Шпаргалка по "Микробиологии"

 

 

  Флуорохромирование спор по Дунаеву. Мазок фиксируют над пламенем горелки. Оболочку споры разрыхляют действием 1 % раствора хлористо-водородной кислоты в течение 2-3 минут при подогревании до отхождения паров. Промывают водой. Окрашивают феноловым аурамином (аурамин, разведенный в 5% растворе фенола 1:1000) в течение 10 минут с трехкратным нагреванием до появления паров. Краску сливают. С целью обесцвечивания вегетативной клетки препарат обрабатывают 2%-ным раствором серной кислоты в течение 5 секунд. Интенсивно промывают водой. Дополнительно докрашивают раствором родамина “6 Ж” (1:1000) в течение 5 минут. Промывают водой и высушивают на воздухе. В люминесцентном микроскопе споры светятся золотисто-зеленым свечением, вегетативные части — оранжевые.

Люминесцентная микроскопия осуществляется с помощью специальных микроскопов. Люминесценция — это свечение вещества или объекта в момент облучения его ультрафиолетовыми лучами. Для иммерсионной микроскопии используют специальное нефлуоресцирующее масло.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

25. Капсула у микробов, капсулообразующие  микробы. Окраска мазков.

      Тело у всех микробов снаружи покрыто рыхлым слизистым слоем. У некоторых же микроорганизмов этот слой развивается очень сильно и тогда он называется капсулой. Наличие капсулы является важным диагностическим признаком при идентификации и дифференциация возбудителей (Бацилюс антрацис, Клостридиум перфрингенс, Стрептококкус пневмоние и др.). Патогенные микробы образуют капсулу в инфицированном организме. Она является фактором вирулентности и защищает микробную клетку от фагоцитоза и бактерицидного действия сыворотки крови. Капсульное вещество состоит из мукополисахаридов и пептидов, оно плохо воспринимает краску и быстро раскрашивается при промывании водой. Поэтому для приготовления мазка с целью обнаружения капсулы выполняют следующие правила: мазок готовят из свежего патматериала (из крови, из паренхиматозных органов),  так как капсула быстро лизируется, фиксируют мазок химическим способом; для окраски применяют метахроматические краски, то есть обладающие разноцветностью и окрашивающие субстанции разной плотности в разные цвета, причем клетка микроба окрашивается в один цвет, капсула - в другой; промывать водой мазок следует слабо и кратковременно. Предложено несколько методов окраски мазка с целью выявления капсулы у микроорганизмов.

      Метод  Ольта.   Мазок окрашивают через фильтровальную бумажку свежеприготовленным 2% водным раствором сафранина при подогревании до появления паров 2—3 минуты. Промывают водой и быстро высушивают фильтровальной бумагой. Микрокартина: капсулы — бледно-желтые, бактерии — коричневые.

      Метод Михина. Мазок окрашивают через фильтровальную бумажку 2—3 минуты старым раствором метиленового синего (Леффлера) при подогревании до паров. Промывают водой и быстро высушивают. Микрокартина: капсулы — бледно-розовые, бактерии — темно-синие.

    Метод   Романовского-Гимза.   Классический   способ: фабричную краску Романовского-Гимза разводят водой 1:10. Препарат кладут в чашку Петри на стеклянные палочки мазком вниз. Разведенную краску наливают в чашку до ее полного контакта с мазком и красят 10—15 минут. Промывают водой и высушивают. Микрокартина: капсулы — розовые, бактерии — темно-синие.

   Ускоренный способ: неразведенную краску Романовского-Гимза наносят на мазок, выдерживают 30 секунд, промывают водой и  высушивают. Микрокартина: капсулы — розовые, бактерии — темно-синие.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

26. Источники и виды инфекции (экзогенная, эндогенная, смешанная, секундарная,

      реинфекция, суперинфекция, рецидив).

     ). По происхождению

     а) эндогенные или аутоинфекция (условнопатогенные). Условно-патогенные микроорганизмы  обнаруживаются как в окружающей среде, так и в составе нормальной микрофлоры, для здоровых животных они безвредны, но могут вызывать эндогенные инфекции у животных с ослабленной иммунной системой, с иммунодефицитами. Разновидностью эндогенных инфекций являются аутоинфекции, возникающие в результате распространения из одного очага в другой.

      б) экзогенные (попадают из вне).

 

      В зависимости  от причин и условий проявления могут быть.

Реинфекция -  инфекции возникают при повторном проникновении того же возбудителя, недавно переболевшего и выздоровевшего.

