Разработка методик качественного и количественного анализа действующих веществ экстракта плодов аронии черноплодной

Методика определения. Около 3,0 г (точная навеска) измельченного сырья, просеянного сквозь сито с диаметром отверстия 1 мм, помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл, заливали 100 мл 40% спирта и кипятили с обратным холодильником на водяной бане в течение 30 минут. Экстракцию проводили повторно для более полного истощения сырья. Извлечение охлаждали до комнатной температуры и процеживали в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводили до метки водой (раствор А).

1. 10 мл раствора А помещали в колбу для титрования вместимостью 500 мл, прибавляли 250 мл воды, 10 мл раствора индигосульфокислоты и титровали перманганатом калия (0,02 моль/л) до  золотисто желтого окрашивания при постоянном перемешивании.

Параллельно проводили контрольный опыт (определяли индиго число). Брали 10 мл индигосульфокислоты, прибавляли 250 мл воды и титровали калия перманганатом (0,02 моль/л) до золотисто желтого окрашивания при постоянном перемешивании.

1 мл раствора калия перманганата (0,02 моль/л) соответствует 0,004157г окисляемых веществ в пересчете на танин.

Содержание суммы полифенолов в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляли по формуле:

х = , где

V – объем экстракта, взятый для титрования, в миллилитрах;

V1 - объем раствора калия перманганата (0,02 моль/л), пошедший

на титрование извлечения, в миллилитрах;

V2 - объем раствора калия перманганата (0,02 моль/л), израсходованное на титрование в контрольном опыте, в миллилитрах;

V3 - общий объем извлечения, в миллилитрах;

К - 0,004157 - количество окисляемых веществ, соответствующее 1 мл раствора калия перманганата (0,02 моль/л) в пересчете на танин, в граммах;

m - масса навески сырья, в граммах;

W – потеря в массе при высушивании сырья, в %.

1. 10 мл раствора А помещали в колбу вместимостью 100 мл, добавляли 2 мл 1% раствора желатина, выпавший осадок центрифугировали и отфильтровывали. 10 мл фильтрата помещали в колбу для титрования вместимостью 500 мл, прибавляли 250 мл воды, 10 мл индигосульфокислоты и титровали при постоянном перемешивании раствором калия перманганата (0,02 моль/л) до золотисто-желтого окрашивания.

Содержание суммы полифенолов после осаждения дубильных веществ в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляли по формуле аналогично как в определении 1.

Содержание дубильных веществ в сырье (X) рассчитывали по разнице между данными определения 1 и 2.

Количественное содержание дубильных веществ в плодах аронии  черноплодной варьировалось в пределах от 3,62% до 4,07%.

 

Определение антоцианов

Использовали прямой спектрофотометрический метод в видимой области. Метод заключается в непосредственном измерении оптической плотности, что стало возможным благодаря наличию сопряженных двойных связей в молекулах антоцианов. Исследование проводили, опираясь на методику количественного определения антоцианов в плодах черники обыкновенной [12].

Содержание суммы антоцианов (в %) в плодах аронии черноплодной в пересчете на цианидин-3-О-глюкозид и абсолютно сухое сырье (Х) вычисляют по формуле:

, где

А – оптическая плотность испытуемого раствора;

m – масса сырья, в граммах;

100 – удельный показатель  поглощения цианидин-3- О - глюкозида;

W – потеря в массе при высушивании, в %.

Количественное содержание антоцианов колебалось в пределах от 6,4% до 11,62%.

Таблица сводных результатов количественного определения (табл.2)

Таблица 2. Количественный анализ экстракта

 

Исследуемые вещества	Содержание в экстракте
Сумма флавоноидов	5,20 - 5,80%.
Дубильные вещества	3,62 - 4,07%.
Антоцианы	6,4 - 11,62%

 

3. Фракционирование органическими растворителями

Схема фракционирования представлена следующим образом:

 

Методика: 100 мл экстракта помещали в колбу, добавляли 50мл органического растворителя и экстрагировали в течении 10 минут. Затем помещали в делительную воронку до расслоения жидкости на фазы. Отдельно сливали фазу органического растворителя и экстракт. Процедуру повторяли до обесцвечивания растворителя.

В дальнейшем планируется детальное изучение полученных фракций, с целью установления более точного химического состава и определения его фармакологических свойств.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ВЫВОДЫ

1. Проведен анализ литературных данных.
2. В ходе экспериментальной работы был получен водной-спиртовой экстракт плодов аронии черноплодной методом мацерации с использованием лабораторного реактора. 
3. В плодах аронии с помощью известными методик установлено наличие фенольных соединений, фенолкарбоновых кислот, дубильных веществ, флавоноидов и антоцианов. Спектрофотометрическими и титриметрическими методами проведён количественный анализ экстракта
4. С помощью органических растворителей получены фракции водно-спиртового экстракта плодов аронии черноплодной, которые планируется в дальнейшем изучить и установить химический состав.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ЛИТЕРАТУРА

1. Муравьёва, Д.А. Фармакогнозия / Д.А. Муравьёва, И.А. Самылина, Г.П. Яковлев. - М.: Медицина, 2002. - 656 с.
2. Технология лекарственных форм. Учебник в 2-х томах. Том 2 / Р.В. Бобылев, Г.П. Грядунова, Л.А. Иванова и др.; под ред. Л.А. Ивановой. – М.: Медицина, 1991. – 544 с.
3. Методы фармакогностического анализа лекарственного растительного сырья. В 2-х ч. Ч. II. Химический анализ: учебное пособие / Е.Н.Сальникова, Г.И.Калинкина, Н.В.Исайкина и др./ - Томск: СибГМУ, 2008. – 55с.
4. Муравьева Д. А. Фармакогнозия / Д.А.Муравьева, И.А.Самылина, Г.П.Яковлев.-Москва: Медицина,2002.-462с.
5. Википедия [Электронный ресурс]: виртуальная энциклопедия / Арония черноплодная. – Электрон. дан. – Режим доступа: http://ru.wikipedia.org/wiki/арония. – Загл. с экр.
6. Государственная фармакопея СССР. Вып.1. Общие методы анализа / МЗ СССР.-11-е изд., доп.- М: Медицина,1987.- 336 с.
7. Государственная фармакопея СССР. Вып.2. Общие методы анализа.  Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР.-11-е изд., доп.- М: Медицина,1989.- 400 с.
8. Химик. Сайт о химии [Электронный ресурс] / Антоцианы. – Электрон. дан. – Режим доступа:  http://www.xumuk.ru/encyklopedia/337.html . – Загл. с экр.
9. Качество. Потребительские обзоры [Электронный ресурс] / Черноплодная рябина: полезные свойства. – Электрон. дан. – Режим доступа: http://www.kachestvo.ru/interesno/chernoplodnaja-rjabina-poleznye-svojjstva.html. – Загл. с экр.