Шпаргалка по "Экологии"

Дифференциальное  окрашивание хромосом можно проводить  рядом способов. Первоначально использовали акрихин-иприт-флюоресцентное алкилирующее вещество (Q-метод). Действие его основано на способности метафазных хромосом дифференциально связывать флюорохромы. После окрашивания акрихином сегменты приобретают яркое флюоресцирующее свечение. Рисунок каждой хромосомы специфичен по числу, размерам и положению по-разному флюоресцирующих сегментов, что и обеспечивает идентификацию всех хромосом. С помощью данного метода окраски можно идентифицировать хроматин с повышенным содержанием АТ-пар, поскольку они активнее флюоресцируют. Специфическим преимуществом Q-метода является то, что он позволяет даже в интерфазном ядре идентифицировать Y-хромосому по яркому свечению. Для просмотра таких препаратов используют люминесцентный микроскоп.

В дальнейшем был разработан способ окраски хромосом без флюоресцентных красителей — G-окраска (краситель Гимза). После предварительной инкубации в солевом растворе хромосомы обрабатываются протеазой. В результате хромосомы приобретают сегментированный вид благодаря чередованию темно- и светлоок-рашенных участков. Механизм образования сегментов пока недостаточно ясен. Предполагается, что окрашенные сегменты — это гетерохроматиновые участки с повторяющимися последовательностями ДНК, а неокрашенные — это эухроматиновые районы с кодирующими последовательностями ДНК.

К разновидностям дифференциального окрашивания  по методу Гимзы относятся R-окрашиваемость и С-окрашиваемость. Эти разновидности дифференциального окрашивания получают при определенном изменении времени и условий инкубации препаратов, окрашенных по методу Гимзы. В первом случае распределение окрашенных и неокрашенных сегментов будет обратным тому, что наблюдается при G- и Q-окрашивании. На R-окрашенных хромосомах гетерохроматиновые районы (центромерные, околоцент-ромерные и интерстициальные) остаются светлыми. В случае же С-окраски выявляются районы структурного или факультативного гетерохроматина. В хромосомах человека эти районы локализованы в околоцентромерных участках, а в Y-хромосоме — в дистальной половине длинного плеча. Наиболее крупные блоки С-хроматина имеются в области вторичных перетяжек аутосом 1,9 и 16, а также в Y-хромосоме. Самыми мелкими центромерными блоками обладают Y-хромосома и аутосома 2. Одной из особенностей хромосом человека является асинхронность (неодновременность) репликации по длине. В каждой хромосоме есть рано и поздно реплицирующиеся участки. Для выявления последовательности репликации применяется 5-бромдезоксиуридин — аналог тимина. Включившие его участки окрашиваются слабо. Применяется 5-бром-дезоксиуридин и для дифференциальной окраски сестринских хроматид, если он вводится на полный клеточный цикл. В этом случае вновь образуемая хроматида включит этот аналог тимина и будет окрашена слабо, а другая (старая) окрасится интенсивно. Этот метод позволяет выявлять участки сестринских хроматидных обменов (СХО).

При воздействии  различными мутагенными факторами  число СХО увеличивается, следовательно, этот метод выгоден для изучения мутационного процесса у человека.

Успехи  молекулярной цитогенетики человека позволяют  разрабатывать новые методы изучения хромосом. Так, следует отметить метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH-метод), который дает возможность исследовать широкий круг вопросов от локализации гена до расшифровки сложных перестроек между несколькими хромосомами. Метод FISH может применяться и для диагностики анеуплоидий в интерфазных ядрах.

Таким образом, соединение цитогенетических и молекулярно-генетических методов в генетике человека делает почти неограниченными возможности диагностики хромосомных аномалий.

НЕХРОМОСОМНОЕ (ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЕ) НАСЛЕДОВАНИЕ

 

Многочисленные  эксперименты, начиная с Т. Бовери, доказывали исключительную роль ядра в передаче наследственной информации. До сих пор мы все время говорили об исключительной роли ядерного генетического  материала (о генах, локализованных в локусах хромосом ядра) в плане  передачи и реализации наследственных признаков. Тем не менее, представления о генах вне хромосом в конце концов получили фактическое обоснование и развились в самостоятельный раздел генетики.

Возник  вопрос – могут ли какие либо компоненты цитоплазмы, так или иначе, участвовать в передаче определённых наследственных признаков потомству?

Могут. И  к таким компонентам относятся: пластиды, митохондрии, которые содержат собственную ДНК и аппарат  синтеза белка, ДНК или РНК  вирусов,  бактериальных плазмид.

