Автор работы: Пользователь скрыл имя, 05 Декабря 2013 в 04:57, дипломная работа
Цель исследования: выявить влияние вариабельности физиологических и цитолого-биохимических свойств ольхи кустарниковой, сформированной в условиях разного повышенного естественного радиационного фона (ПЕРФ), на радиочувствительность ее семенного потомства.
В связи с этим были поставлены следующие задачи:
1. Выявить влияние ПЕРФ на массу семян и их всхожесть.
2. Определить физиологические и цитолого-биохимические характеристики семенного потомства ольхи кустарниковой, произрастающей в условиях разного ПЕРФ.
Условные обозначения
Введение
1. Литературный обзор
1.1. Адаптация растений
1.2. Внутривидовая изменчивость растений
1.3. Физиологические адаптации
1.4. Всхожесть - как адаптация к выживанию вида
1.5. Биохимические адаптации
1.5.1. Системы обеспечения надежности ДНК и репарация
генетических повреждений
1.5.2. Адаптации растений посредством антиоксидантных систем при действии стресса
1.5.3.Ферменты супероксиддисмутаза и пероксидаза
1.5.4. Естественные антиоксиданты
1.6. Радиоустойчивость семян
1.6.1. Механизмы радиоустойчивости
1.6.2. Внутривидовая радиочувствительность
1.6.3. Влияние внутривидового адаптационного потенциала на
радиочувствительность растений
2. Материал и методики
2.1. Характеристика ольхи кустарниковой
2.2. Лабораторный посев семян
2.3. Облучение семян
2.4. Анализ кривых «доза-эффект»
2.5. Определение количества низкомолекулярных антиоксидантов в проростках
2.6. Комплексный цитолого-биохимический метод дифференциальной оценки активности генома в процессах репликации, трансляции, репарации и его общей устойчивости
2.7. Определение активности пероксидазы
2.8. Определение активности супероксиддисмутазы
2.9. Цитологический анализ
2.10. Статистическая обработка результатов
3. Результаты и обсуждение
3.1. Влияние повышенного естественного радиационного фона на массу семян и их всхожесть
3.2. Физиологические и цитолого-биохимические характеристики семенного потомства ольхи кустарниковой, произрастающей в условиях ПЕРФ
3.3 Вариабельность коэффициентов антиоксидантной защиты, общей активности генома, репарации, общей относительной устойчивости генома клеток и радиочувствительность ольхи кустарниковой
Выводы
Список использованной литературы
Влияние повышенного
№ растения |
kаоз |
kреп |
kоаг |
kуг |
Dq, Гр* |
tgα* |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
20 мкР/ч (n=10) | ||||||
1 |
1,4 |
1,1 |
0,2 |
1,3 |
11,0±1,10 |
0,5±0,10 |
2 |
1,3 |
0,3 |
0,7 |
0,8 |
10,0±1,00 |
0,5±0,10 |
3 |
1,0 |
1,8 |
0,6 |
2,0 |
4,0±0,40 |
0,5±0,10 |
4 |
0,8 |
4,8 |
3,7 |
1,0 |
3,0±0,30 |
0,8±0,10 |
5 |
1,0 |
0,8 |
0,7 |
1,0 |
3,0±0,30 |
0,4±0,04 |
6 |
0,9 |
1,3 |
0,5 |
1,7 |
9,0±0,90 |
0,4±0,04 |
7 |
0,6 |
0,9 |
0,7 |
1,0 |
10,0±1,00 |
0,5±0,10 |
8 |
1,1 |
0,1 |
0,2 |
0,5 |
3,0±0,30 |
0,5±0,10 |
9 |
0,9 |
1,8 |
0,7 |
1,7 |
3,0±0,30 |
0,5±0,10 |
10 |
1,0 |
3,1 |
2,1 |
1,2 |
3,0±0,30 |
0,5±0,10 |
X |
1,0 |
1,6 |
1,0 |
1,3 |
6,0±0,60 |
0,5±0,05 |
