Шпаргалка по "Ветеринарии"

Пробу фекалий весом 3 – 5 г помещают в стакан, заливают небольшим  количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50-100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или марлю в один спой в сухой, чистый стакан. Взвесь отстаивают 40-60 мин., затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микроскопирования.

Этот метод в отечественной  лабораторной практике может применяться  для диагностики аскаридоза, стронгилятозов и стронгилоидоза свиней, неоаскаридоза, стронгилятозов стронгилоидозов, мониезиоза,. тизанизиоза, жвачных, параскаридоза, стронгилятозов кишечника лошадей

Плотность насыщенного раствора поваренной соли невысокая - 1,18-1,20. Тогда  как удельный вес яиц аскариса равен 1,10-1,14 : а у неоплодотворенных яиц - 1,26, а трихоцефалюса - 1,16-1,22. Поэтому насыщенный раствор поваренной соли способен флотировать только масть яиц аскарид и трихоцефалюсов, по этой причине диагностическая эффективность данной методики невысокая. Кроме того, раствор на предметном стекле быстро кристаллизуется.

Метод Дарлинга

Дает лучшие результаты, но более сложен, так как требует двойного центрифугирования. В первый раз частицу фекалий размешивают в простой воде. Жидкость фильтруют через марлю или сито, сливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 3—5 мин. После этого жидкость с поверхности сливают до осадка, а осадок размешивают с раствором глицерина, разбавленного пополам насыщенным раствором поваренной соли, и снова центрифугируют. При втором центрифугировании яйца всплывают на поверхность жидкости. Проволочной петлей с поверхности берут 1—2 капли жидкости и исследуют под микроскопом.

Метод И.А. Щербовича выполняют по такой же методике, как и Дарлинга, но в качествефлотационной жидкости используют насыщенные растворы натрия гипосульфита или магния сульфата . Поскольку плотность указанных растворов выше, чем плотность жидкости Дарлинга,метод Щербовича используют для диагностики гельминтозов, яйца возбудителей которых имеют больший удельный вес (метастронгилез свиней, трихоцефалез, макраканторинхоз и др.).

Практика 3. Культивирование стронгилят жвачных по методу А.М. Петрова и В.Г. Гагарина состоит в том, что в бактериологические чашки или в стаканчики кладут по 10 г свежих фекалий животных, увлажняют и помещают в термостат при температуре 27-30°С на 7-10 дней. Ежедневно фекалии перемешивают (с целью аэрации) и при необходимости увлажняют. После указанного срока пробы фекалий помещают в аппарат Бермана и из них выделяют личинок стронгилят. Помещают личинок на предметное стекло и микроскопируют с целью дифференциальной диагностики. 
Для лучшей аэрации фекалий разработана методика культивирования личинок стронгилят в фекалиях с добавлением в них прокаленных древесных опилок. Соотношение фекалий к опилкам составляет 3:1-5:1. Остальной режим культивирования личинок стронгилят сохраняется таким же, как описано выше.

Определение личинок до рода проводится по П.А.Полякову. 
Культивирование личинок стронгилят лошадей по П.А. Величкину. В стакан емкостью 100 мл помещают 50 г свежих фекалий лошадей и ставят их в термостат при температуре 25-27°С. Стаканы сверху обвязывают чистым бинтом, марлей или плотной бумагой, в которой делают небольшое отверстие для аэрации. Срок культивирования личинок 6-7 дней. При культивировании личинокпри комнатной температуре (20-22°С) они достигают третьей стадии через 9-10 дней. При температуре ниже 8°С развитие их не происходит. При необходимости фекалии увлажняют и периодически перемешивают. 
Для выделения личинок стронгилят лошадей П.А. Величкин рекомендует после окончания срокакультивирования пробу фекалий завернуть в марлю и поместить в стакан емкостью 200 мл с теплой (35-36°С) водой. Для предупреждения соприкосновения пробы фекалий с дном стакана в него помещают предметное стекло или металлическую сетку. Спустя 2-3 ч пробу удаляют, верхний слой жидкости сливают, а осадок помещают в бактериологические чашки и микроскопируют.

