….14
1.2.1 Методы определения содержания грибов………………………………………….…….17
1.2.2 Методы определения содержания бактерий………..........................................................19
1.3 Методы контроля дыхания почв……………………………………………………………………..21
1.3.1 Базальное и индуцированное дыхание………………......................................................24
1.3.2 Определение поглощения О2……………………..............................................................25
1.3.3 Определение выделения СО2……………………………………………………………..26
1.4 Биокалориметрический анализ биологической активности и содержания микроорганизмов почв…………………………………………………………………………………………………………28
1.4.1 Биокалориметрический метод определения содержания микроорганизмов в средах……………………………………………………………………………………………………….29
1.4.2 Оценка уровня биологической активности почв………………………………………..29
1.5 Влияние физико-химических факторов на дыхание микроорганизмов почв…………………………........................................................................................................................35
1.5.1 Методы оценки влияния факторов на дыхание микроорганизмов…………………….39
1.5.2 Влияние токсичных факторов на дыхание микроорганизмов………………………….43
1.6 Математическая модель дыхания микроорганизмов и оценки влияния различных факторов среды ………………….................................................................................................................................49
2 Экспериментальная часть……………………………………………………………………………..51
2.1 Материалы и оборудование………………………………………………………………………...…51
2.2 Микроорганизмы и питательные среды……………………………………………………………...51
2.2.1 Питательные среды для культивирования микроорганизмов……………......................51
2.2.2 Выделение чистых культур бактерий и грибов………………………………………….53
2.3 Методы анализа……………………………………………………………………………………..…54
2.3.1 Определение общего количества микроорганизмов методом культивтрования….......................................................................................................................................54
2.3.2 Построение калибровочной зависимости микроорганизмов по спектру мутности……………………………………………………………………………………………………55
2.3.3 Оценка редуктазной активности микроорганизмов…………………………………….56
2.3.4 Измерение тепловыделения микроорганизмов почв……………………………………57
Заключение…………………………………………………………………………....................................59
Список использованной литературы……………………………………………………………………..60
В
природной обстановке влажность
почвы сильно колеблется, особенно
резко в неорошаемых почвах южной
зоны. Здесь в период дефицита влаги
нередко подавляется
Таким
образом, в почвенных процессах
огромное значение имеет сочетание
температурных условий и
Таблица 1
Температура почвы, °С | Коэффициент увлажнения по Иванову | Возможная интенсивность микробиологической деятельности |
³30 | ³1,5 | Слабая |
30-20 | 1,49-1,0 | Очень интенсивная |
20-10 | 0,99-0,6 | Довольно интенсивная |
10-5 | 0,59-0,30 | Слабая |
5 | 0,29-0,13 | Очень слабая |
В полевых условиях благоприятный водный режим может быть создан обработкой почвы, ее поливом, мелиорацией и т.д. Температурно-водный режим оказывает большое влияние на формирование микробного ценоза почвы. Наблюдения свидетельствуют о закономерной смене микробных ассоциаций в ходе распада органического вещества. Так, в первые фазы разложения растительных остатков на них развиваются грибы и неспорообразующие бактерии. Позднее увеличивается число бацилл и актиномицетов. Происходит также смена систематических группировок микроорганизмов. Поскольку в разных климатических зонах разложение органического вещества идет с различной быстротой, то это существенно сказывается на составе создающихся в почве группировок микроорганизмов.
Не меньшее значение для микробиологических процессов почвы, чем температура и влажность, имеет воздушный режим. Воздух содержится в почвенных порах, которые составляют в отдельных случаях от 25 до 70% общего объема почвы. Содержание воздуха в почве подвержено сильным колебаниям в зависимости от ее увлажнения, уплотнения и т.п.
В
связи с потреблением кислорода
почвенными микроорганизмами и корнями
растений содержание его в почве
снижено. В затопленных почвах иногда
кислорода почти нет. В воздухе
слежавшейся почвы имеется
В почвенном воздухе повышено содержание углекислого газа, который выделяют микроорганизмы и корни растений. Чаще всего в почвенном воздухе содержится 0,3-1,5% углекислого газа, в то время как в атмосферном – только 0,03%. В затопленных почвах количество СО2 повышается до 10%. В атмосфере щелочных почв углекислый газ практически отсутствует. В целом газовый состав почвенного воздуха подвержен суточным и сезонным колебаниям.
При повышении содержания СО2 в воздухе почвенный раствор сильно обогащается этим газом. Вследствие высокой растворимости СО2 в воде при обогащении им почвы может возникнуть обстановка, близкая к анаэробиозу, несмотря на относительно высокое содержание в почвенном воздухе кислорода, который растворяется хуже. Анаэробиоз легче создается в микропорах и капиллярных промежутках почвы.
Аэробные микроорганизмы хорошо переносят повышенное содержание в воздухе СО2. Нередко отмечается даже улучшение их роста при обогащении воздуха углекислотой. Тем не менее при концентрации СО2 1-1,5% и выше в деятельности некоторых групп микроорганизмов начинает проявляться депрессия. Вероятно, отчасти по этой причине в нижних горизонтах пахотного слоя меньше микроорганизмов, чем в верхних.
Обеспеченность
почвы кислородом связана с ее
окислительно-
При снижении Eh до 200-250 мВ в почве начинают развиваться микробиологические процессы резко восстановительного характера, например образование глея. В нейтральных почвах уже при Eh, равном 250 мВ, восстанавливаются такие количества марганца, что образовавшиеся закисные соединения этого элемента могут отравить растение. При Eh 340 мВ создается обстановка, благоприятствующая энергичному восстановлению нитратов до свободного азота.
