Автор работы: Пользователь скрыл имя, 27 Ноября 2015 в 10:06, дипломная работа
Целью данной работы является проведение санитарно –бактериологического исследования воды Бугульминского водоканала и определение качества водопроводной питьевой воды.
Объектом исследования стала водопроводная питьевая вода.
Исходя, из поставленной цели были выделены следующие задачи:
1)определить общее количество микробов в воде;
2)определить коли - титр воды и оценить качество;
3) провести органолептическую оценку воды (мутность, цветность, запах, вкус, привкус);
Введение………………………………………………………………………..3
Классификация воды…………………………………………………………..5
Виды загрязнения воды ………………………………………………..6
Оценка качества воды по классам……………………………………..7
Факторы, влияющие на формирование состава воды………………..8
Общие требования к полевым методам анализа……………………...9
Современные методы обеззараживания питьевой воды……………10
Микробиологическая лаборатория…………………………………………22
Техника безопасности в микробиологической лаборатории………31
Организация рабочего места в микробиологической лаборатории.34
Практическая работа………………………………………………………....35
Заключение…………………………………………………………………...49
Список используемой литературы……………………………………
После внесения посевного материала и тщательного его перемешивания подставляем пробирку под струю водопроводной воды и, не меняя наклонного положения, вращаем до застывания агара. Вращение пробирки должно быть медленным, чтобы среда наслаивалась на стенки пробирки ровным, тонким слоем.
Для посева следует брать несколько пробирок агара с различными разведениями, чтобы получить пробирки с удобным для подсчета количеством колоний.
Техника выращивания и подсчета колоний та же, что и при посеве в чашки.
Метод микрокультур
Методы посева в чашки Петри и в пробирки очень громоздки и связанны с затратой большого количества времени. В случае, когда требуется быстро получить результаты анализа, очень прост и удобен метод микрокультур.0,1 мл исследуемого продукта наносим стерильной градуированной пипеткой на поверхность стерильного, подогретого над пламенем горелки предметного стекла. Сюда же стерильной пипеткой наносим каплю расплавленного стерильного агара из гидролизованного молока. Смесь быстро и равномерно распределяем на поверхности площади стекла 4 см2; эту площадь или очерчиваем заранее тушью на обратной стороне стекла, или стекло при нанесении смеси кладем на миллиметровую бумагу, на которой очерчена указанная площадь. Смесь распределяем на указанной площади кончиком пипетки или платиновой петлей. Из каждой пробы приготавливаем по два мазка.
Стекла с мазками для застывания агара помещаем на горизонтальную поверхность; затем стекло переворачиваем мазком вниз, помещаем на полочки этажерки из белой жести и ставим во влажной камере в термостат. Влажной камерой может служить неплотно прикрытый крышкой эксикатор или прямоугольная батарейная банка, на дно которых наливается немного воды с непахучим антисептиком.
Продолжительность выращивания посевов: при 30 – 35 °С – 8 часов, при комнатной температуре – 24 часа.
По окончании срока выращивания стекло с посевом вынимаем из влажной камеры и высушиваем в термостате при 45 – 50 °С. Затем препарат окрашиваем в течение 2 – 3 секунд метиленовой синью. Краску осторожно смываем слабой струей воды, после чего препарат высушиваем.
Микроколонии препарата при масляной системе подсчитываем под микроскопом; число просчитываемых полей зрения 20 – 25.
Вычисляем среднее число колоний в одном поле зрения: умножением этого числа на коэффициент получают количество микробов в 1 мл исследуемого продукта.
В данном случае коэффициент равен 200000.
Метод непосредственного счета бактерий
Микропипеткой точно отмериваем 0,01 мл исследуемого продукта и равномерно распределяем на площади стекла 1 см2. Такие мазки изготавливаем по два на каждом стекле.
Мазок высушиваем, фиксируем и окрашиваем метиленовой синью.
Для подсчета микробов под микроскопом применяем масляную систему.
Среднее количество бактерий в одном поле зрения умножаем на коэффициент 500000 и получаем количество бактерий в 1 мл.
Определение молочнокислых бактерий на среде – агар с мелом
При анализе продуктов, в которых молочнокислая микрофлора представлена главным образом Str. lactis, учет молочнокислых бактерий производят путем посева на чашки Петри. Питательной средой при этом служит агар из гидролизованного молока с мелом. Мел добавляют в пробирки перед разливанием и стерилизацией питательной среды. Количество мела должно быть таким, чтобы после выливания среды в чашку Петри все дно было покрыто равномерным слоем мела.
