Полисахариды и методы установления их структуры

Корневища. Отвар - при диарее, а также для полосканий при  стоматитах, ангинах, гингивитах. Свежие применяются в гомеопатии. В народной медицине отвар, настойка - при диарее, дизентерии, внутренних кровотечениях. Наружно - при ангинах, гингивитах, стоматитах, при кровоточащих ранах, язвах, ожогах, мокнущих экземах, после деструкции зубодесневых карманов, при пародонтозе. Отвар - при язвенном колите, заболеваниях легких; настой - при болезнях почек; мазь - при ранах и панарициях, трещинах кожи и губ. Сок - при болезнях печени. Порошок - присыпка на раны, при ожогах, для лечения мокнущих ран, язв, при наружных кровотечениях; им можно чистить зубы для предупреждения воспаления десен и уничтожения дурного запаха изо рта. Входит в состав желудочных и противодиарейных сборов, сборов - при болезнях почек, мочевого пузыря; при микозе. В странах Европы, кроме того, применяется при желтухе, заболеваниях печени, подагре, ревматизме, малярии; наружно - при геморрое, гематомах и белях.

Надземная часть. Антигельминтное. Настой - при геморроидальных кровотечениях и кровохарканье, при белях, как диуретическое; наружно - при гингивите и ларингите.

Листья применяют при  лихорадке.

Лекарственные формы, способ применения и дозы. Отвар корневищ лапчатки прямостоячей (Decoctum rhizona Potentillae): 1 столовую ложку сырья заливают 200 мл воды комнатной температуры, кипятят на водяной бане в течение 10-15 мин, охлаждают, затем процеживают. Принимают по 1 столовой ложке 3-4 раза в день за 1-1,5 ч до еды. При геморрое используют в виде примочек и ванн.

Корневища лапчатки прямостоячей выпускаются в виде брикетов. Два  брикета заливают 200 мл кипятка, кипятят  на водяной бане 30 мин, затем процеживают. Применяют так же, как отвар.

Применение в  других областях. Корневища лапчатки используют как пряность для рыбных консервов и в ликероводочной промышленности для приготовления ароматных настоек. Окрашивают ткани в красный, черный и коричневый цвета. Пригодны для дубления кож. Листья окрашивают ткани в палевый цвет. Кормовое для крупного рогатого скота, коз, овец, свиней.

2.2. Свойства исследованного растительного сырья

Химический состав и фармакологические  свойства семян льна обыкновенного  и корневищ лапчатки прямостоячей представлены в таблице 1.

                                                                                           

                                                                                          Таблица 1.                          

Свойства исследованного сырья.

 

