Шпаргалка по «Вирусологии»

4. Гемолитическую  сыворотку перед постанов кой  опыта инактивируют прогреванием при температуре 56 °С в течение 30 мин. Для постановки основного опыта РСК, а также для титрования комплемента и антигена применяют гемолитическую сыворотку в тройном титре. Например, если титр гемолитической сыворотки 1: 1800, в реакции применя ют разведение сыворотки 1 : 600.

5. Эритроциты  получают из дефибринированной  кро ви барана. Кровь для удаления  пленок фибрина фильтруют через  трехслойный марлевый фильтр. Полученный  фильтрат центрифугируют, сыворотку  отсасывают и сливают, а эритро  циты промывают 3—4-кратным центрифугированием с изото - «ическим раствором хлорида натрия. При последнем промы вании эритроцитов надосадочный слой жидкости должен быть совершенно прозрачным. Из отмытых эритроцитов готовят 3% взвесь в изотоническом растворе хлорида натрия. Подготовив указанным выше способом ингредиенты, участвующие в РСК, приступают к титрованию гемолитической сыворотки, комплемента и антигена.

51. Использование в вирусологии  электронного микроскопа. Устройство электронного микроскопа. Создание электронного микроскопа связано с открытием электронов, их волновой природы и способности отклоняться от своего первоначального пути при прохождении через магнитные и электростатические поля. Таким образом, электрические и магнитные поля могут фокусировать пучок движущихся электронов и действовать на них, как действуют обычные стеклянные линзы в световом микроскопе. В 1931 г. немецкие ученые Кноль и Руска создали первый в мире просвечивающий электронный микроскоп. Источником электронов в электронном микроскопе служит нить накаливания — катод. Электроны, испускаемые катодом, ускоряются в электрическом поле с разностью потенциалов между катодом и анодом от нескольких десятков до сотен тысяч вольт в глубоком вакууме (до 10 мм рт. ст.). Магнитное поле конденсорной линзы сужает поток электронов в пучок, который проходит через исследуемый объект. При этом траектория движения электронов отклоняется под различными углами. Измененный пучок электронов попадает в поле линзы объектива, в котором формируется первичное промежуточное увеличенное изображение объекта. Это промежуточное изображение объекта увеличивается еще раз с помощью проекционной линзы и создает конечное изображение объекта. Конечное изображение возникает на флуоресцирующем экране и может быть экспонировано на фотопластинку или фотопленку. В современных электронных микроскопах первого класса максимальное увеличение достигает 2000000, а гарантируемое разрешаемое расстояние 0,14 нм. По характеру исследования объектов различают микроскопы просвечивающего типа, сканирующие, эмиссионные, теневые. Наиболее распространены электромагнитные микроскопы просвечивающего типа. Приготовление препаратов для электронной микроскопии. При работе с электронным микроскопом важное значение имеет каждый этап приготовления препаратов. Для просвечивающего электронного микроскопа исследуемые объекты должны быть в виде очень тонких срезов (до 40.. .60 нм) или вирусных суспензий, которые помешают на специальные медные сетки, или бленды. Для удержания суспензий над отверстиями сетки ее покрывают тонкой пленкой — подложкой, изготовленной из коллодия, и укрепляют напылением углерода. Различные структуры биологических объектов и пленка-подложка почти в одинаковой степени рассеивают электроны, и изображение объекта не будет выявлено. Поэтому необходимо предварительно создать различную электронную плотность между фоном и препаратом или между структурами биологических объектов. В качестве контрастирующих веществ наиболее широкое распространение получили 1...2%-е водные растворы фосфор но-вольфрамовой, фосфорно-молибденовой, осмиевой кислоты, растворы уранилацетата и уксуснокислого свинца. Методы негативного и позитивного контрастирования широко применяют при исследовании биологических объектов в виде суспензий. При негативном контрастировании контрастируюшее вещество высокой электронной плотности окружает объект более низкой плотности и он становится видным на более плотном окружаю щем его фоне. Время контрастированяя препарата составляет секунды (в среднем 15...40 с). Для получения позитивного контрастирования время реагирования контрастирующего вещества с объектом измеряется в минутах и часах. Соединяясь с определенным веществом объекта, атомы и молекулы тяжелых металлов повышают контрастность соответствующих структур, обеспечивая позитивное контрастирование объекта. При позитивном контрастировании избыток контрастирующего вещества фона объекта удаляется промыванием дистиллированной водой, и объект выглядит более плотным на более светлом окружающем фоне. При изучении молекул белков нуклеиновых кислот, а иногда и вирусов также применяют методы контрастирования оттенением, путем испарения металла в вакууме. Атомы металла разлетаются от места распыления под некоторым углом