Для лучшей дифференциации личинок их необходимо обездвижить, для чего к осадку в чашку добавляют 8-10 капель раствора Люголя. Личинки стронгилят лошадей покрыты гофрированным чехлом, имеют длинный хвостовой конец. Личинки свободноживущих нематод гофрированного чехлика лишены и у них короткие хвостовые концы. Родовую принадлежность стронгилят лошадей определяют по внутренней структуре личинок. Определение родов и видов личинок стронгилят лошадей проводят по А.М.Петрову и В.Н.Гагарину. 
Культивирование личинок стронгилоидесов по Т.И. Поповой проводят в обычных стеклянных стаканчиках, в которые помещают 50-100 г фекалий и выдерживают в течение 1-2 дней при температуре 20-23°С. Вышедшие из яиц личинки стронгилоидесов мигрируют на стенку стакана, образуя серо-белые скопления, которые могут сохраняться до 1 мес. Личинки стронгилоидесов из этих колоний можно использовать для экспериментального заражения животных.

Метод Бермана  — Орлова. Для исследования фекалий используют аппарат, состоящий из средней воронки (пластмассовой, полистероловой или стеклянной), резиновой трубки (10—15 см длиной), соединенной верхним концом с воронкой, зажима, укрепленного на нижнем конце резиновой трубки, металлического сита или куска марли и штатива (для одного или нескольких аппаратов). Смонтированный аппарат заполняют теплой водой (35—38°). 10—15 г свежих фекалий кладут на сито или завертывают в марлю и осторожно опускают в воронку. Фекалии от овец выдерживают в аппарате 2—4 часа, а от телят — не менее 6—7 часов. Затем зажим на трубке ослабляют, а вытекающую жидкость собирают в пробирку и центрифугируют в течение 2—3 минут. После этот верхний слой жидкости сливают быстрым опрокидыванием пробирки, а оставшуюся на дне жидкость переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом. 
 
Применение зажимов на резиновую трубку в аппарате Бермана связано с неудобствами, поэтому во многих ветеринарных лабораториях нижние концы резиновых трубок непосредственно соединяют с маленькими пробирками. Перед исследованием осадка под микроскопом жидкость не центрифугируют. 
Фекалии жвачных можно исследовать на легочные нематодозы (особенно в экспедиционных условиях) упрощенным методом гельминтоларвоскопии (без использования воронок). Для этой цели применяют небольшие полуконические стаканчики (50 мл). Пробы фекалий помещают на ситечки или завертывают в марлю и опускают в стаканчики с водой. Через несколько часов фекалии удаляют, жидкость из стаканчика отсасывают или сливают, а осадок микроскопируют. 
Метод Вайда. Несколько шариков фекалий от мелких жвачных помещают в бактериологическую чашку или на часовое стекло и овлажняют их небольшим количеством теплой воды. Через 10—20 минут фекалии удаляют, а оставшуюся жидкость исследуют под малым увеличением микроскопа. Эффективность этоТо метода значительно ниже в сравнении с предыдущим методом, поэтому его реже применяют для диагностики диктиокаулеза и про-тостронгилидозов овец. 
Упрощенные модификации метода Бермана (по И. А. Щербовичу и В. И. Шнльникову). Фекалии (5—10 г) овец завертывают в кусочек марли и раскладывают или подвешивают в конусовидные стаканчики (50 мл) с теплой водой (37—38 °С) на 6 ч, фекалии крупного рогатого скота — на 12 ч. Затем марлю с содержимым удаляют, а воду осторожно (!) сливают до осадка. Осадок можно отцентрифугировать или перенести полностью (желательно в объеме 0,5— 1 мл) на предметное стекло для микроскопирования

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Практика 4.Полное гельминтологическое вскрытие по К.И.Скрябину – наиболее надежныйметод, позволяющий производить полный количественный и качественный учет всехгельминтов, которыми инвазировано животное. Данный метод заключается вследующем: после снятия с трупа кожи тщательно осматривают подкожную клетчатку,затем вскрываю грудную и брюшную полости и извлекают все внутренние органы.        

