Шпаргалка по "Микробиологии"

Пропионово-кислое брожение. Пропионово-кислое брожение осуществляется бактериями рода Propionibacterium, которые способны сбраживать молочную кислоту, образовавшуюся в результате брожения, вызванного молочнокислыми бактериями. Конечные продукты пропионово-кислого брожения — пропионовая и уксусная кислоты, С02 и вода. Пропионово-кислые бактерии используют для получения витамина В 12, который они образуют в значительных количествах.

Маслянокислое брожение. Маслянокислое брожение обусловливают некоторые бактерии из рода Clostridium. Типичный представитель С1. butyricum. Маслянокислое брожение начинается с разложения сахаров в пировиноградную кислоту. Конечные продукты из пировиноградной кислоты образуются в результате цепи реакций, катализируемых несколькими ферментными системами.

Маслянокислое брожение часто является причиной прогоркания растительных масел и жиров животного происхождения, а также семян сои и подсолнечника.

Уксуснокислое окисление. Уксуснокислое окисление — микробиологический процесс, при котором этиловый спирт окисляется до уксусной кислоты под влиянием уксуснокислых бактерий (25 видов уксусных бактерий объединены в род Acetobacter). Уксуснокислые бактерии используют для производства пищевого уксуса из вина и спирта в промышленных условиях. Уксуснокислое брожение имеет важное значение при силосовании кормов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

37. Бактериологический метод диагностики, сущность и назначение метода.

 Бактериологический метод исследовиния (метод чистых культур) предназначен для выделения патогенных микроорганизмов на питательных средах с последующим изучением их физиологических особенностей с целью идентификации вида возбудителя при диагностике инфекционных болезней.

Микроорганизмы, выращенные на средах в лабораторных условиях, называются микробными культурами. Их получают посевом различных материалов от животных или человека на среды и культивированием в оптимальных температурных и атмосферных условиях.

      Чистой культурой называют рост на питательной среде микробов одного вида. В присылаемом на исследование материале редко встречается только один вид микро- бов, так как всякий материал легко загрязняется посторонними микроорганизмами из окружающей среды. Из свежего трупного материала (из крови сердца, из трубчатой кости, из селезенки), как правило, выделяется чистая культура возбудителя, от кото-рого пало животное.

      Чистая культура необходима для изучения морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по совокупности которых устанавливается видовая принадлежность исследуемого микроорганизма.

Под колонией в микробиологии понимают потомство или популяцию одной мик-робной клетки при размножении ее  на плотной питательной среде.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

38. Методы получения чистых культур  аэробов и анаэробов.

  Для выделения чистой культуры аэробов из материалов, содержащих смешаннную микрофлору, предложено много различных методов.

Метод механического разъединения микроорганизмов.           Цель метода - получить изолированную колонию на поверхности или в глубине плотной питательной среды. Этот метод существует в нескольких вариантах.

1. Путем дробного посева по Дригальскому. Берут 3—4 чашки Петри с застывшим и подсушенным МПА. Каплю материала наносят на агар в центре первой чашки. Стерильным шпателем материал равномерно распределяют по гсей чашке, втирая его в поверхность питательной среды. Затем, не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят во вторую и третью чашки, втирая в поверхность агара оставшийся материал. 24-48 часов  - 37 °С. Переворачивают вверх дном, чтобы образующийся конденсат не смывал культуру. Отобрав колонию с характерными для искомого возбудителя свойствами, из нее делают отвивку в пробирки с МПБ и МПА для получения чистой культуры одного вида микроба.

2. Дробный посев в расплавленный МПА по методу Коха.  В пробирку с  расплав- ленным и охлажденным до 45-50 оС агаром вносят каплю исследуемого материала. Затем пастеровской пипеткой материал переносят во вторую, и таким же образом в третью пробирку. Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри. После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном. Через сутки колонии микроорганизмов вырастают как на поверхности агара, так и в глубине его. Изолированные колонии изучают, а затем из искомой колонии делают отвивку в стерильные МПА и МПБ, где через сутки вырастают микробы одного вида, то есть чистая культура.

Некоторые микробы обладают высокой чувствительностью к воздействию определенных факторов внешней среды. Индивидуальная устойчивость микробов к тому или иному фактору может быть использована для получения чистой культуры путем уничтожения сопутствующей микрофлоры:

Физический (термический) способ используют для выделения споровых микробов (бацилл и клостридий), устойчивых к действию высокой температуры. Исследуемый материал перед посевом прогревают при температуре 80 оС в течение 20 минут. При этом неспоровые микробы погибают, а споровые останутся живыми и при посеве на питательные среды дадут рост.