к исследуемому объекту и осаждаются на его поверхности слоем различной толщины. Вследствие этого участки объекта имеют различную электронную плотность и возникает изображение объекта. Другой метод — углеродных реплик с предварительным оттенением. Сущность реплик заключается в том, что рельеф поверхности объекта воспроизводится с помощью тонкой пленки, которая затем исследуется в электронном микроскопе. Существует несколько методов изготовления реплик. Электронно-макроскопическая диагностика а морфология вару сов. Изучение морфологии вирусов — важный этап при определении их таксономической принадлежности. Материалом для электронно-микроскопических исследований вирусов могут быть смывы из глаз, со слизистых оболочек носовой и ротовой полостей, содержимое кишечника, срез пораженного участка эпидермиса кожи или оспенные корочки, кусочки органов и тканей больных и павших животных. При работе с вирусами в лаборатории исследуют вируссодержащую культуральную жидкость, аллантоисную жидкость куриного эмбриона, кусочки органов и тканей зараженных животных. При подготовке препаратов для таких исследований большое значение имеют концентрация вируса в материале и степень его контаминации различными балластными веществами. В зависимости от этих факторов и выбирают методику подготовки исходного материала. В большинстве случаев необходима предварительная очистка и концентрация вирусов. Кусочки органов, тканей и фекальный материал гомогенизируют, а затем концентрируют ультрацентрифугированием или другими методами. Для выделения вируса из зараженных клеток культуры тканей их предварительно разрушают в стеклянном гомогенизаторе ультразвуком или замораживанием—оттаиванием, затем осветляют низкоскоростным центрифугированием и концентрируют. При исследовании кусочков пораженной кожи или корочкового материала при болезнях, вызываемых вирусами покс-группы, используют метод давленых препаратов или метод отпечатков. Материал смывов предварительно гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе, затем грубо фильтруют и концентрируют ультрацентрифугированием или ультрафильтрацией. Без предварительной очистки и концентрации препараты можно готовить из вируссодержащей культуральной жидкости культуры тканей и аллаi-iтоисной жидкости зараженною куриного эмбриона, если титр вируса в них не меньше 10 в 5 ЛД 50. Подготовка препаратов для электронной микроскопии. На каплю вируссодержащей жидкости помешают сеточки пленкой вниз. Через 1.. .2 мин адсорбции вируса на пленку избыток жидкости удаляют фильтровальной бумагой и контрастируют 1...2%-м водным раствором фосфорно-вольфрамовой кисло ты или 1...2%-м раствором уранилацетата, помещая сетку пленкой вниз на каплю контрастирующего вещества. Через 15...40 с избыток контрастирующего вещества удаляют фильтровальной бума гой, подсушивают под лампой или в термостате и просматривают в электронном микроскопе. Иногда после адсорбции вируса на пленку или контрастирования сеточку промывают несколькими каплями дистиллированной воды. Иммунная электронная микроскопия. Это специфический метод для выявления (идентификации) и титрования вирусов. Он позволяет выявить вирус в образцах, в которых его нельзя обнаружить при простой электронной микроскопии. При взаимодействии вируса со специфической антисывороткой образуется комплекс в виде агрегатов вируса и образования вокруг вирусной частицы ореола из окружающих антител. Образование агрегатов вирусных частиц позволяет концентрировать вирус при более низких оборотах центрифуги, чем при концентрации нативного вируса. Препараты готовят из предварительно очищенной суспензии вируса, смешивая ее с различными разведениями специфической антисыворотки. Через 18 ч контакта смесь концентрируют центрифугированием при 17000...З1000 мин- в течение 1...1,5 ч. Оса док ресуспендируют в дистиллированной воде: контрастируют и помещают на предметные сетки с нитроцеллюлозной подложкой. Сеточки подсушивают и просматривают под электронным микро скопом при увеличении в 30000...50000. Электронно-микроскопическая экспресс-диагностика болезней животных (на примере вируса оспы) методически осуществляется следующим образом. Используют биопсийный материал прижизненно или материал от убитых или недавно павших от оспы животных. Можно брать срез верхушки оспины пораженного эпидермиса кожи животных. Препарат готовят методом давленых препаратов для адсорбции на сеточки вирионов из взятых для исследования материалов и методом отпечатков. Исследования проводят на электронном микроскопе с разрешающей способностью не более 0,5 им. диагноз считается положительным при наличии в препаратах одиночных или расположенных группами ос пенных вирионов характерной кирпичеобразной формы с закругленными краями, размером 250...300 х 150...200 нм. При отсутствии в препаратах вирионов ставят биопробу на восприимчивых животных, используя оставшийся материал; исследования проводят в установленном порядке.