Органы каждой системы  – пищеварительной, дыхательной, кровеносной, мочеполовойи др. – препарируют и исследуют отдельно. Все трубчатые органы вскрывают по ихдлине, содержимое помещают в таз, ведро или банку (в зависимости от объемаоргана); со слизистых оболочек делают соскоб, а стенку вскрытого органа(иногда) просматривают под компрессориумом.     

Паренхиматозные органы –  печень, легкие, поджелудочную железу, почки и др. –помещают в отдельную посуду и превращают в детрит (фарш), разрывая руками илиразрезая их на мелкие кусочки ножом и ножницами. Детрит, соскобы, содержимоеорганов отмывают водой или физиологическим раствором, пользуясь методомпоследовательных смывов. Полученные материала (осадки) изучают небольшимипорциями сначала в черных, затем в белых кюветах или в чашках Петри на черном ибелом фоне. Крупные гельминты отбирают визуально, а мелкие – при помощи лупы с8-10-кратным увеличением. Собирают гельминты только кисточками или препаровальнымииглами, но не пинцетом и не пальцами.

Полное гельминтологическое  исследование отдельных органов проводят в том случае,если необходимо иметь точные данные о местонахождении того или иного гельминта.Например, при фасциолезе исследуют только печень, при диктиокаулезе – легкие,при дрепанидотениозе – тонкий отдел кишечника и т.д. Этот метод болеепрактичен, прост и достаточно точен.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Практика 5. Неполное гельминтологическое вскрытие – это упрощенное гельминтологическое вскрытие, в процессе которого извлекают из органов и тканей лишь отдельные, резко выделяющиеся по размерам гельминты. Такое вскрытие имеет большое значение как для диагностики гельминтозов, так для получения музейного материала.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Практика 6. Я. Д. Никольский предложил метод отмывания яиц с поверхности фекалий и осаждения, их в воде. Для этого 5—10 г фекалий овец кладут в стаканчик с водой, энергично встряхивают их дважды с интервалом в 5 минут, если взяты свежие фекалии, и в 15—20 минут, если взяты подсохшие, жидкость выливают в пробирку и отстаивают в течение двух часов. Затем жидкость постепенно отсасывают до осадка при помощи резиновой груши со вставленной в нее стеклянной трубкой. Оставшийся осадок помещают на большое предметное стекло и исследуют под микроскопом.

Пробы фекалий для гельминтоовоскопических  исследований берут из прямой кишки (но не с пола или земли) от каждого  животного в отдельности. Чтобы  выявить число зараженных в стаде животных, обследования проводят в период наибольшего подъема инвазии (июнь, июль). Для определения эффективности дегельминтизации пробы берут через 7—10 дней после дачи антгельминтика.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Практика 7. Мазок перефирической крови. Высушенные мазки крови можно раньше фиксировать, а затем красить либо производить фиксацию одновременно с покраской. Для фиксации применяют: а) метиловый спирт химически чистый, 3—5 минут; б) метиловый спирт и ацетон в равных частях, 3—5 минут; в) смесь Никифорова (этиловый спирт ректификат и эфир поровну), 10—20 минут; г) 1% осмиевая кислота; д) абсолютный алкоголь, 20—30 минут.

1 способ окраски. Мазок высушивают на воздухе. Фиксируют в метиловом спирте. Стекло с мазком крови опускаем в 0,5%-ный раствор эозина по одной секунде четыре раза. Даем стечь краске и опускаем стекло в 0,5%-ный раствор азура также четыре раза по одной секунде. Затем также опускем четыре раза в 0,5%-ный раствор метиленового синего. Мазок промываем в дистиллированной воде, просушиваем фильтровальной бумагой.