Химический способ основан на устойчивости микробов рода микобактериум к действию растворов кислот и щелочей.

     Посевной материал обрабатывают 6-18% раствором серной кислоты в течение 30 минут, отмывают стерильным физ-раствором путем центрифугирования. Осадок высевают на среду, содержащую бактериостатическую краску, которая задерживает рост посторонней микрофлоры и не препятствует росту микобактерий. В этом случае чистую культуру получают благодаря устойчивости микобактерий действию кислот и к бактериостатической краске.

     Биологический способ. Патматериалом заражают чувствительное лабораторное животное, вскрывают и делают посевы на пит.среды.

 

Анаэробы  - большая группа микр., которые растут и размножаются при отсутст- вии кислорода воздуха. Дышат и получают энергию для своей жизнедеятельности они за счет расщепления органических веществ по принципу дегидрирования.

Для выращивания анаэробов необходимо создать определенные условия. сущность которых состоит в удалении молекулярного кислорода из окружающей среды, использование специальных питательных сред и внесение большого количества посевного материала в среду. Для выделения и изучения культур анаэробов используют следующие среды: среду Китт-Тароцци, сахарный (глюкозный) агар, сахарно-кровяной агар Цейсслера, молоко с кусочками печени, ПЖА с углеводами и индикатором ВР, мозговую среду. Жидкие среды наливают в пробирки высоким столбиком.

С целью выделения чистой культуры анаэробных микроорганизмов получают изолированные колонии в глубине застывшего сахарного агара (МПА с 1 % глюкозы). При этом посев делают по Вейону или по Перетцу. Пробирки с сахарным МПА, расплавляют и охлаждают до 45 °С. Пастеровской пипеткой посевной материал вносят в первую пробирку, размешивают и переносят паст.пипеткой во вторую, а затем из второй в третью. Содержимое каждой пробирки переливают в трубки Вейона или в чашки Петри со стеклянной пластинкой по Перетцу. Благоприятные для анаэробов условия создаются в глубине застывшего агара в узких трубках Вейона или под стеклянной пластинкой в чашках по Перетцу. С целью отвивки агар выталкивают из трубки стеклянной палочкой в стерильную чашку, скальпелем вырезают изолированную колонию и переносят в среду Китт-Тароцци. Также делают отнивку из глубинной колонии в чашке по Перетцу, предварительно сняв стеклянную пластинку стерильным пинцетом.

При исследовании анаэробов изолированную колонию чаще всего получают на поверхности среды, при этом внешний вид колонии используется как диагностичес- кий признак при определении вида микроба. С этой целью материал высевают дробно шпателем на поверхность сахарно-кровяного агара Цейсслера. Анаэробные условия при культивировании создают физическим или химическим способом.

Физический способ. Специальные приборы – апаэростаты.

Химический способ - основан па поглащении свободного кислорода воздуха в результате химической реакции. В качестве реактивов используют гидросульфит натрия и бикарбонат натрия в равных количествах из расчета 30 г общего веса па 1 л емкости прибора

Биологический способ. В чашку Петри наливают сахарно-кровяной агар. После застывания агара питательную среду делят на две половники. Одну из них засевают культурой анаэробов, другую - культурой аэробов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

39. Простые, специальные и дифференциально-диагностические  среды, элективные 

     среды (примеры).

 Среды общего назначения (простые, обычные) — мясо-пептопный бульон (МПБ), мясо-пснтонный агар (МПА), мясо пептонная желатина (МПЖ) и молоко. Эти среды используют- ся для выращивания многих неприхотливых микрооргаиизмов. Кроме, того, они служат осно вой для приготовления специальных сред.

Специальные (обогащенные) среды применяют для выращивания микробов, кото- рые не размножаются на средах общего назначения. Для выращивания микобактерий используют среду Петраньяни, для анаэробов - среду Китт-Тароцци; и другие.

Дифференциально-диагностические среды (цветные, углеводные) - для изучения сахаролитических свойств микробов (среды Гисса, среды Эндо, Левина, Плоскирева и другие).

Элективные среды или среды избирательного роста. В них хорошо растут опре- деленные виды микробов, плохо или совсем не растут другие виды. Они содержат оп- тимальный для исследуемого вида микроба питательный состав и бактериостатичес- кую добавку (анилиновые краски, желчные соли п др.), которая подавляет рост дру- гих микроорганизмов. Например, специальная среда Петраньяни для выращивания туберкулезных микобактернй содержит 2% раствор малахитового зеленого для по- давления роста сопутствующей микрофлоры.