52. Метод ДНК-зонда. Метод ДНК-зондов основан на уникальном свойстве генетического материала организма — молекулы ДНК, состоящей из мононуклеотидов, — образовывать двойную спираль путем комплементарного соединения азотистых оснований. Молекула ДНК образует двойную спираль, при которой азотистые основания первой цепи строго комплементарно соединяются водородными связями с азотистыми основаниями второй цепи, где аденин соединяется с тимином, гуанин — с цитозниом. Принцип метода состоит в том, что структуру двойной спирали ДНК (или РНК) можно разрушить нагреванием; при этом происходит разделение цепей. Этот процесс называется денатурацией, или плавлением ДНК. Температуру, при которой происходит разделение цепей ДНК, называют точкой плавления, она составляет 85.. .95 °С. Этот процесс обратимый, т. е. при снижении температуры происходит восстановление связей — образование двойной спирали. Это проявление называют ренатурацией. Если при ренатурации взяты молекулы из разных источников, то говорят о гибридизации. Способность к гибридизации двух препаратов нуклеиновых кислот служит строгим тестом на комплементарность их последовательностей. Гибридизацию можно осуществлять в растворе или на фильтре (капроновом или нитроцеллюлозном). Удобным для работы является метод гибридизации с использованием фильтров. При этом один из препаратов ДНК иммобилизуют на нитроцеллюлозных фильтрах, на которых молекула ДИК адсорбируется. Затем погружают их в раствор, содержащий второй препарат денатурированной ДНК (ДНК-зонд). Связывание ДНК-зонда происходит только в том случае, если молекула имеет последовательность нуклеотидов, комплементарную первоначально адсорбированной на фильтре молекуле ДНК. Эффективность гибридизации определяют по количеству метки, оставшейся на фильтре. Метод обладает высокой чувствительностью. При этом необходимо иметь меченные радиоактивным изотопом РНК- или ДНК-зонды, идентификация которых с исследуемой молекулой регистрируется с помощью радиоавтографии. В качестве ДНК-зонда используют меченые копии ДНК с известной последовательностью нуклеотидов. Метод блоттинга по Саузерну. Для идентификации гена молекулу ДНК генома расщепляют с помощью ферментов рестриктаз на куски примерно по 15...20 тыс, пар нуклеотидов. Расщепленный таким образом геном подвергается электрофоретическому фракционированию в агаровом геле. После этого фракции ДНК денатурируют нагреванием и переносят из агарозного геля на нитроцеллюлозный фильтр, где иммобилируют. Процесс переноса ДНК напоминает промокание (по-английски — блоггинг) и назы вается методом блоттинга по Саузерну. Сущность блоттинга заключается в том, что агарозный гель помещают на фильтровальную бумагу, замоченную в концентрированном соленом растворе, затем на гель накладывают нитроцеллюлозный фильтр и сверху помещают сухую фильтровальную бумагу. Соленой раствор впитывается в сухую бумагу; чтобы это произошло, он должен пройти сквозь агарозный гель и затем через нитроцеллюлозный фильтр. При этом ДНК переносится вместе с раствором, но задерживается нитроцеллюлозой. Иммобилизованную таким образом ДНК можно гибридизировать на месте с радиоактивным зондом. Со специфическим зондом будут гибридизироваться только комплементарные ему фрагменты. Так как зонд радиоактивный, то гибридизацию можно обнаружить с по мощью авторадиографии. Каждая комплементарная последовательность проявляется в виде радиоактивной полосы, местоположение которой определяется размером фрагмента ДНК. Метод блоттинга как высокочувствительный и точный широко применяют в криминалистике, медицине и ветеринарии. В последние годы разрабатывается новый метод анализа ДНК, так называемая генная дактилоскопия. Он включает следующие этапы: выделение ДНК, фрагментация ее с помощью ферментов — рестриктаз, фракционирование с помощью электрофореза в геле. Фрагменты, содержащие гипервариабельные участки, вы являют с помощью специального зонда — «пробы Джеффриса», с которой они связываются путем гибридизации. Участки гибридизации выявляют путем авторадиографии. В настоящее время метод молекулярной гибридизации разработан для диагностики инфекционных болезней сельскохозяйственных животных, Например, для обнаружения вирусов ящура, чумы свиней, чумы птиц, энтеровирусов и т. д.