Название растения	Химический состав	Фармакологические свойства
Лен обыкновенный	Семена содержат до 10% слизи, 30-40% жирного масла и 20-30% белка; цианогенные гликозиды (линамарин, линустатин,неолину-статин);лигнаны(секоизола рициразинол);фенолкислоты (сиреневая,кумаровая), макро- и микроэлементы.	Семена льна, залитые водой, спустя 2-3 ч разбухают и выделяют слизь. Принятая внутрь, она оказывает обвала- кивающее действие, покрывает слизистой  пленкой пищевые массы и слизистую оболочку пищевари- тельного тракта. Семена льна набухают в кишечнике,увели-чиваются в объеме, что усиливает пери-стальтику. Экспериментами на белых крысах с аллоксановым диабетом установлено, что ежедневное пероральное введение 10% отвара льняного семени по 0,1 мл 3 раза в день повышает секретообразование в b-клетках поджелудочной железы, увеличивает площадь островковой ткани и образование инсулина, что ведет к снижению гликемии. Льняное масло обладает послабляющим и желчегонным свойством. Как  и другие растительные жиры, оно  содержит минимальное количество холестерина и большое количество ненасыщенных жирных кислот. Линетол оказывает влияние, аналогичное льняному маслу: снижает уровень холестерина в крови и тормозит развитие липоидоза сосудистой стенки, действует синергично с тироидином, благоприятно влияет на свертывающую и противосвертывающую системы крови у больных коронарным атеросклерозом, активирует фибринолиз и снижает коагулирующие свойства крови. Однако введение животным избытка линетола провоцирует или усиливает у них явления Е-авитаминоза.
Лапчатка прямостоячая	В корневищах обнаружены дубильные  вещества (до 35%), гликозид торментиллин, эфир торментол, хинная и эллаговая кислоты, флобафен, воск, смолы, камедь, крахмал, эфирное масло, сахара. Наибольшее содержание дубильных веществ в корневищах обнаружено в период зацветания, в надземной части - в период полного цветения. В надземной части растения найдена аскорбиновая кислота, которой особенно много в период полного цветения растения.	Корневища растения проявляют  вяжущее, бактерицидное, противовоспалительное  и кровоостанавливающее действие. Местный  противовоспалительный эффект связан с дубильными веществами, способными создавать биологическую пленку, защищающую ткани от химических, бактериальных  и механических воздействий, сопровождающих воспаление. Вместе с тем понижается проницаемость капилляров и сужаются сосуды. Общее противовоспалительное действие связано с эффектом флавоноидов. Кроме того, растение обладает отхаркивающим и желчегонным действием.

 

 

3. Материалы и методы исследования

 

1. Сухое растительное сырье
2. Вода дистиллированная
3. Серная кислота ГОСТ 4204-77, ρ ~ 1,83
4. Ксилоза
5. Антрон
6. Этиловый спирт

 

Кроме того было использовано следующее оборудование:

 

-электрическая плитка  ЭПШ1-0,8/220 ГОСТ 14919-83 220 В 0,3/0,5/0,8 кВт;

-аналитические весы ANDEK-600 НМах 600 gd=0,01;

-бюкс

-воронка

-пипетка 2 мл, ГОСТ 20292-74 2 кл;

-груша

-мерный цилиндр ГОСТ 4770-74 2 кл, 50 мл, 100 мл;

-мерная колба 200 мл;

-термометр;

-центрифуга ТУ5-375-4260-70 Опн-344,2 N=4135 220 В 50 Гц 300В*А

-фен

 

 

2.4. Методика количественного определения суммарного содержания полисахаридов в семенах льна в пересчете на ксилозу.

   Около 1 г (точная навеска) сырья помещают в коническую плоскодонную колбу вместимостью 100 мл с притертой пробкой, приливают 70 мл 1% раствора натрия хлорида в воде очищенной нагревают содержимое колбы на кипящей водяной бане в течение 1 ч. После охлаждения извлечение фильтруют в мерную колбу вместимостью 200 мл. Извлечение повторяют в тех же условиях еще раз и доводят объем объединенного фильтрата до метки водой очищенной (раствор А).

2 мл раствора А переносят в центрифужную пробирку, приливают 6 мл 95%этилового спирта, перемешивают и нагревают на водяной бане в течение 10 мин. После охлаждения содержимое пробирки центрифугируют в течение 10 мин со скоростью вращения 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок суспендируют с 5 мл 95% этанола и повторно центрифугируют в тех же условиях. Надосадочную жидкость сливают, осадок продувают в пробирке горячим воздухом до удаления следов этанола. К осадку приливают 4 мл реактива, нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Содержимое пробирки после охлаждения переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл 95% спиртом этиловым и доводят до метки тем же растворителем (раствор Б).

 Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре при длине волны 430 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 4 мл реактива, выдержанные в тех же условиях, что и опытная смесь.

Реактив готовят следующим образом: 100 мг антрона (МРТУ 6-09-1214-64), помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл и доводят до метки кислотой

серной концентрированной (ГОСТ 4204-77, ρ ~ 1,83). Срок годности раствора 5 ч.

