Патоморфологические изменения кота при листериозе

Водный фактор также играет значительную роль в возникновении эпизоотических болезней. Загрязнение поверхностных водоёмов, а вместе с этим контаминация патогенной микрофлорой рек, озёр, прудов может происходить различными способами. Сильные ливни, смывающие грязь, навоз с поверхности почвы, несут их в открытые водоёмы, способствуя контаминации патогенными микробами.

Помещения, где находились больные животные, окружающие их предметы /перегородки, щиты, кормушки, решетки, остатки кормов и т.п./ могут оказаться инфицированными. В этом случае они могут служить одним из факторов передачи заразных болезней животным и человеку.

Возможным фактором передачи инфекции могут служить трупы животных, погибших от заразных болезней. Если учесть, что при гибели больных сельскохозяйственных и диких животных возможны случаи вскрытия трупов, снятие шкур, растаскивание зверями, птицами, то становится очевидным, что трупы могут представлять опасность при всех инфекциях, возбудитель которых обладает устойчивостью во внешней среде.

Таким образом, инфицированные трупы животных, экскременты, почва, водные источники, помещения, продукты и сырье от животных и другие элементы внешней среды с давних пор известны как места сохранения вирулентных микробов и как эпизоотологические и эпидемиологические факторы, привлекающие внимание эпизоотологов и эпидемиологов.

1.2.3. Вопросы диагностики  болезни

Лабораторная диагностика листериоза основывается, преимущественно, на бактериологических и серологических методах исследования.

Бактериологическое исследование состоит в микроскопии окрашенных по Граму мазков-отпечатков из пораженных органов и головного мозга, выделении культуры возбудителя посевом суспензии из внутренних органов и головного мозга на питательные среды и заражении лабораторных животных, идентификации выделенной культуры и дифференциации её от других микробов, изучении вирулентности культуры путём заражения лабораторных животных.

Listeria monocytogenes – это маленькая палочковидная бактерия длиной 0,5 – 2 мкм и шириной 0,5 мкм. В зависимости от условий культивирования она способна принимать кокковидную или овоидвую форму. Л.Г. Астапович, И.А. Бакулов, В.М. Котляров /13/ установили, что в культурах, выращенных при комнатной температуре, преобладали палочковидные формы, а в культурах, выращенных при температуре 37°С – кокковидные и овоиднне формы. В старых культурах также преобладали кокковидные формы листерий.

Это положительно окрашивающийся по Граму возбудитель, неспорообразующий, неустойчивый к кислотам. Большинство исследователей отмечали отсутствие видимой капсулы у листерий. Однако, C.W. Smith J.F. Metzger /303/, используя иммуноцитологические, электронно-микроскопические и гистохимические методы исследований указали на наличие у них мукополисахаридной капсулы.

Показательной особенностью листерий является четко выраженная подвижность клетки. Специфика проявления подвижности у листерий /дифференциальный признак от рожистых бактерий/ связана с наличием жгутиков /И.А. Бакулов, З.Н. Меньшикова, Л.Г. Астапович. В.М. Котляров /23/, Н.Д. Константинова, К.Н. Шлыгина /102/. При температуре 22°С листерии имели 1-8 жгутиков, при температуре 37°С основная масса клеток лишена их и лишь 1-15% имели 1-2 жгутика. Соответственно, все культуры изученных штаммов обладали активной подвижностью при температуре 22°С, при температуре 37°С она отсутствовала или была слабовыраженной /З.Н. Меньшикова, 143/.

Листерия особой прихотливостью к питательным средам не отличается. Они растут на обычных питательных средах с довольно широким диапазоном рН /5,6-9,0/. Наиболее благоприятными следует признать среды с рН 7,2-7,4, содержащие глицерин, глюкозу, сыворотку крови, а также печёночные среды. Лучшей питательной средой является мясопептонный печеночный агар и бульон с добавлением 1% глюкозы и 2% глицерина /45, 109, 131/.

На МПА в первые сутки роста наблюдаются мелкие, слизистые, круглые, прозрачные при проходящем или молочно-белые в падающем свете, выпуклые колонии.

На МПБ листерии вначале вызывают равномерное помутнение среды; при встряхивании пробирки заметны муаровые волны, более грубые, чем при росте рожистых бактерий. На 5-7 день бульон просветляется и на дне образуется слизистый осадок, который при встряхивании поднимается в виде косички. Пленки и пристеночного кольца не образуется.

При посеве уколом на МПЖ листерии дают медленный рост в виде узловатой нити или полоски с небольшими отростками. Разжижение желатины не наступает.

Свежевыделенные культуры листерии продуцируют растворимый, фильтрующийся b-гемолизин, способный разрушать эритроциты человека, лошади, крупного рогатого скота, овец, кроликов /92/.

