Злокачественного отек

Лечение. Необходимо предпринимать хирургическую обработку ран, использовать антибиотики и симптоматические средства.

Профилактика и меры борьбы. Профилактика злокачественного отека сводится в основном к антисептической обработке ран, строгому соблюдению асептики при хирургических вмешательствах и инъекциях различных средств. Важным является улучшение санитарного состояния ферм, родильных отделений, регулярная их дезинфекции [7].

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Собственные исследования

09.09.2012 года на родильном  отделении МТК-1 ОАО СХП «Вощажниково»  за ночь пало 8 голов новотельных  коров, с клиническими признаками  резкого угнетения, интоксикации, в  области тазобедренных группы  мышц плотный крепитирующий отек, безболезненный, холодный.

Был проведен отбор патологического материала- ухо животного , для исключения сибирской язвы и отправлено в Ростовскую межрайонную ВБЛ (Приложение №1).

Тем же днем получен отрицательный результат на сибирскую язву (Приложение №2), экспертиза №732 от  9.09.2012 года.

Специалистами ветеринарной производственной и государственной службы было проведено вскрытие павшего скота с последующим отбором патологического материала и отправки в Ростовскую межрайонную вет. бак. лабораторию для подтверждения диагноза «Злокачественный отек».

Для лабораторного исследования отобран патологический материал- части печени с желчным пузырем, сердце, легкого, почки , пораженный лимфоузел, отдел тонкого кишечника, пораженная мышца с участками пораженной и здоровой ткани.

 

Схема лабораторного исследования злокачественного отека.

При исследовании материала проводят микроскопию мазков, бактериологическое исследование, биопробу на лабораторных животных (морских свинках) .

1-й день: проведение первичной микроскопии мазков отпечатков, посев на питательные среды из патологического материала, проведение биопробы (заражение лабораторных животных суспензией из патологического материала).

2-3  день: оценка характеристики  роста бактерий на питательных  средах. Результаты проведения биопробы (при положительном результате  лабораторные животные  через 16-48 часов погибают). Проведение микроскопии  и посевов из трупов лабораторных  животных для выделения чистой  культуры.

4-5 день: оценка характеристики  роста бактерий, полученных из  трупа лабораторного животного, на питательных средах. Анализ  полученных результатов по микроскопическим, биологическим, морфологическим данным  и определение возбудителя болезни.

 

 

 

Этапы идентификации и типизации микроба.

Первый день исследований:

На первом этапе поступления патологического материала проводится первичная микроскопия мазков отпечатков. Первичная микроскопия  включает в себя приготовление мазков и препаратов для микрокопирования. В большинстве случаев результаты микроскопических исследований носит ориентировочный характер. Например, определяют отношение возбудителей к окраске.

Стерильно вырезаем кусочки органов и повреждённых мышц поверхностью среза несколько раз касаемся предметного стекла.

Приготовление фиксированных окрашенных препаратов включает следующие этапы: приготовление мазка, высушивание, фиксацию и окраску.

1. Приготовление мазка. На обезжиренное спиртом предметное стекло помещают маленькую каплю водопроводной воды и переносят в нее петлей небольшое количество исследуемого материала как для препарата «раздавленная капля». Полученную суспензию равномерно размазывают петлей на площади 1-2 см2 возможно более тонким слоем. Мазок должен быть настолько тонок, чтобы высыхал после приготовления.
2. Высушивание мазка. Лучше всего сушить готовый препарат при комнатной температуре на воздухе. Хорошо приготовленный тонкий мазок высыхает быстро. Если высушивание мазка замедлено, то препарат можно слегка нагреть в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, держа стекло мазком вверх. Эту операцию следует проводить осторожно, не перегревая мазка, иначе клетки микроорганизмов деформируются.   
3. Фиксация препарата преследует несколько целей: убить микроорганизмы, то есть сделать безопасным дальнейшее обращение с ними; обеспечить лучшее прилипание клеток к стеклу; сделать мазок более восприимчивым к окраске, так как мертвые клетки окрашиваются лучше, чем живые. Самым распространенным способом фиксации является термическая обработка. Для этого препарат трижды проводят через наиболее горячую часть пламени горелки, держа предметное стекло мазком вверх. Не следует перегревать мазок, так как при этом происходят грубые изменения клеточных структур, а иногда и внешнего вида клеток, например их сморщивание. Для исследования тонкого строения клетки прибегают к фиксации различными химическими веществами.Фиксирующую жидкость наливают на мазок, либо препарат на определенное время погружают в стакан с фиксатором.
4. Окраска. Окраску мазков отпечатков проводят по Граму и по Муромцеву.

Технология проведения окраски по Граму:

На фиксированный мазок накладываем кусочек фильтровальной бумаги, на который наливаем избыток генцианового фиолетового карболового и выдерживаем при комнатной температуре (+18 -25°С) в течение 1 - 2 мин.

Снимаем  бумагу, сливаем краску и, не промывая мазок водой, наливаем на мазок 0,7 - 1,0 мл раствора Люголя и выдерживаем мазок при комнатной температуре в течение 1 - 2 мин.