 

Пластидное наследование

 

В растительных клетках пластиды относятся к  полуавтономным самовоспроизводящимся  органеллам клетки, так как содержат собственную ДНК.

Молекула  хлоропластной ДНК в отличие  от ядерных, имеет другую форму – она кольцевая. Сильно отличается и ее плотность – она намного меньше плотности ДНК ядра. Хлоропласты обладают своей собственной системой синтеза белка (с участием: т-РНК, р-РНК). Однако этот синтез существенно отличается от основной системы синтеза белка в цитоплазме с участием и-РНК, синтезированной в ядре.

Вместе  с тем, работа генов, локализованных в ДНК хлоропластов, соподчинена работе генов ядерной ДНК, прежде всего это касается фотосинтетических процессов, процессов очень важных для жизнедеятельности растения.

Генетические  функции, необходимые для фотосинтеза, частично закодированы в ДНК хлоропластов, а частично – в ядерной ДНК. Фотосинтез идет при их одновременном  участии.

Совокупность пластид клетки как  структур, передающих наследственную информацию, была названа пластидомом.

О первых фактах пластидного наследования сообщили Э. Баур и К. Корренс в 1909 г. Внимание генетиков привлекли пестролистные растения: ночная красавица, аукуба, герань, плющ, хлорофитум, традесканция. У них зелёные листья испещрены белыми или жёлтыми пятнами или полосками – участками тканей, не содержащих пластид или имеющих дефектные пластиды, лишённые хлорофилла.

Мутации ДНК некоторых хлоропластов могут  привести к тому, что они утрачивают зеленую окраску. Когда отдельно взятая клетка листа делится на 2 дочерние митозом, распределение хлоропластов по дочерним клеткам происходит случайно. В дочерних клетках могут оказаться: окрашенные; бесцветные пластиды или и те, и другие. Не обязательно в равном количестве. Именно по этой причине окраска листьев пестролистного растения может варьировать.

При половом  размножении пестролистное растение (ночная красавица, львиный зев) может  образоваться 3 вида яйцеклеток, различных  по содержанию хлоропластов. Мужские  клетки содержат слишком мало цитоплазмы, поэтому наследование, в основном идет по материнской линии. Такая передача фенотипического признака была названа материнским типом наследования. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота) развивается только за счет цитоплазмы яйца, сперматозоид вносит в зиготу только свою половину ядерного хромосомного набора (геном+геном=генотип). Цитоплазма, митохондрии и другие органоиды остаются в хвосте сперматозоида. Такой тип оплодотворения называется гетерогамией.

Если  яйцеклетка содержала бесцветные хлоропласты, то из зиготы будет развиваться неокрашенное растение, израсходовав запас питательных  веществ, оно погибнет. Если яйцеклетка содержала только зеленые хлоропласты – разовьется нормальное зеленое растение. Если в яйцеклетку попали и зеленые и бесцветные хлоропласты, то растение будет пестролистным.

Позже, продолжая  изучать явление пестролистности  у растений, генетики обнаружили виды, которые являются исключением из общего правила. Так, например, у герани в передачи пластид участвует  и материнская и отцовская  гаметы. А у такого растения как  кипрей пластиды цитоплазмы вносятся в зиготу не яйцеклеткой, а спермием. Окраска листьев наследуется по отцовскому типу.

 

Митохондриальное наследование

 

Подобно пластидам, к самовоспроизводящимся  органеллам клетки относятся и митохондрии, ответственные за дыхательную активность как растительных, так и животных клеток. Митохондрии преобразуют энергию химических связей питательных веществ в макроэргические связи АТФ в процессе клеточного дыхания (“энергетические станции клетки”).

Митохондрии имеют свою собственную ДНК и  собственные гены для т-РНК. Но с  другой стороны, многие (но не все) митохондриальные ферменты кодируются ядерными генами. Гены митохондриальной ДНК носят  особое название – плазмогены.

Примечательно, что в ооцитах содержится очень  большое количество митохондрий, тогда как в спермиях их только четыре. При оплодотворении эти митохондрии не попадают в ооцит. Следовательно, все митохондрии во всех клетках потомка имеют материнское происхождение.