100 мкР/ч (n=10) | ||||||
13 |
1,4 |
1,4 |
0,8 |
1,6 |
3,3±,030 |
0,2±0,02 |
18 |
0,8 |
4,8 |
4,5 |
0,9 |
6,6±0,70 |
1,7±0,20 |
19 |
1,9 |
2,4 |
0,9 |
2,3 |
10,0±1,00 |
0,3±0,03 |
20 |
0,7 |
1,0 |
0,2 |
2,8 |
13,0±1,30 |
0,8±0,10 |
21 |
0,8 |
0,1 |
0,2 |
0,4 |
9,0±0,90 |
0,6±0,10 |
22 |
0,5 |
1,2 |
0,7 |
1,1 |
4,0±0,40 |
0,6±0,10 |
28 |
1,5 |
2,0 |
0,6 |
2,4 |
13,5±1,40 |
0,7±0,10 |
29 |
0,7 |
1,4 |
0,4 |
2,1 |
18,0±1,80 |
1,5±0,20 |
30 |
1,2 |
1,9 |
0,8 |
1,8 |
12,1±1,20 |
1,0±0,10 |
31 |
0,3 |
1,9 |
0,5 |
2,0 |
10,0±1,00 |
1,1±0,10 |
Х |
1,0 |
1,8 |
1,0 |
1,7 |
10,0±1,00 |
0,8±0,08 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
300 мкР/ч (n=11) | ||||||
2 |
1,2 |
0,8 |
0,6 |
1,3 |
18,5±1,90 |
0,5±0,10 |
3 |
0,7 |
3,0 |
2,1 |
1,1 |
4,0±0,40 |
0,3±0,03 |
4 |
0,4 |
0,1 |
0,3 |
0,2 |
5,0±0,50 |
0,8±0,10 |
5 |
0,9 |
0,8 |
0,4 |
1,4 |
7,0±0,70 |
1,0±0,10 |
6 |
0,8 |
1,9 |
1,8 |
0,9 |
7,0±070 |
0,9±0,10 |
7 |
1,3 |
0,1 |
0,8 |
0,7 |
5,0±0,500 |
0,4±0,04 |
8 |
1,6 |
4,5 |
2,7 |
1,6 |
19,0±1,90 |
0,5±0,10 |
9 |
0,5 |
1,7 |
0,5 |
1,9 |
8,0±0,80 |
0,4±0,04 |
10 |
0,7 |
0,1 |
0,3 |
0,3 |
8,0±0,80 |
0,5±0,10 |
11 |
1,3 |
1,0 |
0,6 |
1,5 |
19,0±1,90 |
0,4±0,04 |
14 |
1,6 |
1,4 |
0,5 |
2,2 |
8,0±0,80 |
0,4±0,04 |
X |
1,0 |
1,4 |
1,0 |
1,0 |
9,8±1,00 |
0,6±0,10 |
500 мкР/ч (n=6) | ||||||
3 |
1,6 |
0,2 |
1,6 |
0,9 |
13,7±0,40 |
0,5±0,01 |
12 |
0,9 |
0,9 |
0,1 |
4,9 |
17,7±0,80 |
0,6±0,10 |
13 |
0,7 |
1,4 |
0,6 |
1,5 |
18,7±0,90 |
0,6±0,10 |
16 |
0,7 |
1,3 |
0,8 |
1,2 |
15,5±0,60 |
0,6±0,10 |
17 |
1,1 |
0,1 |
0,8 |
0,5 |
15,6±0,60 |
0,3±0,03 |
18 |
0,9 |
2,2 |
2,0 |
0,9 |
13,5±0,40 |
0,2±0,02 |
X |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,6 |
15,8±0,60 |
0,4±0,04 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
700 мкР/ч (n=9) | ||||||
1 |
0,7 |
1,1 |
0,5 |
1,4 |
2,0±0,20 |
1,1±0,10 |
4 |
1,1 |
2,3 |
1,3 |
1,4 |
7,0±0,70 |
0,7±0,10 |
5 |
0,7 |
0,1 |
0,2 |
0,3 |
7,5±0,80 |
0,7±0,10 |
7 |
1,6 |
1,1 |
1,3 |
1,2 |
2,0±0,20 |
1,0±0,10 |
8 |
0,6 |
1,9 |
0,6 |
1,9 |
6,0±0,60 |
1,0±0,10 |
9 |
0,8 |
2,0 |
1,1 |
1,3 |
1,0±0,10 |
0,9±0,10 |
32 |
1,5 |
2,2 |
0,5 |
2,9 |
1,0±0,10 |
0,6±0,10 |
35 |
1,3 |
3,0 |
2,8 |
1,2 |
3,2 ±0,30 |
1,2±0,10 |
36 |
0,7 |
1,1 |
0,5 |
1,4 |
7,0±0,70 |
0,7±0,10 |
Х |
1,0 |
1,6 |
1,0 |
1,4 |
4,0±0,40 |
0,9±0,10 |
Х - среднее значение по выборке; *р ³0,1
Репаративная способность клеток растений выраженная вычисленным коэффициентом, изменялась от 0,3 до 4,8 у контрольной выборки; от 0,1 до 2,8 у растений произрастающих на фоне 700 мкР/ч. Средние значения репаративной способности клеток данных выборок находились на одном уровне (1,6). Репаративная способность клеток растений, произрастающих на фоне 100 мкР/ч, варьировала от 0,1 до 4,8. Среднее значение было равно 1,8. На 300 мкР/ч значения этого коэффициента изменялись от 0,1 до 4,5. Среднее по выборке составило 1,4. У растений произрастающих на фоне 500 мкР/ч коэффициент репарации варьировал от 0,1 до 2,2. Среднее значение по выборке равно 1,0.