53. Вирус болезни Ауески. Вирус относится к семейству Herpesviridae. Вирионы содержат двуспиральную ДНК; имеют шарообразную форму; размер 180-190 нм. Суперкапсидная оболочка состоит из 162 капсомеров, которые имеют кубический тип укладки и наружную липоидную оболочку. Репродукция вируса происходит в ядре клетки. Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, быстро инактивируется желчью. Устойчив к широким колебаниям рН (5-9). Устойчивость вируса к высоким температурам сравнительно низкая. Холод консервирует вирус: в 50%-м буферном растворе глицерина сохраняет жизнеспособность до 3 лет. Быстро инактивируется в 3%-м растворе щелочи, 5%-й хлорной извести. Культивирование. Хорошо культивируется в организме взрослых кроликов при внутримышечном, подкожном и внутримозговом заражении, в 10-12-суточньих куриных эмбрионах на хорион-аллантоисной оболочке или в желудочном мешке. В первичных культурах фибробластов куриного эмбриона, клеток почек свиней, крольчат, крупного рогатого скота и обезьян, легких эмбриона свиней вызывает ярко выраженное цитопатогенное действие в виде округления клеток и образования многоядерных гигантских клеток. длительное культивирование вирулентных штаммов вируса в куриных эмбрионах и культурах клеток приводит к ослаблению вирулентности с сохранением иммуногенных свойств, что используют для получения вакцинных штаммов. Антигенная вариабельность и активность. Антигенные варианты не установлены. Вирус продуцирует образование вируснейтрализующих комплементсвязывающих и преципитирующих антител, которые можно обнаружить с помощью РН, РСК и РДП. Специфические комплементсвязывающие антитела появляются в сыворотке крови через 3 сут после заражения; титр не снижается в течение 30-40 сут. Вирус нейтрализующие антитела появляются на 5-7-е сутки и достигают максимума через 3-4 нед; титр сохраняется до 1,5 лет. Вирус болезни Ауески (ложное бешенство) вызывает острую септическую болезнь с поражением центральной нервной системы. Патогенез. Хотя вирус обладает тропностью к нервной ткани, патогенез заболевания имеет свои особенности в зависимости от способа заражения, вида и возраста животных. При проникновении возбудителя через слизистую оболочку ротовой полости и верхних дыхательных путей у свиней в месте внедрения (воротах инфекции) происходит быстрая репродукция вируса, а у остальных видов животных — лишь нёзначительное увеличение его концентрации. После короткого периода он проникает в мозг прямым нейролимфогенным путем по обонятельному, тройничному и языкоглоточному нервам. Репродукция вируса вызывает острое воспаление мозга и его оболочек с развитием энцефалита. При проникновении через кожу вирус довольно быстро репродуцируется в месте внедрения. Затем гематогенным и лимфогенным путями распространяется по всему организму и вызывает на ряду с нервными явлениями симптомы тяжелой септицемии. При вовлечении в патологический процесс дыхательной и пищеварительной систем могут развиваться признаки отека легких, пневмония и диарея. Клинические признаки. Инкубационный период от 1,5 сут до 15-20 сут, зависит от метода заражения, вирулентности вируса и устойчивости животного. Болезнь Ауески характеризуется при знаками поражения головного и спинного мозга, сильным зудом и расчесами (у всех животных, кроме свиней). Патолого-анатомические изменения. В местах расчеса — облысение, кожа повреждена, подкожная клетчатка геморрагически инфильтрирована. В паренхиматозных органах застойные явления: очаги некроза и катаральной бронхопневмонии; под эпикардом — полосчатые кровоиалияния; на слизистой оболочке мочевого пузыря — нередко кровоизлияния. Кровеносные сосуды мозговых оболочек расширены, мозг и оболочки отечны. Эпизоотологические особенности. Болезнью Ауески болеют все виды сельскохозяйственных животных, пушные звери, кошки, собаки, синантропные грызуны. Вспышка болезни Ауески в мелких хозяйствах ограничивается поражением 2-3 пометов и затухает относительно быстро. В крупных откормочных и репродукторных хозяйствах эпизоотия приобретает затяжной характер и протекает в форме явного и скрытого процесса. На зверофермах она протекает с широким охватом поголовья за счет скармливания не обезвреженных мясных продуктов и боенских отходов. Диагноз. Ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патолого-анатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Патологический материал: при жизни — кровь, носовые секреты; от абортировавших животных — плацента и плоды; от трупов — головной мозг, кусочки легких, селезенки, печени, лимфатических узлов, ммндалин. Схема лабораторной диагностики. 1. Экспресс-методы: РИФ, РНГА, электронная микроскопия, обнаружение специфических телец-включений II. Вирусологические исследования: 1) выделение вируса на кроликах, кошке, культуре клеток; 2) идентификация выделенного вируса в РИФ, РДП, РН, РИГА, ИФА. 3). Ретроспективная диагностика: РН, РИГА, РДП, ИФА. Дифференциальный диагноз. Необходимо исключить у всех видов животных бешенство, а у свиней — чуму, сальмонеллез, колибактериоз (отечная болезнь), листериоз, грипп, болезнь Тешена, пастереллез, отравления поваренной солью, авитаминозы, менингиты, энцефалиты различной природы. Срок исследования — до 7 сут. Иммунитет. После переболевания прочный и продолжительный. Молодняк имеет пассивный иммунитет за счет материнского молозива продолжительностью до 5...7 сут. Лечение. Специфические средства лечения не разработаны. Для пушных зверей с профилактической и лечебной целью применяют гамма-глобулин. Специфическая профилактика. Применяют инактивированные и живые вакцины (эмбриональная гидроксидалюминиевая формолнакцина ВГНКИ, сухая культурная живая вирусвакцина против болезни Ауески крупного рогатого скота, живая вакцина из штамма болезни Ауески БУК-628).