Посевы выдерживают при 30 °С три дня. Колонии молочнокислых бактерий распознают по зонам просветления, образующимся в результате растворения мела молочной кислотой.
Метод предельных разведений
Этот метод применяется при анализе продуктов, в которых молочнокислая микрофлора состоит из молочнокислых стрептококков и палочек.
При данном способе учета молочнокислых бактерий используют молоко, являющееся для них хорошей питательной средой. Берется ряд последовательных разведений исследуемого продукта в стерильной воде с таким расчетом, чтобы последние из них не содержали молочнокислых бактерий.
Из приготовленных разведений делают посевы по 1 мл в стерильное обезжиренное молоко по две пробирки из каждого разведения.
Последнее разведение берем для доказательства того, что определено то наименьшее количество исследуемого продукта, в котором уже не содержится молочнокислых бактерий.
Посевы ставят в термостат при 30 °С на 7 дней. В течение этого времени во всех пробирках, в которых содержались молочнокислые бактерии, должно произойти свертывание молока.
В каждой пробирке со свернувшемся молоком определяют кислотность и из сгустка изготавливают микроскопический препарат.
Если кислотность сгустка не ниже 60 °Т и в препарате видны стрептококки или палочки, то данное разведение учитывают как содержащее молочнокислые бактерии.
При определении количества Str. lactis и Bact. casei составляют отдельные числовые характеристики на основании микроскопических препаратов и определения кислотности.
Количественный учет бактерий группы кишечной палочки
Количественный учет кишечной палочки осуществляется путем непосредственного посева испытуемого материала в соответствующем разведении на твердую избирательную синтетическую среду с генцианвиолетом. Через 24 – 48 часов выросшие колонии подсчитывают.
Идентификация бактерий группы кишечной палочки
Для идентификации кишечной палочки из жидкой бродильной среды Кесслера, которая является накопительной средой, делали высев на твердую дифференциальную среду Эндо или среду с генцианвиолетом. Чашки с посевом выдерживают при 37 °С в течение суток. Bact. colicommune и Bact. Colicitrovorum дают на среде Эндо красные колонии с металлическим блеском и без него, Bact. aёrogenes – розоватые, выпуклые, сильно слизистые колонии. На среде с генцианвиолетом колонии кишечной палочки серые, более светлые, чем среда.
Чистые культуры, выделенные из выросших колоний на мясопептонномагаре, после 2,5 – 3 часов выращивания испытывают следующим образом.
Приготовление мазков с последующей окраской по Граму и их микроскопический просмотр. При просмотре под микроскопом окрашенных мазков устанавливают морфологическое соответствие бактерий из выделенной колонии с кишечной палочкой, а также отрицательное отношение их к окраске по Граму. Кишечные палочки в таком препарате имеют красную окраску.
Определение подвижности выделенных штаммов. Подвижность определяли при просмотре препарата живых клеток по методам висячей или раздавленной капли. Для Bact. colicommune характерна ярко выраженная подвижность. Некоторым штаммам Bact. Colicitrovorum также свойственна подвижность. Клетки Bact. aёrogenes несколько крупнее, чем клетки Bact. colicommune и неподвижны.
Испытание роста на питательной среде с желатином. Посев производят уколом в столбик среды с желатином. Бактерии группы кишечной палочки не разжижают желатин.
Проба на индол (по методу Эрлиха). К 2 – 2,5 мл испытуемой культуры в пептонной воде прибавляем 1 – 1,5 мл эфира и хорошо взбалтывают. Далее по стенке пробирки осторожно вливаем 10 – 15 капель реактива Эрлиха и оставляем в покое на 10 – 15 минут. При наличии следов индола на границе двух жидкостей образуется красное кольцо.
Испытание роста на жидкой питательной среде с лактозой и сахарозой. Отсутствие образования газа и кислоты на среде с лактозой характерно для Bact. paracoli, Bact. colicommune, а иногда и Bact. Colicitrovorum не сбраживают сахарозу.
Испытание способности к усвоению солей лимонной кислоты. Посев делают в жидкую цитратную среду Козера без индикатора. Среда незасеянная имеет вид прозрачного бесцветного раствора. При неспособности культуры к использованию в качестве источника углеводов солей лимонной кислоты среда не изменяется в течение четырех и более суток. В случае роста среда резко меняется и становится совершенно мутной. На среде козера могут прорастать Bact. aёrogenes и Bact. Colicitrovorum.
Еще более наглядный рост кишечной палочки наблюдается на среде Симонса, представляющий собой ту же среду Козера, но с добавлением агара и индикатора.