Листерии, по мнению большинства исследователей, по биохимическо-ферментативным свойствам, принадлежат к малоактивным видам бактерий. Они не образуют индола, аммиака, не восстанавливают нитраты в нитриты, не свёртывают и не пептонизируют молоко, не гидролизуют мочевину. Постоянным признаком листерий, который в числе прочих может быть использован для целей дифференциации их от эризипелотриксов, является каталазная активность /22, 236/. /Листерии способны ферментировать, с образованием кислоты /без газа/глюкозу, рамнозу, салицин, левулезу, но не изменяют среду с дульцитом, маннитом, арабинозой, изулином, сорбитом /22/.

Для биологической диагностики листериоза используют белых мышей, морских свинок, кроликов, степных пеструшек. Заражение целесообразно проводить интрацеребрально, внутривенно или подкожно. В.В.Сливио, В.Ф.Фомичев /208/ разработали интракраниальный /внутричерепной/ метод заражения белых мышей. Введение 100 клеток листерий обеспечивает 100% гибель мышей в течение 3-10 дней.

По данным И.А. Бакулова с соавт. /21/, наиболее удобным объектом для постановки биопробы на листериоз при подкожном введении оказалось степные пеструшки, чувствительность которых к возбудителю листериоза превышала чувствительность мышей в 100 тысяч раз.

Для дифференциации возбудителя листериоза от бактерий рожи свиней и определения вирулентности выделенных культур рекомендована конъюнктивальная проба, которая заключается в нанесении испытуемой культуры на конъюнктиву глаза морской свинки или кролика. Специфичным для листерий является развитие /через 2-3 дня/ гнойного конъюнктивита, который переходит в кератит; нередко происходят генерализация инфекций и животное погибает. На ценность и высокую специфичность конъюнктивальной пробы указывают многие исследователи /51, 137/.

Прижизненная диагностика листериоза связана, в первую очередь, с разработкой серологической диагностики, основанной на том, что в крови больных животных накапливаются разные антитела /агглютинины, преципитины, комплементсвязывающие антитела/. Их накопление происходит в разные сроки после начала заболевания и характеризует определённое состояние организма.

Чаще других используется реакция агглютинации /РА/, которая применяется как для идентификации культур с помощью специфической агглютинирующей сыворотки, так и для прижизненной диагностики путём исследования сыворотки крови с помощью специфического антигена. Данные литературы относительно специфичности РА с листериозным антигеном разноречивы. Некоторые исследователи считают её достаточно специфичной и пригодной для лабораторной диагностики листериоза /146, 172, 206/, другие авторы указывают на наличие нормальных антител у клинически здоровых животных и людей, а также на возможность перекрёстных реакций с другими микроорганизмами, в частности, с энтерококками и стафилококками /71, 297, 298/.

По данным Л.Ф.Николайчук /154/ перекрёстное взаимодействие в РА с золотистым стафилококком наблюдается, преимущественно, в пределах 1 серогруппы листерий. Ею было установлено, что сыворотки здоровых животных взаимодействовали с листериями 1 серогруппы, при этом наибольший процент положительно реагирующих сывороток выявлен у крупного рогатого скота и свиней /37,7% и 40%, соответственно, у кроликов-17,7%, у овец – 30%/.

Бакулов И.А. /22/ сообщает о возникновении перекрёстных РА между листериями и стафилококком, а также возбудителями рожи свиней и бруцеллёза. Неспецифичность РА при листериозе отмечали и другие исследователи /64, 136, 244, 283, 289/.

Ряд исследователей /22, 71, 222, 296/ приходят к выводу, что использование РА необходимо, но что она не может служить единственным методом лабораторной диагностики и является "не утверждающей", а "подтверждающей".

Шлыгиной К.Я. /245/ было обнаружено значительное взаимодействие в РНГА листериозных и стафилококковых сывороток с гетерологичными антигенами /титр 1:1280 – 1:5120/. Перекрёстное взаимодействие в РНГА между листериями I и II серогрупп, имеющих общий антигенный фактор Ш сохранялось даже после адсорбции листериозной сыворотки стафилококком. Следовательно, стафилококк удалял только видонеспе-цифические Рантц антитела, оставляя в листериозных сыворотках антитела специфической части фактора Ш, за счёт которых происходили перекрёстные реакции между двумя серогруппами листерий.

Триполитова А.А. /222/ считает, что в РНГА участвуют, в основном, полисахаридные и монополисахаривные антигенные компоненты, а у листерий эти вещества являются наиболее неспецифическими.

При использовании РП установлена общность антигенов листерий и гемолитических стафилококков /290, 299/.

S.P. Pease с соавт. /233/ доказали существование перекрестного взаимодействия в РДП между листериями и Erysipelathrix rhusiopatiae.