54. Вирус везикулярного стоматита.  Возбудитель везикулярного стоматита — РНК-содержащий вирус.   Впервые  его  природу  описал   в   1926—1927  гг.   W.   Cotton (1926,   1927).  Вирус  относится  к семейству рабдовирусов — серотип Индиана является типовым видом этого семейства. Типичная вирусная частица — пулевидной формы, размером 70x175 нм, имеет центральный канал различной длины и ширины. Палочковидные субъединицы его прикреплены к нити нуклеиновой кислоты, свернутой в спираль, состоящую из 30 витков с наружным диаметром 49 нм и 4 витков, находящихся в полусферической части, с меньшим диаметром. Спиральный нуклеокапсид заключен в оболочку толщиной 18 нм, содержащую фосфолипиды клетки хозяина. На  поверхности  оболочки характерные  ворсинки длиной   10 нм, соединяющиеся с внутренним спиралевидным компонентом вирусной частицы. Геном вируса — односпиральная молекула РНК, молекулярной массы 4—4,5-106; РНК, выделенная из вирионов (около 2%), неинфекционна. Основные белковые компоненты вируса Р2 и Р5, а также компоненты Р1 и Р4 находятся в поверхностной оболочке вируса и частично погружены в липидную мембрану,  белковый компонент РЗ, представляющий  белок ядра вириона,  изолирован  оболочкой  от  внешней  среды   (Гертон  и Джон, 1973). При размножении вируса образуются частицы трех типов: полноценные  инфекционные  В-частицы,  неинфекционные дефектные LT- и Т-частицы (подробно их структура и свойства описаны в книге В. Н. Сюрина и Н. В. Фоминой, 1979).

Вирус хорошо сохраняется при температуре —40 - 70 °С и в лиофилизированном состоянии. В 50%-ном забуференном растворе глицерина при рН 7,5 и температуре 4—6°С вирус не погибает около 4 месяцев. В поилках, кормушках, в подстилке он сохраняется 3—6 дней, на земле при 4—6°С (в тени) —в течение месяца, при  37 °С  разрушается  за   3—4  дня,   при  60°С   за   20—30   мин; устойчив в зоне рН 4—11,5   (оптимальная рН — 6—8), при рН 2 и  12,6  РНК вируса  разрушается;  2%-ный  раствор  едкого натра и температура  100 °С убивают вирус почти мгновенно.  Он имеет два иммунологически различных серотипа — Нью-Джерси   (2 подтипа)  и Индиана. У последнего 3 подтипа, различающихся в РН, иммунологически в опытах перекрестного заражения и по вирулентности для животных   (R.  P.  Hanson,   1975).  Подтипы имеют общие   антигены,   не   позволяющие   их   надежно   дифференцировать  в  РСК  и в  РДП. Для  обоих  серотипов  вируса  свойствен общий растворимый антиген, однако в перекрестных реакциях РСК и РДП могут быть результаты положительными только при  использовании   значительных   концентраций   испытуемых   антигенов или антител к ним.

