Шпаргалка по "Медицине"

2 Определение  абсолютного и относительного  количества Т-лимфоцитов и их  субпопуляции, РБТЛ и РТМЛ.  Метод розеткообразования (опр Т-лимфоцитов) осн на том, что на пов-ти Т-лимфоц содерж рецепторы к бараньим эритроцитам (белокСD2) Инкубируют взвесь лимфоцитов с бараньими эритроцитами, получ «розетки»-в центре Т-лимфоц, по периферии-бараньи эритроц. Е-РОК(Е-эритр, РОК-розеткообраз кл) моноклональные антитела к дифференцировоч антигенам (CD) в ИФ тесте. Для опр общег кол-ва Т-лимф прим Мон АТ к CD2,3, хелперной субпопуляции-CD4, киллерно-супрессорной-CD РБТЛ реакции бластной трансформации лимфоцитов основана на св-ве лимфоцитов в результате контакта с митогенами и Аг превращаться в лимфобласты – кл, готов – ся к делению и активно синтез-е ДНК.  В кач-ве стимулятора в основном используют фитогемагглютинин ФГА. Результат оценивают 2-мя способами: 1) подсчет кол-ва кл, подвергшихся бласттрансформации, под микроскопом ( неточн.) 2) радиометрическое измерение:добав в культуру лимфоц меченый изотопом Н3 тимидин, необх для синтеза ДНК, измер кол-во включ изотопа. РТМЛ р-я торможения миграции лейкоцитов Смесь лейкоцитов, полученных из плазмы крови без примеси эритроцитов, смешивают в равных объемах со средой 199 и с ФГА-индуцированный вариант. Конц ФГА сост 10 мкг в 1 мл

96 Современные поливалентные вакцины; рекомбинантные, антиидиотипические и ДНК-вакцины, пищевые вакцины).

Антиидиотипическне  вакцины

В настоящее  время считается, что при создании противовирусных вакцин крайне нежелательно использование природного вирусного материала в любых его формах. Для преодоления этих трудностей было предложено создавать антиидиотипическне вакцины, в которых в качестве антигенного материала используются антиидиотипические антитела, имитирующие пространственную структуру антигена, так называемый "внутренний образ" антигенной детерминанты. На этом принципе уже создана вакцина против гепатита В на основе набора моноклональных антиидиотипических антител к ряду эпитопов поверхностного антигена вируса гепатита В.

Пищевые вакцины представляют собой генетически модифицированные растения, в которые введены гены, кодирующие антигенные пептиды патогенов. При применении в пищу таких растений происходит оральная вакцинация против патогенов. Один из путей создания пищевых вакцин основан на введении в бактериальную плазмиду гена, кодирующего соответствующий антигенный пептид инфекционного возбудителя. Затем указанная плазмида вводится в растительную клетку. Там ген, кодирующий антигенный пептид, встраивается в ДНК растительной клетки. Затем из этой одиночной клетки выращивается целое растение, все клетки которого синтезируют и накапливают данный антигенный пептид. Семена, полученные от этого растения, также генетически модифицированы. Полученные из этих семян растения также синтезируют те же антигенные пептиды.

   Поливалентные (ассоциированные)  вакцины Представляют собой смесь иммунизирующих компонентов нескольких возбудителей или разных серологических типов одного возбудителя. Примером может служить АКДС - ассоциированная вакцина против коклюша, дифтерии и столбняка. Она содержит убитый возбудитель коклюша и два белка-анатоксина: дифтерийный и столбнячный. Анатоксины - это инактивированные формалином, но сохранившие антигенность бактериальные токсины. Иммунизация такими анатоксинами вызывает образование протективных антител, нейтрализующих токсин в результате стереохимического связывания с активным центром и стимуляции поглощения токсина фагоцитами. Перед введением анатоксин обычно адсорбируют на гидроокиси алюминия, действующей как адъювант. В АКДС адъювантом служит убитый возбудитель коклюша.

   Технология рекомбинантных ДНК позволяет получать гены, кодирующие либо всю белковую молекулу антигена, либо ее фрагменты, встраивать их в подходящий вектор и экспрессировать в ссютветствующих клетках.Вакцины этого типа получают путем встраивания генов одного микроба или вируса в другой, менее вирулентный. Для вакцинации населения широкое применение получили коммерческие рекомбинантные вакцины против гепатита В.

