Шпаргалка по "Микробиологии"

Среда Петраньяни. Для кислотоустойчивых микобактерий. В колбу с бусами наливают 150 мл молока, добавляют 6 г картофельной муки, 1 г пептона и одну мелко нарезанную картофелину величиной с куриное яйцо. Смесь нагревают в водяной бане и кипятят 10 мин до образования клейстера. Охлаждают до 50 °С и добавляют 4 куриных яйца и еще один желток, 12 мл химически чистого глицерина, 10 мл водного 2% раствора малахитовой зелени, перемешивают, фильтруют через два слоя марли и разливают в стерильные пробирки. Стерилизуют в наклонном положении в аппарате для свертыпания сывороток дробно — в первый день при 85 °С 2,5 часа и еще два дня при 75 оС по 30 мин.

Дифференциально-диагностические среды. Эта группа сред используется для дифференциации выделенных культур микробов по различию   ферментативных свойств (наличие у микробов сахаролитических ферментов, протеолптичесьнх ферментов и т. д.) Среди дифференциально-диагностических сред особое место занимают углеводные цветные среды. Па этих средах изучают способность микробов расщеплять углеводы и многоатомные спирты. С этой целью цветные среды должны содержать следующие обязательные компоненты:

а) питательную основу — МПБ или пентонную воду (ПВ) для жидких сред, МПА для плотных, пептонную воду с добавлением 0,2—0,3% агар-агара для полужидких;

б) дифференцирующий сахар — глюкоза, сахароза, лактоза и другие. В среду доба- вляют один сахар или несколько, в количестве до 1%.

в) индикатор — краска, меняющая цвет в зависимости от концентрации водородных ионов (рН). По изменению цвета индикатора в среде определяют расщеп- ление микробом сахара с образованием кислот.

г) с целью обнаружения газов при расщеплении сахара в жидкие среды помещают поплавок (газовичок), в полужидкие и в плотных средах это свойство определяют по скапливанию пузырьков в толще среды.

Среды Гисса. Состав: ПВ, углеводы: глюкоза, сахароза, лактоза, мальтоза, маннит (каждый в отдельности), при некоторых исследованиях используют дополнительно дульциг, сорбит, ксилозу, арабинозу, салицин и другие углеводы   и многотомные спирты: индикатор; кислый фуксин и т.д.

ПВ разливают в колбочки по 100 мл, добавляют в каждую колбочку 1 г одного из углеводов и 1 мл индикатора Андреде. Готовую среду разливают в стерильные про- бирки с поплавками, которые представляют собой трубочки с одним запаянным кон- цом. Поплавок помещают в пробирку запаянным концом кверху. Пробирки закрыва- ют пробками, упаковывают в пакеты, пишут название сахара и стерилизуют дробно текучим паром или при 0,5 атм 20 мин. Готовая среда имеет слабо желтый цвет.

Приготовление индикатора Андреде. В 100 мл дистиллированной воды растворяют 0,5 г порошка кислого фуксина и добавляют 16,4 мл IN раствора едкого натра. Нагре- вают в кипящей бане 20—30 мин, фильтруют. Хранят в темном месте.

Полужидкий агар с углеводами и индикатором ВР. Состав: пептонная вода с добавлением 0,2—0,3% агар-агара, углеводы: глюкоза, сахароза, лактоза, мальтоза, маннит (каждый в отдельности), индикатор водноголубой с розоловон кислотой (ВР). Эта среда выпускается биологической нромышленностью готовая в сухом виде. Перед употреблением ее готовят согласно указаниям на этикетках банок. Среда разливается в пробирки и имеет серо-розовый цвет. При расщеплении сахара цвет меняется в голубой, газ накапливается в толще среды.

Среда Эндо. Состав: питательный агар, сахар лактоза, индикатор основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Среда выпускается готовая в сухом виде. Ее разливают в чашки Петри. Цвет среды бледно-розовый. Лактозоположнте-льные микробы растут на этой среде в виде колоний от розового до темно-вишневого цвета.

Среда Левина. Состав: питательный агар, сахар лактоза, индикатор эозин н метиленовый синий. Среда выпускается готовая в сухом виде. Ее разливают в чашки Петри. Цвег среды коричнево-фиолетовый. Лактозоположительные микробы на этой среде образуют колонии от фиолетового цвета до черного.

Среда Плоскирева. Среда сложного состава, выпускается в сухом виде. Основные компоненты — питательный агар, лактоза, нейтральный красный,   бриллиантовый   зеленый, желчные соли н другие. Среду разливают в чашки Петри.