Рецидив – инфекция возникающая за счет активации сохранившегося в организме возбудителя недавно перенесенной инфекции обострение хронического процесса.

Суперинфекция (сверхинфекция) – при проникновении в организм пораженных животных новых, дополнительных порций тогоже возбудителя в условиях активно развивающегося инф.процесса, т.е. до выздоровления.

Секундарная (вторичная) возникает на фоне развивающейся моноинфекции в результате проникновения в организм микробов другого вида (но это не смешанная инфекция при которой различные виды возб. проникают в организм одновременно все).

 

     Основные источники инфекции. Первичные – больные животные и их выделения  (фекалии, моча, слюна, истечения из носа, глаз, половых путей), - трупы,  - сырье и продукты от больных (молоко, масло,продукты убоя - кожа, шерсть). Путь выделения зависит от характера болезни, локализации возбудителя:   кишечник – с фекалиями, вымени – с молоком, легких – с мокротой.

     Вторичные источники – почва, корма, предметы ухода, вода.  Переносчики - насекомые, клещи, грызуны, (в 1 г фекалий клеща около  11 млрд риккетсий).

     В организме зараженных животных микробы распространяются кровью, лимфой, по нервным путям или остаются на месте (столбняк, фурункулы, очаговые инфекции).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

27.  Генетика и изменчивость  у микробов. Виды изменчивости (диссоциация,

     мутация, трансформация, трансдукция, конъюгация). L-форма микроба.

      Генетика микроорганизмов  – это наука о наследственности  и изменчивости м.о.

      Наследственность  – свойства м.о. воспроизводить  свои свойства в потомстве, ее  материальная основа – ДНК  и плазмиды.

      Под влиянием различных  агентов (физических, химических, биологических) у микробов наблюдается изменение  формы и величины.

       Изменчивость: - фенотипическая – возникает под влиянием среды и не влечет изменений в генотипе, поэтому не наследуется. Контролируется и ограничивается генотипом. Чаще всего это адаптивная изменчивость. Ее цель – обеспечение  выживаемости.

        Модификация  – биохимические различия между  м.о. одинаковыми по генотипу. Модификации  могут наблюдаться в норм.условиях (tоС – 42  возб.сиб.язвы теряет способность к спорообразованию).

       Диссоциация – когда у  одного и того же вида микроба возможен переход из S-форм в R-формы. Это явление  происходит под влиянием различных факторов.

Бактерии могут терять жгутики, капсулу.

       Генотипическая – связана с изменением генотипа. Изменчивость происходит в структуре ДНК. Передается по наследству.

       а). Мутации - внезапные, скачкообразные изменения наследственных  свойств (это качественные или  количественные изменения последовательности нуклеотидов в ДНК), т.е. свойств закрепленных в наследстве, вызывается действием химических или физических факторов, может затрагивать один или несколько генов. Могут возникать спонтанно в естественных условиях без вмешательства исследователя.  Могут появляться природно-ослабленные штаммы, которые используются при производстве вакцин.

        Б). Рекомбинация  – возникает в результате генетического  обмена между бактериями с  образованием рекомбинантов. От  донорской клетки часть генетического  материала передается реципиенту. В этом случае появляются рекомбинанты, обладающие свойствами обоих клеток. Рекомбинация – перегруппировка генов в результате взаимодействия клеток с появлением клеток с новыми свойствами.

        3 способа передачи  ДНК:

        1). Трансформация – изменение генома бактерии-реципиента в результате поглощения из среды свободноо фрагмента ДНК клетки донора.

        2). Трансдукция- передача ДНК от клетки-донора  клетке0реципиенту при участии  бактериофагов.

              Абортивная трансдукция – перенос фагом участка ДНК клетки-донора в клетку-реципиент, которая не включается в ее геном, поэтому проявление нового признака не наблюдается.

               Конъюгация (спаривание) – передача  генетического материала донорской  клеткой клетке-реципиенту при непосредственном контакте.

 

 

 

 

 

 

28. Иммунитет. Виды иммунитета.

Английский врач Э. Дженнер (1749—1823) - заметил, что человеческой оспы чаще всего не заболевают доярки. После заражения и переболевания они становятся невосприимчивыми к заражению. 1796 г. - привил 8-летнему мальчику сначала коровью оспу, а спустя 1,5 мес оспу человека, и мальчик не заболел. Вакцина -от лат. vacca – корова.