Генетические вакцины (или ДНК-вакцины) представляют собой бактериальные плазмиды (маленькие кольцевые двунитчатые ДНК, которые сами по себе не способны вызвать инфекцию), в которые встроены гены, специфичные для одного или более антигенных белков определенного патогена.Эти плазмиды вводятся либо в мышечные клетки с помощью инъекций, либо через кожу с помощью так называемого генного ружья. Вакцинные плазмиды проникают в ядра клеток и встраиваются в ДНК. Затем происходит считывание генов, кодирующих белки патогенов. В результате образуются м-РНК, которые перемещаются в цитоплазму, где на их матрице происходит синтез антигенных белков. Эти антигенные белки могут просто выходить из клетки, а могут подвергаться процессингу и затем выделяться на поверхность клеток в виде иммуногенного комплекса с белками МНС I класса.Часть плазмид попадает в профессиональные антиген-представляющие клетки (например, макрофаги и дендритные клетки), где в результате процессинга образуются иммуногенные комплексы с антигенами гистосовместимости II и I класса.Презентированный антиген распознается хелперами-индукто-рами, которые, дифференцируясь в Txl и в Тх2, инициируют обе основные формы иммунного ответа - клеточный и гуморальный

Билет 13

Строение иммунной системы (органный, клеточный, молекулярный уровни организации). Центральные и периферические органы иммунной системы. Органный уровень: Центральные лимфоидные органы – место развития лимфоцитов. Здесь эти клетки дифференцируются из стволовых лимфоидньгх клеток, размножаются и превращаются   в  функционально зрелые клетки. Костный мозг --- это орган, совмещающий функции кроветворного органа и центрального органа иммунной системы, он служит основным источником общих клеток-предшественниц всех клеток крови полипотентных стволовых кроветворных клеток (ППСК). Из ППСК образуются клетки всех ростков кроветворения эритроидный, который заканчивается образованием эритроцитов; миелоидный, приводящий к образованию нескольких самостоятельных клеточных типов: нейтрофилов, моноцитов, базофилов, эозинофилоф; мегакариоцитарный - формирующий тромбоциты; а также лцмфоидный, приводящий к образованию Двух клеточных линий: предшественников Т-лимфоцитов и предшественников В-лимфоцитов.  
Тимус является филогенетически древним лимфоидным органом, с ним связаны формирование лимфоидной системы, регуляция ее деятельности и развития клеточного иммунитета. Главная функция тимуса -регулирующее влияние на иммуногенез. Тимус специализирован на развитии Т- лимфоцитов. В центральных органах происходит образование Т- и В лимфоцитов из клеток- предшественников и их антигеннезависимая дифференцировка. Главным итогом антагеннезависамой дифференцировка в центральных органах является формирование клонов лимфоцитов. Периферические органы (селезенка, лимфатические узлы, пейеровы бляшки кишечника, аппендикс, миндалины, аденоиды и другие лимфоидные образования). В основе организации системы периферических органов лежит принцип: каждый лимфоидньий орган контролирует определенную часть тела.

Клеточный уровень По способности к распознаванию антигенов 2 группы клеток..  
1 группа — это лимфоциты (Т- и В-лимфоциты разной степени зрелости, плазматические клетки, и нулевые лимфоциты. 2 группа - антигенпредставляющие клетка (макрофаги, дендритные клетки, В-лимфоциты). Без них невозможен иммунный ответ на чужеродные антигены.  
Молекулярный уровень составляют основные группы макромолекул: 1. Иммуноглобулины (Ig), синтезируемые В-лимфоцитами, и гены, контролирующие их синтез. Это продукты гуморального иммунного ответа, представляют собой глобулины, специфически реагирующие с антигеном, вызвавшим их образование. 2. Медиаторы, С помощью которых иммунокомпетентные клетки участвуют в индукции, регуляции и осуществлении иммунного ответа.  
3 Гены основного комплекса контролируют синтез антигенов гистосовместимости – гликопротеидов, содержащихся на поверхности всех клеток организма. Играют важную роль в распознании антигенов и индукции иммунологич. реакций. 4. Кластеры дифференцировки. Выполняют роль корецепторов, обеспечивающих процессы распознавания антигенов (СD3, СD4, СD8); рецепторов для взаимодействия с определенными цитокинами (например, СD 25, являющийся рецептором для ИЛ- 2). 5. Молекулы адгезии с помощью их повышается уровень межклеточных взаимодействий м\у антигенпредставляющими клетками, В- и Т-лимфоцитами.  
6. Антигенраспознающие рецепторы лимфоцитов:  У В-лимфоцитов это молекулы Ig (встроенные в их плазматическую мембрану). У Т-ламфоцитов - Т-клеточный рецегпор7. Гормоны тимуса. Функция - контроль созревания Т-клеток в тимусе и завершении функционального созревания Т-лимфоцитов после их эмиграции из тимуса.8. Миелопептиды костного мозга - участвующие в дифференцировке В-лимфоцитов