Николайчук Л.Ф. /154/ отмечено перекрёстное взаимодействие в РДП листерий с золотистым стафилококком.

Используя РА, РСК, РДП, H.P.R.Seeliger /237/ показал четко выраженное антигенное родство листерий и энтерококков.

Таким образом, мнения различных исследователей относительно диагностической ценности серологических реакций при листериозе разноречивы, вследствие чего, очевидно, следует считать, что серологические реакции могут использоваться для выявления листериоза только в комплексе с другими методами лабораторной диагностики.

Таким образом, представленные в настоящей главе данные литературы свидетельствуют о том, что листериоз – болезнь широко распространенная как географически, так и по количеству поражаемых представителей животного мира. Наличие больных животных – листерионосителей, существование природных очагов листериоза, длительная сохраняемость листерий во внешней среде объясняют эпизоотологические особенности болезни: листериоз в хозяйствах может продолжаться неделями, месяцами и даже годами.

За листериозом в современных условиях всё более утверждается признание широкой распространенности, эпизоотологической и эпидемиологической важности /26, 77, 135/. Тем не менее, диагностика болезни в значительной степени затруднена. Во-первых, это зависит от различий в биологических свойствах культур, сложности их антигенной структуры; во-вторых, интерпретация результатов серологических реакций затруднительна, так как существуют микроорганизмы, имеющие общие антигены с листериями.

Поэтому окончательный диагноз устанавливают только в случае обнаружения возбудителя.

Однако трудность выделения возбудителя листериоза из объектов внешней среды и патологического материала, заставляют искать такие методы лабораторной Основной задачей данного учебного пособия является демонстрация следующих фактов :

• показать специфичность листериозных бактериофагов и спектр их литической активности;
• описать оптимальные условия постановки РНФ при обнаружении возбудителя листериоза;
• продемонстрировать возможность использования РНФ для обнаружения возбудителя листериоза в патологическом материале и в объектах внешней среды.

Исследователи, работавшие в области лабораторной диагностики листериоза, подчёркивают трудность выделения листерий из организма и различных субстратов, несмотря на то, что лабораторные расы этих микроорганизмов легко культивируются на искусственных питательных средах.

В ходе бактериологического исследования возникают определённые проблемы и при идентификация листерий, имеющих много общего с эризипелотриксами, коринебактериями и другими. Схожими по морфологическим и тинкториальным свойствам бактерий.. С большими трудностями и материальными затратами сопряжено получение листериозных антисывороток, к тому же они не всегда обладают строгой специфичностью. Для метода люминесцирующих антител, ИФА,РИА, требуется специальная аппаратура и реактивы. Постановка биологической пробы затягивает бактериологические исследования до 8-14 суток.

Всё это вызывает необходимость разработки более эффективных высокопроизводительных и менее трудоёмких методов диагностика листериоза. Поэтому основной целью исследований представленных в публикации является демонстрация метода по использованию реакции нарастания титра фага /РНФ/ для обнаружения возбудителя листериоза в органах животных и объектах внешней среды.

В начальных исследованиях была изучена специфичность и спектр литической активности листериозных бактериофагов. Эксперименты были проведены с использованием двух листериозных бактериофагов 2A и 4а и 333 штаммов бактерий, из которых 285 гомологичных и 48 гeтepoлогичных. Указанные идентифицированные бактерии были выделены из различных источников, в том числе, от овец, ягнят, поросят, свиней, крупного и мелкого рогатого скота, лошади, кроликов, песцов, птиц и человека, а также из почвы, силоса и отходов мельничного производства. Культуры листерий получены из зон, отличающихся по природно – климатическим условиям. Большинство бактериальных штаммов – 257, присланы из различных областей нашей страны, 28 штаммов получены из Болгария, Германии , Голландии, Канады, Чехословакии,

В результате изучения биологических свойств листериозных бактериофагов установлена их высокая специфичность и активность по отношению к бактериальным культурам Listeria monocytogenes. Фаг 2А лизировал культуры листерий, относящиеся к 1-й серологической группе, а фаг 4А лизировал культуры листерий, относящиеся ко 2-й серологической группе. Какой либо зависимости от вида животного, его географического распостранения или аналогичного происхождения изучаемых штаммов, а так же срока давности выделенных культур не наблюдалось. Как показали исследования, только 4,3% листериозных штаммов не лизировались указанными бактериофагами. Возможно это связано с наличием в геноме бактериальной клетки профага, сообщающего микроорганизму иммунитет к заражению тем же или близкородственным фагом или же отсутствием в клеточной стенки бактерий специфических субстанций, обеспечивающих первый этап взаимодействия фага с клеткой – адсорбцию.