Общая
относительная активность генома клеток
растений в среднем по выборки
у исследованных фонов
Установлено, что средняя устойчивость генома клеток растений произрастающих на фоне 100 мкР/ч была максимальной (1,7) и варьировала от 0,4 до 2,8. Устойчивость генома клеток контрольной выборки и растений, произрастающих на фоне 700 мкР/ч, отличалась несущественно. Изменение значений устойчивости контрольной выборки составило от 0,5 до 2,0; у 700 мкР/ч – от 0,3 до 2,9. На 300 мкР/ч – среднее значение устойчивости генома было равным 1,0; варьирование значений находилось в диапазоне 0,2 до 2,2. На 500 мкР/ч – среднее значение устойчивости генома соответствовало 1,6; варьирование значений находилось в диапазоне 0,9 до 4,9.
Следует отметить, что среднее значение квазипороговой дозы было максимально у проростков произрастающих на фоне 500 мкР/ч – 15,8 Гр. А самая низкая «доза перегиба» у выборки с фона 700 мкР/ч – 4,0 Гр.
Резистентность
самих приспособительных
Таким образом, установлено, что по показателю антиоксидантной защиты растения исследованных фонов находились примерно на одном уровне. Репаративная способность клеток организма растений с разных фонов ПЕРФ также различались несущественно. Исключение составили растения, произрастающие на фоне 500 мкР/ч, которые имели минимальную репаративную способность.
Следует отметить, что общая относительная активность генома клеток минимальна у растений существующих на фоне 100 мкР/ч и существенно отличается от остальных растений, активность генома которых сохраняется по мере увеличения фона произрастания. Относительная устойчивость генома клеток была максимальна у растений фона 100 мкР/ч и минимальна - у фона 300 мкР/ч среди выборок. Потенциал устойчивости растений к острому облучению также был максимален у выборки произрастающей на фоне 100 мкР/ч. Способность выживания организма растения, произрастающего на фоне 700 мкР/ч при наложении радиационного стресса, резко снижалась.
Произрастание организма в условиях ПЕРФ налаживает определённый отпечаток на физиологические и цитолого-биохимические характеристики семенного потомства, которые являются адаптационным потенциалом существования данного вида в данных условиях обитания.
3.3. Вариабельность коэффициентов антиоксидантной защиты, общей активности генома, репарации, общей относительной устойчивости генома клеток и радиочувствительность ольхи кустарниковой
На рис.3.4А показаны вариационные кривые выживаемости проростков семенного потомства ольхи кустарниковой, выросшей в условиях разного ПЕРФ. Видно, что вариабельность выживаемости проростков растений, выросших в условиях γ-фона от 100 до 700 мкР/ч, изменяется нелинейно. Но во всех вариантах значение вариабельности выше в 2÷3,8 раза, относительно контроля (20 мкР/ч; табл.3.3). Вычисленный коэффициент корреляции (r=0,7) имеет положительное значение и указывает на достоверность этого явления. Максимальная вариабельность выживаемости была зафиксирована у семенного потомства ольхи, произрастающей в условиях 500 мкР/ч. Острое дополнительное облучение семян растений g-квантами 60Со дозой 250 Гр позволило определить изменение вариабельности выживаемости проростков, выросших из семян растений, хронически облучаемых природной радиацией (рис.3.4.Б; табл.3.3.). Установлено, что с увеличением экспозиционной дозы произрастания материнских растений уменьшается вариабельность выживаемости проростков на 10–50%. В варианте с облучением семян наблюдалась обратная корреляция (r = - 0,6) между вариабельностью признака и фоном произрастания семенного потомства.
Как упоминалось выше, важную роль в формировании адаптаций к экологическим условиям обитания у растений играют эволюционно сформированные антиоксидантные и геномные защитные системы клеток, определяющие общую устойчивость организмов
В табл.3.3. представлены значения коэффициентов вариабельности общей антиоксидантной защиты, общей активности генома, репарации и общей относительной устойчивости генома клеток проростков, семян растений, выросших в условиях разного ПЕРФ. Установлено, что вариабельность общей антиоксидантной защиты клеток проростков также увеличивается в 1,4-2,0 раза и изменяется нелинейно по мере роста γ-фона произрастания материнских растений.
Таблица 3.3.
Вариабельность (%) выживаемости проростков, коэффициентов антиоксидантной защиты, общей активности генома, репарации, общей относительной устойчивости генома клеток и радиочувствительность (Dq, Гр и tga) семенного потомства ольхи кустарниковой, выросшей в условиях разного ПЕРФ