Среды Эндо, Левина, Плоскирева используют для дифференциации микробов кишечной группы.

В последние годы  для  исследования  биохимических свойств микробов стали использовать среды, содержащие 2—3 углевода.

Трех сахарный агар с мочевиной по Олькеницкому.   Состав: на 100 мл питательного агара берут 0,1 г глюкозы. 1 г лактозы, 1 г сахарозы, 1 г мочевины, 0,02 г соли Мора, 0,03 г гипосульфита и 0,4 мл 0,4% раствора фенолового красного.

Приготовление: предварительно растворяют соль Мора с гипосульфитом в одной пробирке с небольшим количеством воды, в другой — мочевину с углеводами. Все смешивают с агаром и фильтруют через марлю. Разливают в пробирки и стерилизуют текучим паром дробно. В горячем виде скашивают так, чтобы у дна пробирки оставался небольшой столбик. Среда бледно-розового цвета. Биохимические свойства микробов определяют по следующим показателям: пожелте-нпс (обесцвечивание) скошенной части среды указывает на расщепление лактозы и сахарозы; пожелтение столбика среды -расщепление глюкозы; расщепление мочевины определяют по восстановлению розового цвета столбика среды; почернение столбика среды свидетельствует об образовании сероводорода. Таким образом, использование этой среды позволяет изучить несколько биохимических свойств у испытуемой  культуры микроба.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

40. Изменения, наблюдаемые в простых питательных средах, возникающие при росте

      чистой культуры  микробов.

      На мясо-пептонном агаре (МПА) в бак. чашках Петри или на скошенном агаре в пробирках микробы вырастают в виде отдельных колоний, изучению которых придается большое значение.

      Чашки с посевами  просматривают невооруженным глазом  и через лупу, затем помещают  их на столик микроскопа вверх  дном и просматривают в проходящем  свете с объективом малого увеличения и суженной диафрагмой. Колонии характеризуют по величине, форме, профилю, цвету, оценивают консистенцию, поверхность колонии, структуру и характер края.

Величина колонии определяется ее диаметром. Различают колонии точечные (диаметр меньше 1 мм), мелкие (1-2 мм), средние (2—4 мм) и крупные (более 4 мм).

Форма колонии бывает круглая, овальная, в виде виноградного листа, перламутровой пуговицы, снежинки, звездочки.

Профиль колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды. Различают куполообразные колонии, плосковыпуклые (имеют плоский верх), конусообразные колонии (имеют в вертикальном разрезе форму треугольника), колонии с приподнятой серединой и валиком по периферии; колонии с вдавленным центром,  плоские колонии.

Цвет колонии определяется пигментом, который вырабатывает культура микроба. Большинство патогенных микробов пигмент не образуют, поэтому их колонии бесцветны или серо-мутпые. Пигментированные колонии имеют разные цвета -кремовый, желтый, золотистый, красный, зеленый, черный и др. Если пигмент водорастворимый, то окрашивается и среда.

Поверхность колонии изучают с помощью луны или под микроскопом при малом увеличении. Поверхность колонии может быть матовая или блестящая с глянцем, сухая или влажная, гладкая или шероховатая. Гладкие колнии обозначают буквой S (smooth), шероховатые буквой Г? (rough). Механизм формирования гладких и шероховатых форм колоний обусловлен различием процессов клеточного деления. В колониях S-форм микробные клетки располагаются, соприкасаясь своими боковыми поверхностями. В колониях R-форм  микробные клетки располагаются цепочками, которые, накладываясь друг на друга, обуславливают шероховатую поверхность и неровный край колонии. У одного и того же вида микроба возможен переход из S-форм в R-формы. Это явление называется диссоциацией и происходит под влиянием различных факторов.

Среди шероховатых форм колоний различают складчатые, радиально или концентрически исчерченные, бородавчатые.

Структуру колонии изучают при малом увеличении микроскопа. Различают структуру гомогенную, мелко- и грубозернистую, волокнистую в виде длинных густо переплетающихся нитей.

Контур края колонии определяют при малом увеличении микроскопа. Различают ровные края в виде четко выраженной линии и неровные. Среди неровных различают: фестончатый край,  состоящий из крупных зубцов правильной формы: волнистый край; зубчатый край; бархромчатый край, имеющий нежные ворсинки; кудрявый край в виде завитков.