Не столь желательны для почвы и резко окислительные условия. Так, в нейтральных почвах (pH 6,5-7) при Eh 550 мВ, а в кислых (pH около 5) при Eh 680 мВ происходит почти полное окисление солей железа и марганца, и они выпадают из раствора в виде гидратов окиси, что приводит к нарушению питания растений этими элементами.
На
окислительно-
Оптимизации
окислительно-
В результате деятельности разных групп микроорганизмов газовый состав почвы значительно отличается от атмосферного. Так, в почве имеются газы, практически отсутствующие в атмосфере. Это окислы азота, сероводород, метан, окись углерода, молекулярный водород и др. Количество их варьирует в зависимости от условий, создающихся в почвенной среде.
На характер микрофлоры большое влияние оказывает активная кислотность почвы. По величине pH почвы могут быть разделены на следующие группы: сильнокислые – pH 3-4, кислые – 4-5, слабокислые – 5-6, нейтральные – 6-7, щелочные – 7-8, сильнощелочные – 8-9 и выше.
Значение pH одной и той же почвы на разных, даже близко расположенных, участках поля может несколько различаться. В течении вегетационного периода реакция почвенной среды также подвержена изменениям. Это связано с жизнедеятельностью микроорганизмов, образованием ими СО2, кислот и т.п.
Следует иметь в виду, что значение pH почвы, определяемое обычными методами, дает лишь средний показатель ее кислотности. На самом деле pH отдельных точек одной и той же почвы различен, и микроорганизмы разных микрозон находятся далеко не в одинаковых условиях. В кислых почвах имеются микрозоны, где могут размножаться микроорганизмы, не переносящие низкого значения pH, а в щелочных почвах встречаются относительно кислые микрозоны.
Несмотря на разную кислото- и щелочеустойчивость, все группы микроорганизмов наиболее активно проявляют свою жизнедеятельность в нейтральной среде. Поэтому нейтрализация кислых и снижение значения pH щелочных почв приводит к активизации желательных для агрономической практики процессов.
На
деятельность почвенных микроорганизмов
большое влияние оказывает
Основная
масса почвенных
Работами Н.Н. Худякова и его учеников было показано, что микроорганизмы активно поглощаются частицами почвы. Можно полагать, что в основе адсорбции почвами микроорганизмов лежит взаимодействие положительно заряженных частиц почвы с отрицательно заряженными клетками микробов.
В крупных почвенных агрегатах находится значительно больше микроорганизмов, чем в мелких. Д. Г. Звягинцев объясняет это не только величиной агрегатов, но и большим содержанием в них органических веществ, что обусловливает размножение микроорганизмов.
Способность почв адсорбировать микроорганизмы не остается постоянной, она зависит от влажности почвы, ее температуры, pH, дисперсности и других факторов. Поскольку эти факторы меняются в течение года, то изменяется и адсорбция.
В почвенном растворе имеются питательные для микроорганизмов вещества, что способствует размножению микробов не только на поверхности твердых частиц, но и в водной фазе почвы. На распределение микроорганизмов в твердой и водной фазах почвы значительно влияют растительные остатки, обогащающие почвенный раствор органическими соединениями. На растительной массе происходит также обильное размножение микробов.
На
характер сообщества микроорганизмов
почвы большое влияние
Существуют
синтрофные взаимоотношения микроорганизмов.
Под этим термином понимают явление, когда
два вида микроорганизмов или более растут
на среде, недоступной каждому виду в отдельности.
Г.А. Заварзин объясняет это обменом факторами
или субстратами роста, а иногда удалением
одним микроорганизмом какого-либо компонента
токсических для другого микроба соединений.
1.5.1 Методы оценки влияния факторов на дыхание микроорганизмов [14]
В анализе почв может быть использован практически любой из методов, который применяется в аналитической химии. Имеются две большие группы аналитических методов - классические химические и инструментальные.
В основе классических химических методов лежат химические реакции трех типов: кислотно-основные, окислительно-восстановительные и комплексообразования. Иногда они сопровождаются изменением агрегатного состояния компонентов (осаждение осадков или выделение газов). Химические методы делятся на гравиметрические и титриметрические. Эти аналитические методы называют классическими, так как они применяются в аналитической химии уже несколько столетий. Классические методы постепенно уступают место инструментальным. В таблице 2 приведены обобщенные данные, характеризующие преимущества и недостатки химических и инструментальных методов количественного анализа.
Таблица 2 – Основные преимущества и недостатки классических химических и инструментальных методов
Особенности методов | Классические химические методы | Инструментальные методы |
Преимущества | Не требуют сложною дорогостоящего Оборудования. Как правило, характеризуются высокой точностью и воспроизводимостью при выполнении некоторых видов анализов | Как правило, высокая чувствительность и скорость выполнения анализа (в том числе возможность анализа твердых почвенных проб без предварительного их разложения), возможность одновременного определения нескольких показателей. Возможность работы в автоматическом режиме без присутствия оператора |
Недостатки | Низкам скорость вы пол пения анализов, включая предварительную подготовку проб к анализу. Методы определения целого ряда веществ и элементов либо не разработаны, либо не могут использоваться в химическом анализе почв из-за несоответствия чувствительности метода и уровней содержания в почве определяемых компонентов | Сложное и дорогостоящее оборудование и расходные материалы, необходимость наличия квалифицированного обслуживающего персонала, более низкая воспроизводимость результатов |
Основная область применения гравиметрических методов в химическом анализе почв - определение общего содержания некоторых элементов (Si, С органических соединений), влажности, потери при прокаливании и зольности; область применения титриметрических методов - определение показателен кислотно-основных и ионообменных свойств почвы, состава водных вытяжек. Классические методы часто применяют для оценки правильности определений, сделанных инструментальными методами.