2 способ по  романовскому-гимзе. Для окраски мазков крови по Романовскому-Гимза краску разводят дистиллированной водой обязательно нейтральной реакции из расчета 1—2 капли на 1 мл воды.

Краску надо разводить  непосредственно перед окрашиванием. От долгого стояния раствор краски портится. Разводят краску из расчета приблизительно 2,5—3 мл на мазок. Наливают в предназначенный для этого чистый цилиндр необходимое количество дистиллированной воды и пипеткой или капельницей добавляют в воду столько капель краски, сколько миллилитров воды взято, из расчета 1 капля на 1 мл. Если при проверке краски оказалось, что нужно взять 3 капли краски на 2 мл воды или 2 капли на 1 мл, то соответствующим образом высчитывают необходимое количество капель для данной краски. Разведенную краску хорошо смешивают и наливают на сухие фиксированные препараты Через 25—30 минут остатки краски сливают, смывают водой, лучше дистиллированной. Мазки ставят вертикально на фильтровальную бумагу для просушки.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Практика 8. Лабораторные исследования на трихомоноз включают:

2. Отбор и пересылка  материала для исследования.

2.1. Для исследования в  лабораторию направляют: слизь из влагалища или шейки матки от подозреваемого в заболевании животного;  соскобы со слизистой оболочки препуциального мешка, секрет придаточных половых желез,  сперму быка, выделения из половых органов; абортированный плод целиком  или сычуг с содержимым,  паренхиматозные органы плода и часть плаценты.

2.2. Перед отбором материала  для исследования моют наружные половые губы у коров,  область препуциального отверстия у быков тёплой водой и         

вытирают чистым полотенцем.

2.3. Вагинально-цервикальную  слизь берут в период течки.  За день до отбора материала рекомендуется вводить животным подкожно 1.5-2.0 куб.см 0.5%-ного водного раствора прозерина или 1%-ного раствора карбохолина.

2.4. При отборе материала  и  его  разведении  используют  водный раствор хлорида  натрия массовой концентрацией 8.5 г/куб.дм,  рН 7.0-7.2  (далее раствор хлорида натрия).

2.5. Вагинально-цервикальную  слизь берут полистироловыми пипетками.  Для этого к шприцу при помощи резиновой муфты присоединяют полистироловую пипетку, набирают 5 куб.см раствора хлорида натрия и через раскрытое зеркалом влагалище вводят его под давлением в  шейку  матки на глубину 3-4 см. Затем, не извлекая пипетки,  шприцем  насасывают раствор  хлорида натрия со слизью,  переносят в стерильную пробирку,  которую закрывают резиновой пробкой.

Вагинальную слизь можно  брать ложкой-катетером, которую вводят во  влагалище животного без зеркала.  При этом положение ложки должно быть боковым,  а ее стержня - горизонтальным. Ложкой делают соскобы из различных мест слизистой оболочки влагалища и через канал стержня переливают в пробирку.   Если соскоб густой консистенции, через канал стержня вводят 5 куб.см раствора хлорида натрия, затем насасывают, выливают в пробирку и закрывают пробкой.

2.6. От быков станций  (предприятий) по искусственному  осеменению животных  берут сперму и препуциальную слизь;  от быков,  используемых для естественного спаривания, - препуциальную слизь и секрет придаточных половых желез.

Сперму у быков получают при помощи искусственной вагины и переливают в стерильные флаконы и пробирки. Секрет придаточных половых желез у быков получают путем их массажа через прямую кишку в стерильные пробирки или флаконы.

Слизь из различных мест слизистой оболочки препуция берут  с  помощью  прибора ПСБ-1.  Смонтированный прибор вводят в полость препуция до ее  середины. Затем выдвинутым стержнем с наконечником и впитывающим тампоном  делают 3-4 возвратно-поступательных движения от свода препуциальной полости до трубки прибора. Стержень втягивают в трубку, осторожно  извлекают, опускают в пробирку с 3 куб.см раствора хлорида натрия, тампон отжимают и извлекают, пробирку закрывают резиновой пробкой.