Консистенцию колонии определяют прикосновением бактериологической петли в процессе отвивки части микробов из колонии. Различают влажные пастообразные, легко снимающиеся с питательной среды колонии; слизистые, тянущиеся за петлей; сухие колонии, рассыпающиеся от прикосновения петли.

   На скошенном агаре, кроме  того, отмечает характер роста и наличие пигмента.  Раличают рост скудный, умеренный, обильный, рост по штриху, сплошной, ползучий. Пигментация может быть разнообразного цвета, при этом различают водонерастворнмый пигмент, если окрашивается только микробная масса, и водорастворимый — если окрашивается не только микробная масса, но и столбик среды. Например, стафилококки растут на МПА в виде налета белого, лимонно-желтого или золотистого цвета, столбик среды не окрашен (пигмент водонерастворимый). Синегнойная палочка на МПА образует налет желто-зеленого цвета, при этом среда также окрашена в этот цвет (пигмент водорастворимый) .

Па жидких питательных средах (МПБ или на специальной жидкой среде) возможны следующие разновидности роста микроорганизмов: — равномерное помутнение (слабое, умеренное, сильное). Помутнение среды чаще всего обусловлено ростом подвижных микроорганизмов. Исключение составляют подвижные микробы с аэробным типом дыхания, которые растут па поверхности среды в виде пленки, в глубине среды пе погружаются и помутнения ее не вызывают, например, так растет сенная палочка. Помутнение может быть обусловлено и продуктами обмена. Например, стафилококки расщепляют белки до муцинов, которые и обусловливают помутнение среды.

     Образование осадка на дне пробирки. Характер осадка определяют встяхиванием среды. Осадок может быть слизистый, который при встряхивании поднимается в виде косички (характерен для роста пастерелл); зернистый осадок при встряхивании распадается на мелкие зерна (характерен для стрептококков); хлопьевидный осадок, легко разбивающийся при встряхивании (характерно для сибиреязвенного микроба);

пылевидный осадок, поднимающийся в виде облачка и быстро исчезающий (характерен для возбудителя рожи свиней); осадок, разбивающийся в равномерную муть (характерен для кишечной палочки).

- Пристеночный рост микробов в жидкой   питательной среде выражается в образовании пристеночного кольца на границе питательной среды, которое особенно отчетливо видно при наклоне пробирки.

- Поверхностный рост микробов  характеризуется появлением на поверхности среды пленки, что указывает на рост микробов аэробов. Пленка может быть нежная, плотная, влажная или сухая.

    

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

41. Серологический метод диагностики  инфекционных заболеваний и его  значение.

      Сущность серологической  диагностики и методы.

42. Характеристика компонентов, сущность, техника постановки и учет  РСК.

      Контроли реакции.

43. Сущность, техника постановки, учет  и контроли РА.

44. Сущность, техника постановки, учет  и контроли РП.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

45. Метод флуорохромирования и метод флуоресцирующих антител (МФА) при

      диагностике бактериальных  инфекционных болезней. Сущность  и техника.

      Метод иммунофлюоресценции - основан на использовании флюоресцирующей сыворотки. Антитела, находящиеся в этой сыворотке, окрашены специальным флюорохромом — флюоресцеином. На мазок из бактериальной культуры или препарат-отпечаток после фиксации метиловым спиртом в течение 5—10 минут наносят 2—3 капли специфической флюоресцирующей сыворотки в рабочем разведении (готовят соответственно наставлению). Мазок во влажной камере (чашка Петри с увлажненным ватным тампоном) на 30 минут помещают в термостат (37°). Затем препарат тщательно промывают в нескольких сменах дистиллированной воды, высушивают на воздухе, наносят на него нефлюоресцирующее иммерсионное масло и исследуют (объектив Х90) в люминесцентном микроскопе. При наличии в мазке возбудителя антитела сыворотки соединяются с бактериями и последние начинают светиться ярко-зеленым цветом; в некоторых случаях вокруг них образуется только светящийся ободок. Результаты исследования записывают следующим образом: сияющее зеленовато-желтоватое свечение — (++++)» яркое желтовато-зеленоватое — (+++)» умеренное желтовато-зеленоватое — (++)> слабое, слегка зеленоватое — (+)> микробные клетки в виде сероватых теней — (—). Положительным считается свечение типичных для возбудителя форм, оцениваемое не менее, чем в 2 плюса при условии, что в контрольных препаратах, окрашенных неспецифической (другого вида животного) сывороткой, свечение отсутствует.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

46. Роль возбудителя, макроорганизма  и условий внешней среды в  возникновении и