Сливаем раствор Люголя и, не промывая, погружаем стекло с мазком в стакан со спиртом этиловым 96°, покачивая стекло до тех пор, пока с мазка не перестанут отходить струйки краски (не более 30 сек).

Извлекаем стекло с мазком из спирта, ополаскиваем мазок дистиллированной водой, заливаем поверхность мазка раствором фуксина Пфейфера и выдерживаем мазок при комнатной температуре в течение 30 - 60 сек.

Сливаем краску со стекла, промываем мазок дистиллированной водой, высушиваем стекло с помощью фильтровальной бумаги или естественной сушкой в наклонном положении при комнатной температуре. Мазок-отпечаток готов к микрокопированию.

При проведении микрокопирования можно произвести первичную идентификацию микроба, при этом отмечаем форму микробов, их расположение, наличие вегетативных форм, спор (Споры окраску не воспринимают), капсул. Описание морфологии отдельных возбудителей дано в таблице №1.

Таблица №1

Культурально - морфологические свойства основных возбудителей злокачественного отека.

 

Название возбудителя	Окраска по Граму	Морфология микробов	Форма спор и их расположение	подвижность
C. septicum	+	Изолированные палочки с закругленными концами, в мазках –отпечатках. С серозных оболочек- нити.	Овальные, расположены сутерминально или центрально	+
C. novyi (C. oedematiens)	+	Крупные полиморфные палочки с закругленными или обрубленными концами, расположены одиночно, редко попарно или цепочками из 3-4 члеников	Овальные, расположены центрально или субтерминально	+
C. perfringens	+	Толстые палочки со слегка закруглёнными концами, расположены одиночно.	Овальные, расположены субтерминально или центрально. Вмазках из свежего трупа и молодых культур спор не обнаруживают.	-
C. sordellii	+	Полиморфные палочки с закругленными концами, распложены чаще цепочками по 2-4 членика.	Овальные, расположены субтерминально или центрально.	+
C. histoliticum	+	Стройные тонкие палочки с закруглёнными концами, расположены одиночно, попарно, редко цепочками.	Овальные, расположены субтерминально («игольное ушко»).

 

 

Микрокартина: видим грамположительные изолированные палочки с закругленными концами, а также отдельные цепочки из трех-пяти бактерий, споры овальной формы, располагаются центрально.

        Готовим питательную среду Китта-Тароци для посева:

Для приготовления среды Китта-Тароци стерильные пробирки заполняем на 1,0-1,5 см кусочками печени  и заливаем приготовленным мясо-пептонным бульоном с глюкозой и агаром. В 1 дм  мясо-пептонного,  печеночного бульона вносим 10 г глюкозы и 1,5 г агара, который при нагревании постепенно расплавляем (высота слоя бульона в обычных пробирках 12-13 см, в высоких 15-18 см) и стерилизуем 20 мин при температуре (121±1) °С. Требуемую величину рН проверяем до и после стерилизации(рН среды после стерилизации должно быть 7,1±0,1).

Техника проведения посева: пробирку с питательной средой берем в левую руку, правой берем бактериологическую петлю обжигаем над пламенем горелки, остужаем слегка прикасаясь к поверхности патологического материала, переносим бактерицидную петлю в пробирку с питательной средой и опускаем до дна.

Пробирку с заселённой средой ставим в аэростат.

Выращивание в анаэростатах - вакуумных металлических камерах, снабженных манометром. Анаэростатом может служить обычный вакуумный стеклянный эксикатор. Из анаэростата откачиваем воздух, а затем, как правило, заполняем его газовой смесью, состоящей из азота (90 - 80 %) и углекислоты (10 - 20 %), до давления порядка 500 мм рт. ст. Избыточное давление исключает возможность диффузии кислорода воздуха.

 

Проведение биопробы. Одновременно с посевом на питательные среды и первичной микроскопиеей проводим заражение морских свинок. Для этого кусочки пораженных тканей и другой патологический материал измельчаем, тщательно растираем в стерильной ступке с песком и готовим равномерную взвесь, добавляя небольшое количество МПБ. Полученную взвесь вводим подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам массой 250-400 г в дозе 0,5-1,0 мл.

Второй день исследований: ведем учет культуральных свойств- наблюдаем интенсивное помутнение с обильным газообразованием.

Вскрытие трупа лабораторного животного: зараженная морская свинка пала через 20 часов после заражения. Патологическая картина: в подкожной клетчаткев месте введения ощущаются пузырьки газа, кожа легко отделяется от мышц, мышцы светло розового цвета, кишечник вздут, в грудной и брюшной  полости наличие желтого транссудата.

 

Биологические свойства возбудителей злокачественного отека.  

Таблица №2.