Построение градуировочного графика. Около 100 мг ксилозы или глюкозы (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде очищенной и доводят до метки тем же растворителем (раствор А). В пробирки вносят 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 мл раствора А и доводят до объема 0,6 мл водой очищенной, приливают 4 мл реактива, нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин. После охлаждения содержимое пробирок переносят в мерные колбы вместимостью 25 мл 95% спиртом этиловым и доводят до метки тем же растворителем (раствор Б). Оптическую плотность растворов Б измеряют на спектрофотометре при длине волны 430 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь 4 мл реактива и 0,6 мл воды очищенной, выдержанную в тех же условиях, что и опытная смесь. Градуировочный график строили в системе координат концентрация ксилозы (мкг/мл) – оптическая плотность.

 

 

 

 

 

 

 

 

Глава 3. Обсуждение результатов

      Известно, что водорастворимые растительные полисахариды (ВРПС) трудно выделить из растительных образцов водной экстракцией. Считается, что при этом неизвлеченными остаются около 35%масс. от всех полисахаридов, присутствующих в растении. Авторами[15,16] предложено использовать для извлечения ВРПС 1% раствор  хлорида натрия, что дает более полное извлечение этой группы биологически активных веществ. Описанная методика экстрактивного выделения ВРПС была применена авторами при разработке методики количественного определения суммарного содержания полисахаридов в семенах льна.

В данной работе испытывался солевой раствор для экстракционного извлечения полисахаридов из корней лекарственного растения лапчатки прямостоячей, а также применена методика определения суммарного содержания полисахаридов в данном сырье в   пересчете на ксилозу по методике, разработанной для семян льна.

Поэтому параллельно проводились  опыты по экстракционному извлечению полисахаридов как из семян льна, используемого в качестве контрольного материала  экстракции и методики количественного определения суммарного содержания полисахаридов, так и из образцов исследуемого растения. Все опыты проводились в трех повторностях, результаты вычислялись среднеарифметически из них.

Особой тщательности требовали  опыты по определению построения зависимости оптической плотности растворов ксилозы от концентрации в присутствии антрона. Антрон применяется в растворе концентрированной серной кислоты. Для построения зависимости готовили растворы в 5-ти пробирках с объемом и заданной концентрацией по ксилозе, табл.3.

                                                                                                          

                                                                                                   

 

                                                                                                 Таблица 3.

Концентрации растворов  ксилозы для построения зависимости  оптической плотности от концентрации

 

Объем V, концентрация C	1	2	3	4	5
V, мл	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6
C, мкг/мл	2	3	4	5	6

 

 Была определена оптическая плотность на спектрофотометре при длине волны 430 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. в пересчете на ксилозу.

Зависимость оптической плотности  от концентрации растворов ксилозы  представлена на рис.3.

 

 

Рис.3. Зависимость оптической плотности.

Следующим этапом работы было экстрактивное выделение полисахаридов  солевым раствором из двух растительных образцов – семян льна и корневищ лапчатки прямостоячей. Растворенные полисахариды в солевом экстрагенте осаждали этанолом. Студнеобразные осаждения центрифугировали, затем декантацией освобождались от солевого раствора, промывали осадок этанолом и высушивали феном осадок. Путем введения раствора серной кислоты с антроном и прогревом смеси в течение 10 минут при 100 С проводили полный гидролиз полисахаридов. Описанный ход работы применен при изучении уровня накопления ПС в семенах льна и в корневище лапчатки прямостоячей. По градуировочному графику, рис.3, в соответствии D_л и D_лп определены концентрации для расчета содержания ПС по следующей формуле:

 

Определение оптической плотности, концентрации ксилозы по графику  и соответствующий расчет по формуле  для лапчатки прямостоячей установило содержание ПС равным 3,86%

 

Значения оптической плотности растворов полисахаридов семян льна и лапчатки прямостоячей и содержание полисахаридов в пересчете на ксилозу.