Примеры: синдром митохондриальной цитопатии. В этом случае структурные аномалии митохондрий сочетаются с недостаточностью многих митохондриальных ферментов (как следствие структурного дефекта). Клинические симптомы варьируют: прогрессирующая мышечная слабость, птоз (опущение века), офтальмоплегия (нарушена работа мышц глаза), аномалии ЦНС и периферической, клубочковая дисфункция почек. Наблюдается материнская передача, но с разной экспрессивностью, имеет место неполная пенетрантность. Нормальные и поврежденные митохондрии распределяются по дочерним клеткам случайно.

Болезнь Лебера – связана с атрофией зрительного нерва. Гораздо чаще встречается у мужчин. Синдром почти всегда передается по женской линии. В качестве причины заболевания упоминается дефект митохондриального фермента – тиосульфатсульфотрансферазы. Неполная пенетрантность и экспрессивность.

Говоря  о митохондриальной ДНК растений необходимо подчеркнуть, что в ней  закодировано множество функций, необходимых  для нормально дыхательной активности. Позже было доказано, что митохондриальная ДНК может нести мутантные  гены, определяющие устойчивость к  целому ряду антибиотиков: эритромицину, олигомицину и др.

Есть мнение, что некоторые патологии, приводящие к мужскому бесплодию, связаны, именно с мутациями плазмогенов.

Некоторые типы близнецовости могут быть обусловлены этими же причинами. При этом плазмогены наследуются, как правило, только по женской линии.

Наследование паразитов  и симбионтов

 

Присутствие эндосимбионтов может быть причиной появления признаков, придающих  их носителям известное селективное  преимущество.

У одного из видов инфузорий Paramecium aurelia существуют линии-убийцы, в цитоплазме которых присутствуют бактерии Claudobacter taeniospiralis. Эти бактерии выделяют токсин парамецин, от которого гибнут инфузории чувствительных линий. Сохранение бактерий в цитоплазме и устойчивость к парамицину зависит от доминантного состояния трёх ядерных генов. Иногда при конъюгации двух инфузорий разных линий бактерии могут переходить в цитоплазму партнёра, тогда эта клетка тоже становится убийцей.

Эндосимбионты широко распространены у простейших, причём экологической нишей для  них может быть не только цитоплазма, но также макро- и микронуклеус.

У Drosofila melanogaster известны линии без самцов. Самки этих линий при скрещивании с любыми самцами дают в потомстве только самок. Выяснилось, что бессамцовые линии заражены спирохетами, которые, проникая в откладываемые яйца, убивают мужские эмбрионы, но не убивают женские эмбрионы. В результате самки становятся носителями инфекционного начала.

Тесная  связь между структурами ядра и цитоплазматическими эндосимбионтами  была продемонстрирована в конце 60-х  годов. Культуру, содержащую амебу обыкновенную случайно заразили бактериями. Бактерии проникли в цитоплазму амеб и размножились там до численности примерно 150 тыс. штук на 1 клетку. Большинство амеб погибло, но осталась небольшая часть, которая  не только выжила, но и сохранила  способность делиться, не смотря на присутствие бактерий в цитоплазме. Число бактерий в их цитоплазме составило  примерно 50 тысяч штук.

Но что  самое интересное, спустя некоторое  время, ядро амебы стало зависимым  от присутствующих в цитоплазме бактерий, которые стали уже постоянными  эндосимбионтами.

В опытах, когда ядро зараженной амебы пересаживали в нормальную, но безъядерную, оно уже не могло функционировать нормально без присутствия некогда патогенных бактерий.

Эти наблюдения доказывают, что генетические функции  хозяина со временем ставятся в зависимость  от находящихся эндосимбионтов.

Наследование вирусов

Существуют хорошо документированные  факты так называемой вирусной наследственности и наследование через плазмиды.

У дрозофил найдено несколько типов РНК-содержащих вирусов, которые живут в организме  насекомого ли в культивируемых клетках  как симбионты, не вредя хозину. Их генетические эффекты неизвестны. Но эффект одного из них – известен. Наличие этого вируса в цитоплазме клеток приводит к повышению чувствительности к содержанию в воздухе СО₂. СО₂-чувствительность наследуется по материнскому типу в данном случае.

Бактерии помимо своей собственной кольцевой хромосомы часто содержат дополнительные маленькие кольцевые молекулы двухцепочечной ДНК, называемые плазмидами. Мутации, связанные с плазмидами позволяют бактериям перейти на новый вид питания.

Плазмиды  реплицируются автономно, и сами могут содержать гены, определяющие устойчивость бактерий к антибиотикам или\и гены, контролирующие синтез веществ, убивающих другие бактерии (например, колицины).