2 лабораторные оценка  Т системы. Определение количества  В-лимфоцитов 

22.Лабораторные методы оценки В-системы иммунитета Оценка гуморального иммунитета (В-системы) проводится путем определения количества В-лимфоцитов в крови реакцией иммунофлюоресценции с антисывороткой против иммуноглобулинов человека или путем выявления на В-лимфоцитах рецепторов для комплемента — с помощью теста розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами, несущими на себе комплекс: антиэритроцитарные антитела+комплемент (ЕАС-розет-ки). Функциональная активность В-лимфоцитов оценивается косвенно по уровням сывороточных иммуноглобулинов (Ig) различных классов: A,G, М.

К тестам 1-го уровня оценки B-системы иммунитета можно отнести определение: иммуноглобулинов G, A, M в сыворотке крови; иммуноглобулина E в сыворотке крови; определение процента и абсолютного количества B-лимфоцитов (CD19, СD20) в периферической крови.К тестам 2-го уровня оценки В-системы иммунитета можно отнести определение: субклассов иммуноглобулинов, особенно IgG; секреторного IgA; соотношения каппа- и лямбда-цепей; специфических антител к белковым и полисахаридным антигенам; способности лимфоцитов давать пролиферативный ответ на B-(стафилококк, липополисахарид энтеробактерий) и T-B-(митоген лаконоса) митогены. Определение субклассов IgG представляет определенную диагностическую ценность, так как при нормальном уровне IgG могут быть дефициты по субклассам иммуноглобулинов. Так, IgG2 является субклассом иммуноглобулина G, который преимущественно содержит антитела против полисахаридов инкапсулированных бактерий (Haemophiluls influlenzae, Steptococculs pneulmoniae). Поэтому дефицит, связанный с IgG2, а также с IgA, ведет к повышенной заболеваемости респираторными инфекциями.

75 Клеточные механизмы  противоопухолевого иммунитета, роль  Т-клеток, макрофагов, натуральных киллеров  и К-клеток.

Ведущую роль в клеточном противоопух-ом иммунитете играют Т-лимфоциты, макрофаги и NK-клетки. Среди Т-лимфоцитов ведущая роль в индукции и осущ-ии специф-ой цитотоксической функции по отношению к опухолевым клеткам принадлежит Тх1 и Т-киллерам. Тх1распознают опухолевый АГ в ассоциации с АГ HLAII класса на поверхности АГП-их клеток, активируются и синтезируют цитокины, с помощью кот включаются целый ряд мех-змов клеточного противоопухолвого имм-та.  Т-киллеры осу-ют специф-ое цитотоксическое д-ие на опухолевые клетки. Они распознают опухолеспециф-ие АГ на пов-ти опухолевых клеток в комплексе с АГ-ами  HLA I класса, активир-ся и секретируют ряд цитокинов, вызывающих гибель опухолев клеток (перфорин, TNF-β,IFN-γ). NK-клетки. Естественные киллеры распознают изменённые HLA-D-Ar комплекса МНС на опухолевых клетках человека и повреждают их независимо от наличия AT, комплемента и макрофагов. Основные мишени естественных киллеров —инфицированные или трансформированные онковирусами клетки. Активность естественных киллеров увеличивают Т-лимфоциты, облегчающие контакт NK-клеток с опухолевыми. Осущ-ют неспециф-ое цитотоксич-ое д-ие при первом же контакте с опухолевыми клетками. Они нач-ют унимчтожать опухолев клетки на самых ранних этапах развития опухоли.