Реакция с метилротом. При сбраживании глюкозы Bact. coli образуют углекислый газ и водород почти в равных количествах. Bact. aёrogenes вырабатывают в 2 – 3 раза больше углекислого газа, чем водорода. Состав газа в культурах насыщает питательную среду и обуславливает ее конечную реакцию: для Bact. coli рН 5 и ниже, для Bact. aёrogenes выше 5.
Реакция Фогес-Проскауера. К 5 мл четырехсуточной культуры на среде Кларка добавляем 5 мл 10 % водного раствора едкого калия и смесь оставляем на ночь в термостате при 37 °С. Если в культуре содержится ацетилметилкарбинол, то жидкость в пробирке окрашивается в эозиново-розовый цвет и реакция Фогес-Проскауера считается положительной; при отсутствии розовой окраски реакция считается отрицательной.
Положительная реакция характерна для Bact. aёrogenes, вырабатывающих ацетилметилкарбинол, как один из конечных продуктов сбраживания глюкозы. Bact. colicommune, не обладающие способностью к образованию этого соединения, дают отрицательную реакцию.
Определение свободного остаточного хлора титрованием метиловым оранжевым
Метод основан на окислении свободным хлором метилового оранжевого окислительный потенциал, которого достаточен для его разрушения. При исследовании 100 мл анализируемой воды помещали в фарфоровую чашку добавляли 2-3 капли 5 н раствора соляной кислоты и помешивая быстро титровали раствором метилового оранжевого до появления неисчезающего розового цвета.
Вывод: содержание свободного остаточного хлора (Х1), вычисляла по формуле:
Х1=
Х1 = = 0,32 мг/л
v – количество 0,005% - ного раствора метилового оранжевого, израсходованного на титрование, мл;
0,0217 – титр раствора метилового оранжевого;
0,04 – эмпирический коэффициент;
V – объем воды, взятый для анализа, мл.
В результате исследования выяснили, что содержание свободного хлора в питьевой воде содержится в норме в соответствии САН ПИН 2.1.4.1074-01. 0,32 мг/л, а по гигиеническим требованиям в пределах 0,3 – 0,5 мг/л.
Заключение
В результате исследовательской работы поставленная цель по проведению санитарно – бактериологического исследования воды Бугульминского водоканала и определение качества водопроводной питьевой воды достигла максимальных результатов. Основная задача санитарно – бактериологического исследования воды заключалась в получении гигиенической оценки ее качества в отношении инфекционной опасности. Определение отдельных видов патогенных микроорганизмов требовало специальных, зачастую сложных методов микробиологического исследования, да и полученный отрицательный результат не всегда гарантирует отсутствие этих форм. Поэтому в практике микробиологических исследований применялись косвенные методы оценки качества воды по бактериологическим показателям. При систематических исследованиях эпидемиологического состояния воды в качестве санитарно-показательных микроорганизмов использовали наиболее характерные представители микрофлоры кишечника человека, а именно коли-титр на кишечную палочку.
Санитарно – бактериологическому исследованию подвергалась вода:
При оценке качества воды питьевой использовали основной документ по санитарно-эпидемическим показателям СаНПиН 2.1.4.1074-01. Все исследуемые пробы воды соответствуют нормам регламента. Пробы воды из Бугульминского водохранилища так же отвечают требованиям на поверхностные воды.
Санитарно – бактериологический анализ, проводимый для оценки качества питьевой воды, включалв себя определение двух основных показателей:
Вода необходима для нормального обмена веществ в организме. Физиологическая потребность человека в воде составляет около 3 л в сутки. Кроме того, значительное количество воды необходимо человеку для удовлетворения хозяйственно-бытовых и производственных нужд. Поэтому вода должна быть безопасной в эпидемиологическом отношении и безвредна по химическому составу.
При нарушении гигиенических требований к водоснабжению питьевая вода может быть причиной инфекционных заболеваний и гельминтозов, связанных с загрязнением водоёмов хозяйственно-фекальными сточными водами; заболеваний неинфекционной природы, связанных с необычным природным составом воды либо с загрязнением водоёмов химическими веществами за счет поступления промышленных сточных вод или питьевой воды с остаточным количеством реагентов, добавляемых в процессе её обработки.
Без всякого преувеличения можно сказать, что высококачественная вода, отвечающая санитарно-гигиеническим и эпидемиологическим требованиям, является одним из непременных условий сохранения здоровья людей. Но чтобы она приносила пользу, ее необходимо очистить от всех вредных примесей и доставить чистой человеку.
Список используемой литературы
Информация о работе Санитарно – бактериологическое исследование качества питьевой воды