Название возбудителя	Восприимчивые лабораторные животные	Сроки гибели, ч	Патологическая картина
C. septicum	Морские свинки, Кролики, Белые мыши	14-28	Кожа легко отделяется от мышц. Мышцы и подкожная клетчатка светло-красного или розового цвета, в подкожной клетчатке большое количество пузырьков газа. Кишечник вздут, наполнен разжиженными массами, содержащими пузырьки газа, сосуды инъецированы. В грудной полости и сердечной сорочке обнаруживается большое количество транссудата.
C. novyi (C.oedematiens)	Морские свинки, Кролики, Белые мыши	12-36	На месте инъекции наблюдается желатинозный, студенистый отек от  желтоватого до слабо-розового цвета. Мышцы бледные.
C. perfringens Типы А и D	Морские свинки, Кролики, Белые мыши	36-48	Кожа на месте инъекции часто отслаивается от мускулатуры, образуя мешок. Мышцы имеют вид варенного мяса, серовато-грязного цвета (более выражено при заражении типом А) кишечник вздут.
C. perfringens ТипыBи C	Морские свинки, Кролики, Белые мыши	36-48	Кожа на месте инъекции легко отделяется. Мускулатура сухая, красного цвета различных оттенков. Кишечник вздут , в брюшной полости транссудат соломенного цвета.

                                                              16

Из трупа морской свинки делаем посевы из мест введения материала, крови, сердца и печени в  среду Китта-Тароци и на ранее приготовленный сахарный кровяной агар по Цейсслеру.

Готовим сахарный кровяной агар по Цейсслеру :к обычному мясопептонному агару добавляем 2% глюкозы (рН среды=7,2—7,4) и стерилизуем в автоклаве при t° 110° 30 мин. К 100 мл расплавленного, охлажденного до 45°, агара добавляем 10—15 мл стерильно взятой  бараньей крови, тщательно перемешивают и разливаем в чашки Петри. Перед использованием чашку Петри  выдерживаем сутки при комнатной температуре.

Техника посева: в левую руку берем чашку Петри в правую бактериологическую петлю, обжигаем на горелке, охлаждаем касаемся патологического материала. Большим пальцем левой руки приподнимаем крышку чашки Петри в образовавшуюся щель проводим бактериологическую петлю и круговыми движениями проводим посев. Засеянную чашку Петри не переворачивая (дном вниз), помещаем в анаэростат. Так же проводим и пересев из пробирки со средой Китта-Тароци, засеянной с поступившего пат.материала на 2 чашки с агаромЦейслера для выделения чистой культуры.

 Мазки отпечатки готовим  из тех же органов, а так  же с диафрагмальной поверхности  печени. Проводим микрокопирование - наблюдаются так же грамположительные  палочки с закруглёнными концами, овальные споры расположены центрально. В препарате-отпечатке из серозных  покровов печени  обнаруживаем  длинные нити.

День третий: оценка характеристики роста бактерий на питательных средах. Явно выраженного роста  колоний бактерий не наблюдается.

День четвертый: проводим анализ роста бактерий на агаре Цейсслера. Просмотр посевов проводим с помощью лупы. Наблюдается нежный бесцветный вуалеобразный налёт с микроскопическими изрезанными краями и с нежными отростками колонии окружены зоной гемолиза.

Проводим микрокопирование выращенной культуры: окраску проводим как описывалось выше по Грамму. Так же наблюдаем грамположительные палочки с закруглёнными концами.

Характеристика питательных сред для культивирования.

Среда Китта-Тароци. Жидкая питательная среда для культивирования анаэробных микроорганизмов, состоящая из мясопептонного бульона, обогащенного экстрактивными продуктами печени животных и содержащего кусочки вываренной печени в качестве поглотителя свободного кислорода.

Для приготовления среды Китта-Тароци стерильные пробирки заполняют на 1,0-1,5 см кусочками печени, мяса или рыбы и заливают приготовленным мясо-пептоннымбульоном с глюкозой и агаром. В 1 дм мясо-пептонного, рыбо-пептонного или печеночного бульона вносят 10 г глюкозы и 1,5 г агара, который при нагревании постепенно расплавляют (высота слоя бульона в обычных пробирках 12-13 см, в высоких 15-18 см) и стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С. Требуемую величину рН проверяют до и после стерилизации. рН среды после стерилизации должно быть (7,1±0,1). 
 При приготовлении среды впрок вместо добавления к ней агара на поверхность среды перед стерилизацией в пробирки наслаивают 0,5-1,0 см вазелинового масла. 
      При применении среды Кита-Тароци без добавления в нее агара или вазелинового масла на поверхность среды после окончания посева наслаивают голодный агар или парафиновую смесь высотой 1,0-1,5 см. При посевах в свежеприготовленную среду Китт-Тароцци (не более 3 сут с момента приготовления) добавлять агар, вазелиновое масло или наслаивать на ее поверхность голый агар не обязательно. 
 Сахарный кровяной агар по Цейсслеру. Цейсслера среда (J.Zeissler) — сахарный агар с кровью для выращивания и дифференциации анаэробов — возбудителей раневых инфекций. Готовится следующим образом: к обычному мясопептонному агару добавляют 2% глюкозы (рН среды=7,2—7,4) и стерилизуют в автоклаве при t° 110° 30 мин. К 100 мл расплавленного, охлажденного до 45°, агара добавляют 10—15 мл стерильно взятой человеческой, лошадиной или бараньей крови, тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Перед использованием чашки следует выдерживать сутки при комнатной температуре. В основу определения вида анаэробов положена форма роста их на среде Цейсслера в анаэробных условиях.