Макрофаги -разрушают опухолевые клетки. Если лимфоциты в отсутствие макрофагов в значительной степени утрачивают активность, то изолированные от лимфоцитов макрофаги оказывают ещё более выраженное цитотоксическое действие. Способность повреждать клетки-мишени обусловлена фагоцитарным потенциалом и цитотоксическими свойствами макрофагов. Макрофаги уничтожают трансформированные клетки в реакции антителозависимой цитотоксичности. Они способны уничтожать различные опухолевые клетки, в том числе и не имеющие Аг к цитотоксическим AT на поверхности макрофагов

Билет 14

10,В общем, работа иммунной  системы обеспечивается двумя  видами факторов: клеточными и  гуморальными. Клетки иммунной системы  циркулируют в крови и переходят  в ткани, осуществляя постоянный  надзор за антигенным составом  тканей. Кроме того, в крови циркулирует большое количество разнообразных антител (гуморальные, жидкостные факторы), которые также способны распознавать и уничтожать чужеродные структуры. Центральными органами иммунной системы являются красный костный мозг и тимус. В костном мозге происходит формирование клеток иммунной системы из стволовых клеток, которые дают начало всем клеткам крови. Тимус хорошо развит у детей, но с возрастом подвергается инволюции и практически отсутствует у взрослых. В тимусе происходит дифференциация лимфоцитов – специфических клеток иммунной системы. В процессе дифференциации лимфоциты «учатся» распознавать «свои» и «чужие» структуры. Периферические органы иммунной системы представлены лимфатическими узлами, селезенкой и лимфоидной тканью (такая ткань находится, например, в небных миндалинах, на корне языка, на задней стенке носоглотки, в кишечнике). Кроме того, в различных органах существуют, так называемые, мезенхимальные клетки, которые могут выполнять иммунную функцию. Много таких клеток в коже, печени, почках. Общее название клеток иммунной системы это лейкоциты

Понятие об ИДС, классиф ВОЗ. Иммунодеф сост - снижение функц активности основных компонентов иммун системы, ведущие к наруш иммунолог реагирования , к сниж или формир неадекватного иммун ответа на самые различ антигены в первую очередь на инфекцион. ИДС разделяют на первич( врожден) и втор (прибретен) Первич: 1 с преимущ пораж системы гуморал иммун (болезнь Брутано, общая вариабильная иммунологич недостаточ, транзиторная гипогаммаглобулинемия у детей, избирател дефицит иммуноглобул. 2 с преимущ пораж системы клет иммунитета ( Синдром Ди Джорджи , хронич слиз гнойный кондидоз. 3 Комбинированые Т и В имунодеф( тяж комбинир иммунолог недостат, синдром Луи Барр, синдром Вискотта Олдрича , имунодеф с карликовостью. 4 дефецит фагоцитарн системы (хрон лимфорануламатоз, синдром Чедиака-хигасси, синдром джоба) 5 дефецит системы комплемента ( первич ИДС обуслов деф компонентов комплемента, и инактиват систем комплемента) Вторичные: инфекц иммунодефициты (ВИЧ); иммунодеф, возникшие под воздействием  иммунодепрессант; вследствие потери белка; нервного истощения; воздействия ионизир излучения (лучевая болезнь).

76 Роль цитокинов в противоопухолевом иммунитете (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-12, IFN-α, IFN-γ, TNF-α, β).

Цитокины-это общее  название медиаторов, являющихся белковыми  или полипеетидными продуктами активированных клеток иммунной системы, опосредующих широкое и сложное вз-вие м/у  клетками иммунно  системы и другими клетками организма в процессах иммунного ответа и неспецифической защиты от антигенов самой разной природы. Цитокины подразделяются на: интерлейкины(факторы вз-вия м/у лейкоцитами), интерфероны(цитокины м противовирусной активностью), факторы некроза опухолей(цитокины с цитотоксической активностью), колониестимулирующие факторы(гемопоэтические цитокины) и хемокины(медиаторы, вызывающие хемотаксис).

ИЛ-1- продуцируются моноцитами и макрофагами.оказывает прямое цитотоксическое д\ие на опухолев клетки, он стимулирует регенеративн процессы в костном мозге, индукцию иммунного ответа. Под его влиянием повыш-ся  специф-ая цитотоксичность моноцитарно-макрофагальных клеток, стимулир-ся продукция вторичных цитокинов, стимулирует адгезию раковых клеток к эндотелию кровеносных сосудов-тем самым-развитие метастазов.

ИЛ-2-прудоцируются Тх1. широкое применение при лечении рака (меланомы, рак легких, карцинома почек). Но полное исчезновение опухоли-редко. Применение высоких доз-ограничено, т.к. почечные токсич эфф-ты. Чаще в иммунотерапии ЛАК-клетками (в комбинации с интерферонами и ИЛ-12).

ИЛ-12- синтез-ся макрофагами. Индуцирует развитие Т-хелперов1и увеличивает пролиф-ию, продукцию цитокинов и цитотоксич-ую активность Т-лимфоцитов. Высок.противоопух.акт-ть-при раке почек, меланома, карцинома толст кишечника.