Луи Пастер сформулировал основной принцип защиты от возбудителя любой инфекционной болезни - организм после встречи с ослабленным возбудителем становится невосприимчивым   (иммунным) к вирулентным микробам того же вида. Изготовил вакцины - сибирская язва, бешенство, рожа свиней и др.

В 1883 г. И. Мечников открыл фагоцитоз и ввел понятие «клеточный иммунитет».

Иммунитет - состояние невосприимчивости организма к воздействию патогенных микробов, их токсинов и других чужеродных веществ биологической природы, поддержание генетического постоянства организма. Главное значение иммунитета – распознавание «своего» и «чужого».

Иммунная система организма - система органов и клеток, осуществляющая реагирование против чужеродных субстанций.

3 вида взаимодействия макроорганизма  и микроорганизма:

1). Восприимчивость макроорганизма  к микроорганизму  – инфекция.

2). Невосприимчивость   ………………… - иммунитет.

3). Сверхчувствительность ……………… - аллергия и анафилоксия.

 

Виды иммунитета.

1. Врожденный (видовой) – свойственен животным определенного вида (лошади не болеют ящуром, КРС — сапом, собаки — чумой свиней). Механизм - отсутствие в клетках организма рецепторов и субстратов, необходимых для адгезии и размножения возбудителя, наличие веществ, блокирующих размножение патогенных микробов.
2. Приобретенный – приобретается каждым индивидуально. Особенность – специфичность.

А). Естественно приобретенный - активный и пассивный. Активный - после естественного переболевания животного. Пассивный иммунитет —  материнские антитела. Через плаценту (трансплацентарный), с молозивом (колостральный, или молозивный), с яйцом  (трансовариальный).

Б). Искусственно приобретенный - активный и пассивный. Активный (поствакцинальный) - введение  вакцин. Пассивный иммунитет  -  введение в организм иммунной сыворотки, содержащей специфические антитела против определенного возбудителя болезни(не превышает 15 дней).

Стерильный иммунитет - организм освобождается от возбудителя, сохраняя при этом состояние невосприимчивости.

Нестерильный иммунитет - иммунитет при котором в организме находится возбудитель болезни и антитела.

В зависимости от механизмов защиты организма различают гуморальный и клеточный иммунитет. Гуморальный иммунитет – обеспечивается  специфическими антителами, клеточный иммунитет — за счет иммунокомпетентных клеток (Т-лимфоцитов).

 

29. Центральные и периферические  органы иммунной системы. Клетки иммунной

      системы и их  роль в образовании иммунитета. Схема иммуногенеза.

Центральные органы иммунной системы – костный мозг, тимус, фабрициева сумка.

Периферические органы иммунной системы – селезенка, лимфоузлы, кровь, пееровы бляшки (кишечник).

Клетки иммунной системы. Различают два основных класса лимфоцитов: В-лимфоциты (предшественники антителообразующих клеток), и Т-, или тимус-зависимые, лимфоциты. И нулевые клетки,  не несущие отличительных маркеров Т- или В-лимфоцитов.

Функции регуляторных клеток осуществляют в основном Т-лимфоциты и макрофаги. Эффекторные - цитотоксические Т-лимфоциты, В-лимфоциты, макрофаги, натуральные киллеры и К-киллеры.

В-лимфоциты (от лат. bursa — сумка). Предшественник - стволовая клетка превращается в В-лимфоциты которые мигрируют в лимфатические узлы и селезенку, где и выполняют свои специфические функции - синтез различных классов иммуноглобулинов: IgG, IgM, IgA, IgD, IgE.

В-лимфоциты крупнее Т-лимфоцитов (соответственно 8 и 5 мкм). Под электронным микроскопом поверхность В-лимфоцитов покрыта многочисленными ворсинками и имеются складки; поверхность Т-лимфоцитов гладкая.

Т-лимфоциты. Т-лимфоциты, как и В-клетки, образуются из стволовых клеток кроветворной ткани. Предшественники Т-лимфоцитов поступают в тимус, дифференцируются и выходят уже в виде клеток с различными функциями, несущих на себе характерные маркеры.

Существует несколько различных субпопуляций Т-лимфоцитов с различными биологическими свойствами.

Т-х е л п е р ы (Th) - стимулируют В-лимфоциты к пролиферации и дифференцировке в антителообразующие клетки (плазматические клетки).

Т-к и л л е р ы (Т-эффекторы, цитотоксические Т-клетки) - распознают и лизируют клетки, на поверхности которых имеются чужеродные для данного организма антигены — такие, как чужеродные антигены гистосовместимости, опухолевые антигены, вирусспецифические антигены на зараженных вирусом клетках.