Вирус  легко   культивируется   в   первичных  культурах   клеток тканей куриного эмбриона (ККЭ) и почек крупного рогатого скота (БП), свиней (СП), овец, морских свинок, крольчат, мышей, а также во многих перевиваемых линиях клеток различного происхождения (ВНК-21, Hela, KB, КЭМ, СОЦ, СПЭВ, Vero, ПП и др.). При размножении вируса во всех практически испытанных типах и видах культур клеток уже с первых пассажей развиваются цитопатические изменения. Титрование его легко удается как по ЦПД, которое проявляется на 2—4-й день после заражения, так и но методу бляшек. Титр вируса колеблется от 105 до 108 ЭДбо/мл- При репродукции вирионы обнаруживаются в цитоплазме клеток, из которых они выделяются не взрывом, а непрерывно, причем эклиптическая фаза продолжается 1—2 ч, а время выделения составляет примерно 2—3 мин. Обычно пораженная вирусом клетка живет 2—3 дня (до полного истощения энергетического запаса), однако обнаружены частицы вируса, персистирующего в хронически инфицированной культуре клеток, обладающие низкой цитопатогенностью, апатогенностыо для мышей при заражении в мозг. У вируса ярко выражены интерферирующие свойства. Поэтому при отработке оптимальных условий выделения и накопления вируса предпочтительно использовать 1—10% (и менее) суспензии вируссодержащего материала.

Культивирование возбудителя удается при заражении на ХАО и в аллантоисную полость 7—10-дневных куриных эмбрионов. Титр вируса в аллантоисной жидкости может достигать 107-5— 108 ЭДбо/мл- В эксперименте везикулярный стоматит легко воспроизводится (при заражении в слизистую языка) на крупном рогатом скоте, лошадях, мулах, ослах, оленях, косулях; на свиньях — при заражении в кожу пятачка, венчика или межкопытной щели; на морских свинках — при внутрикожном заражении в плаитарную поверхность лапок. Белые мыши и крысы, хомяки чувствительны к заражению вирусом в мозг, чем моложе эти животные, тем восприимчивее они к данной инфекции. Чувствительны к вирусу при заражении в слизистую языка цыплята, утки и гуси. Возможно экспериментальное заражение голубей, енотов и лягушек. Не защищен в этом отношении и человек, особенно при манипуляции с вирусом и при контакте с больными домашними и дикими животными. Установлено, что многие штаммы вируса размножаются в мухах-дрозофилах. В 1967 г. из колонии комаров, собранных во время эпизоотии в Новой Мексике, был выделен вирус везикулярного стоматита  (Sudla et al., 1967).

Эпизоотологические данные. В естественных условиях болезнь протекает в виде энзоотии, реже эпизоотии, поражает от 5 до 90% (в среднем 30%) животных. Энзоотии могут повторяться ежегодно, но обычно они регистрируются с промежутком в 2—20 лет. В последнее время по сравнению с лошадьми и свиньями чаще болеет крупный рогатый скот.  Сведения о естественном заболевании  овец  и  коз  разноречивы,  хотя   в  эксперименте  они восприимчивы к вирусу. Из диких животных болеют олени, косули, еноты и др.

О способе передачи возбудителя в природе имеются различные суждения. Болезнь обычно наблюдается в летний влажный пастбищный период, который совпадает с периодом активности насекомых. С переходом на стойловое содержание и наступлением холодов или засухи болезнь, как правило, прекращается. В естественных условиях животные могут заражаться (но не всегда) при контакте больных со здоровыми, определенную роль в этом отношении играют инфицированные корма, вода, доильные установки, возможна механическая передача возбудителя человеком и насекомыми (комарами, москитами, слепнями и др.).

Клинические   признаки.   Инкубационный   период   болезни — от 1 до 12 суток, чаще равен 2—5 суткам. Начальный период болезни  характеризуется   появлением   на  слизистой  оболочке  ротовой полости у всех зараженных животных красноватых пятен (папул), размером от 2 до 20 мм. Через сутки на их месте у 30% животных развиваются везикулы размером от макового зерна до голубиного яйца. Обычно через сутки, а иногда и быстрее везикулы лопаются, обнажая ярко-красную сочную эрозийную поверхность, а папулы, на месте которых не образовались везикулы, обезвоживаются, спадают и некротизируются.