     Приготовление  сред общего назначения (простых сред). Основой для приготовле -ния многих сред служит мясная вода (MB).

Мясная вода (MB). Свежую говядину или конину освобождают от костей, сухожилий, жира, фасции, измельчают или пропускают через мясорубку, заливают двойным по весу количеством водопроводной воды и оставляют на 16 -18 ч в прохладном месте для (холодное экстрагирование) или нагревают до 50 о С в течение 1 час (горячее экстрагирование). Затем мясо варят в течение 1 ч., фильтруют, доливают водопроводную воду до первоначального объема, разливают в колбы и стерилизуют при 1 атм 30—40 минут.

Мясо-пептонный бульон (МПБ).   MB + 1% пептона и 0,5% хлорида натрия. Пептон   (продукт неполного ферментативного расщепления белков), выпускается в виде легкорастворимого порошка, переносит высокие температуры при стерилизации среды. Нагревают до полного растворения пептона и соли, устанавливают рН 7,4-7,6 Варят 30 мин. на открытом огне или в автоклаве. Разливают по пробиркам (5 мл) и по колбам и стерилизуют при 1 атм 20 — 30 мин.

Мясо-пептонный агар (МПА). С целью уплотнения в среду добавляют агар-агар (по малайски желе) - продукт растительного происхождения, добываемый экстрагированием из морских водорослей. В жидкостях агар-агар расплавляется при температуре 100 оС, застывает при 42о С. Применение агаровых сред благодаря их способности сохранять плотность при температуре 37 °С  дало возможность выращивать микроорганизмы на плотных средах при оптимальной для них температуре.  МПБ (рН 7,4—7,6) + 2-3% агар-агара и варят до расплавлепия агара в автоклаве. Среду фильтруют в горячем виде  через  ватно-марлевый фильтр. Разливают в колбы или в пробирки, стерилизуют при 1 атм 20—30 минут.

Мясо-пептонная желатина (МП Ж).  МПБ + пищевой желатин 10% (в зимнее время) или 15% (летом). Расплавляют в кипящей водяной бане, охлаждают до 40-50С и устанавливают рН 7,0—7,2. Затем с целью осветлення среды вливают белок куриного яйца, предварительно взбитый   до пены (на 1 л среды 2 белка, взбитые в 50 мл дист.воды). Перемешивают и варят в кипящей водяной бане до полного свертывания белка и выпадения его в осадок. В горячем виде фильтруют до полной прозрачности, разливают в пробирки по 5-7 мл. Стерилизуют текучим паром дробно - три раза по 30 мин с интервалом в сутки.

     Молоко.

Специальные питательные среды используют для тех микробов, которые не растут на простых средах. Они содержат питательные вещества, необходимые для удовлет -ворения основных биохимических и энергетических потребностей того вида микроба, для культивирования которого они предназначены.

Сахарные, глицериновые, сывороточные, кровяные среды.      МПБ или МПА + соответствующий компонент, стерилизуют. При этом сахарные и глицериновые сре- ды стерилизуют дробно текучим паром. Сывороточные и кровяные среды не стерили- зуют, их готовят из стерильных компонентов в стерильных условиях.

Более сложные специальные среды готовят по специальной рецептуре на каждую среду. К числу таких сред относятся среда Китт-Тароцци, яичные среды Петраньяни, Гельберга, Левенщтейна и другие.

Среда Китт-Тароцци (мясо-пептонный-печеночный бульон с кусочками печени). Это специальная и элективная среда для анаэробов. Говяжья печень (кусочками по 10-15 г), + тройное количество МПБ и кипятят 30 мин. Бульон в горячем виде филь- труют через бумажный фильтр и устанавливаюг рН 7.6. Кусочки печени промывают на сите водой, нарезают на кубики по 1-1,5 г и раскладывают в пробирки по 4-5 ку- сочков. В пробирки наливают по 8-10 мл отфильтрованного бульона и наслаивают вазелиновое масло толщиной слоя 5—10 мм. Пробирки закрывают пробками, связы- вают в пакеты и стерилизуют при 0,5 атм 30 мин.

Сахарно-кровяной агар Цейсслера. МПА (содержащий 3% агар-агара), расплавля- ют в водяной бане, охлаждают до 45-50 °С и добавляют в колбу 2% глюкозы (10 мл 20% раствора глюкозы) и 15-20 мл свежевзятой стерильной дефиб-ринированной кро- ви лошади, барана или кр.рог.скота. Смесь осторожно перемешивают, не допуская образования пены, и разливают в стерильные чашки Петри. После застывания выдер- живают в термостате 4—6 ч для подсушивания. Среда используется для анаэробов.